T细胞亚群在再生障碍性贫血外周血的表达及临床意义

王良妥，张湘兰，谭日标

(阳江市人民医院，广东 阳江 529500)

T细胞亚群在再生障碍性贫血外周血的表达及临床意义

王良妥，张湘兰，谭日标

(阳江市人民医院，广东 阳江 529500)

目的探讨再生障碍性贫血治疗前后外周血T细胞亚群、肿瘤坏死因子(TNF-α)及HLA-DR抗原的变化。方法选取2008-2010年于我院住院治疗的38例再生障碍性贫血患者为观察组，以同期门诊体检30例健康者做为对照组。采用流式细胞仪检测两组T淋巴细胞亚群及HLA-DR抗原，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α。结果与对照组相比，观察组治疗前、显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)；、HLA-DR及TNF-α水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。治疗后观察组、显著上升、HLA-DR及TNF-α水平显著下降，与治疗前相比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论再障患者发病与免疫功能异常密切相关，存在T淋巴细胞亚群的失调及T淋巴细胞异常活化。

再生障碍性贫血；T细胞亚群；肿瘤坏死因子；HLA-DR

再生障碍性贫血(AA)是较为常见且严重的血液病之一，其发病机制复杂、病因未明。目前认为：由免疫介导的造血功能抑制在再生障碍性贫血的发病过程中起重要作用，而T淋巴细胞是细胞免疫反应中的主要效应细胞[1-2]。为探讨再生障碍性贫血外周血T细胞亚群、肿瘤坏死因子(TNF-α)及HLA-DR抗原的变化，我们对2008-2010年于我院住院治疗的38例再生障碍性贫血患者分析如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2008年8月至2010年8月于我院住院治疗的38例再生障碍性贫血患者为观察组，年龄15～68岁，平均32岁。其中男23例，女15例；重型再生障碍性贫血(SAA)25例，慢性再生障碍性贫血(CAA)13例。患者自发病至住院时间为18 d～25个月，所有患者均符合全国再障诊断标准。选取同期门诊体检的30例健康者为对照组，年龄16～70岁，平均33岁，男18例，女12例。两组在年龄、性别差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 检测方法

1.2.1 T淋巴细胞亚群及HLA-DR检测 取外周静脉血4 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，取4个FACS试管，分别向其中加入组合的荧光CD3、CD4、CD8和HLA-DR抗体，再加入抗凝全血100 μL，孵育15 min后加溶血剂，等完全溶血后立即上流式细胞仪检测。

1.2.2 外周血TNF-α检测 抽取外周静脉血8 ml，EDTA抗凝后将血液离心，取上清，放置-20℃冰箱待用。按说明书采用ELISA法进行检测。

1.3 治疗方法 普通型再障给予丙酸睾丸酮或康力龙加环胞菌素治疗；重型再障给予环胞素(CSA)、抗胸腺淋巴细胞球蛋白(ATG)加康力龙治疗。按血液病诊断及疗效标准评估治疗效果。基本治愈、明显缓解加明显进步为治疗有效。

1.4 统计学处理 处理数据采用SPSS13.0统计软件，计数资料用均数±标准差(±s)表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组治疗前与对照组在T细胞亚群、HLA-DR及TNF-α平比较 与对照组相比，观察组治疗前显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)；、HLA-DR及TNF-α水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)，见表1。

2.2 治疗前观察组SAA与CAAT细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较 较CAA患者，SAA患者显著降低，、HLA-DR及TNF-α水平显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

2.3 观察组临床疗效及治疗前、后T细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较 38例治疗组患者经治疗临床基本治愈5例，明显缓解13例，明显进步8例，无效12例，总有效率为68.4%。和治疗前相比，治疗后观察组、显著上升，CD8+、HLA-DR及TNF-α水平显著下降，与治疗前相比差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表1 两组T细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较()

表2 SAA与CAAT细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较(±s)

表2 SAA与CAAT细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较(±s)

注：与CAA相比，*P＜0.01。

组别CAA SAA例数13 25 CD3+(%) 63.16±8.32 64.42±7.18 CD4+(%) 35.68±6.82 28.35±7.21* CD8+(%) 29.98±5.76 37.20±5.97* CD4+/CD8+ 1.35±0.72 1.09±0.36* HLA-DR(%) 12.10±3.78 18.26±4.15* TNG-α(μg/L) 0.82±0.28 1.19±0.32*

表3 观察组治疗前后T细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较（±s）

表3 观察组治疗前后T细胞亚群、HLA-DR及TNF-α水平比较（±s）

注：与治疗前相比，*P＜0.01。

时间治疗前治疗后例数38 38 CD3+(%) 64.24±7.67 63.87±7.18 CD4+(%) 31.78±7.80 38.19±8.12* CD8+(%) 31.67±6.96 24.25±5.27* CD4+/CD8+ 1.21±0.37 1.64±0.47* HLA-DR(%) 16.72±3.15 10.26±3.17* TNF-α(μg/L) 0.91±0.38 0.71±0.18*

