射频治疗山羊软骨损伤的研究

吴华贵 黄伟东 林春豪

(广东省珠海市香洲区人民医院 广东珠海 519000)

射频治疗山羊软骨损伤的研究

吴华贵 黄伟东 林春豪

(广东省珠海市香洲区人民医院 广东珠海 519000)

目的 研究射频治疗软骨损伤的可行性。方法 对山羊进行软骨损伤造模,对软骨损伤面进行射频治疗,观察疗效。结果经过射频处理的软骨损伤面比未经处理的软骨损伤面光滑平整,对照组细胞死亡率明显高于实验组。结论 射频技术是一种治疗软骨损伤安全而有效的方法。

软骨损伤 双极射频

在临床上,将射频技术应用于治疗软骨的退变和损伤。基础研究上建立山羊软骨退变的模型,观察射频对退变软骨的影响。现将研究结果报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料

选取10只健康山羊,10～12个月龄,重14～18kg,雌雄不限。双侧膝关节同时进行造模手术。术前30m in肌肉注射0.03mg/kg的阿托品。退去山羊双侧后膝关节手术区域毛发,常规消毒,定位手术切入点。关节腔穿刺,切口长约6cm。灌洗后置关节镜检查、摄影。观察关