3 讨论

再生障碍性贫血的发病机制目前不是很清楚，最近的研究表明再障患者的发病与T淋巴细胞亚群数量、比例失调、功能和表型明显改变有关[3]。表1可见，观察组治疗前显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。T细胞是机体免疫系统中的主要效应细胞与对于维持机体免疫状态平衡起重要作用，二者作用相反[4-5]。辅助造血抑制造血显著降低说明机体造血功能抑制增强。抑制造血的作用主要是通过细胞毒作用直接抑制骨髓造血干细胞增殖，同时它也可以通过大量分泌细胞因子间接抑制造血功能。HLA-DR存在于巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞表面，除具参与抗原提呈外，还具有激活同种异型免疫反应作用，是T淋巴细胞活化的标志之一[6]。TNF-α主要存在于和细胞的胞浆中，再障患者骨髓中高水平的TNF-α主要由活化的T淋巴细胞产生[7]。观察组、HLA-DR及TNF-α水平显著高于对照组，说明T细胞亚群及活化T细胞的变化，引起淋巴因子的分泌失衡，产生过量的造血抑制性淋巴因子，参与再生障碍性贫血的发病过程。再障患者骨髓造血衰竭与活化细胞毒性T淋巴细胞有关，活化的T淋巴细胞释放出TNF-α、IFNγ等造血负调控因子，使机体造血抑制活性明显增强，导致骨髓造血功能衰竭。由表2可见，重型再障患者与慢性再障患者相比，CD8+显著降低、HLA-DR及TNF-α水平显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，这更有力地证实了T淋巴细胞介导的免疫反应在再障发病机制中发挥重要作用。经免疫治疗后，表3结果显示，再障患者和治疗前相比，治疗后观察组、显著上升、HLA-DR及TNF-α水平显著下降，与治疗前相比差异有统计学意义(P＜0.05)。经免疫治疗后，患者辅助T细胞功能增强，细胞免疫功能得到调节。免疫治疗能够显著抑制T淋巴细胞活化，减少异常增多的、调节比例。同时通过减少TNF-α等造血负调控因子，使造血抑制作用减弱，从而使造血功能恢复。有研究证实，免疫治疗对于治疗重型再障有效率可达60%左右，很大程度上改善了药物疗效，特别是远期疗效，提高了患者的长期生存率及生存质量[8]。

综上所述，再障患者发病与免疫功能异常密切相关，T淋巴细胞亚群的失调及T淋巴细胞异常活化在发病机制中发挥重要作用。

[1]Pene F,Claessens YE,Muller O,et al.Role of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt and mTOR/P70S6-kinase pathways in proliferation and apoptosis in multiple myeloma[J].Oncogene,2002,21 (43)∶6587-6597.

[2]Huppa JB,Gleimer M,Sumen C,et al.Continuous T cell receptor signaling required for synapse maintenance and full effector potential[J].Nat Immunol,2003,4(8)∶749-755.

[3]Dufour C,Corcione A,Svahn J,et al.Interferon gamma and tumour necrosis factor alpha are overexpressed in bone marrow T lymphocytes from paediatric patients with aplastic anaemia[J].Br J Haematol,2001,115(4)∶1023-1031.

[4]Dufour C,Ferretti E,Bagnasco F,et al.Change in cytokine profile pre-and post-immunosuppression in acquired aplastic anemia[J]. Haematologica,2009,94(12)∶1743-1747.

[5] Solomou EE,Rezvani K,Mielke S,et al.DeficientFOXP3+T regulatory cells in acquired aplastic anemia[J].Blood, 2007,110(5)∶1603-1606.

[6]余寿益,田华琴,郎江明,等.再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞亚群及HLA-DR抗原的变化及临床意义[J].临床血液学杂志,2006,19(5)∶309-310.

[7]傅晋翔,黄海雯,李 军,等.再生障碍性贫血骨髓T淋巴细胞高表达肿瘤坏死因子[J].中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(2)∶126-127.

[8]谢晓恬.儿童再生障碍性贫血的规范诊治现状及研究进展[J].临床儿科杂志,2008,26(8)∶650-654.

Expression of T-lymphocyte subsets and its clinical significance in aplastic anemia.

WANG Liang-tuo,ZHANG Xiang-lan,TAN Ri-biao.People's Hospital of Yangjiang City,Yangjiang 529500,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the changes of T-lymphocyte subsets,tumor necrosis factor(TNF-α) and HLA-DR before and after the treatment of aplastic anemia.Methods38 cases with aplastic anemia from 2008 to 2010 in our hospital were selected as the study group,while 30 healthy subjects were chosen as the control group. T-lymphocyte subsets and HLA-DR,TNF-α in the two groups were detected by Flow Cytometry(FCM)and ELISA, respectively.ResultsBefore the treatment,the serumandlevel in the study group were significantly lower than that in the control group(P＜0.01),and theHLA-DR and TNF-α level were significantly higher(P＜0.01).After the treatment,theandlevel in the study group increased and the,HLA-DR and TNF-α level decreased,with statistically significant difference compared with that before the treatment(P＜0.05). Conclusion The maladjustment of immune system is closely related to the incidence of aplastic anemia,exibiting disbalance of T-lymphocyte subsets and abnormal activation of T cells.

Aplastic anemia;T-lymphocyte subsets;Tumor necrosis factor;HLA-DR

R556.5

A

1003—6350（2011）14—093—03

王良妥（1977—），男，广东省阳江市人，主治医师，本科。

2011-04-12)

·检验与临床·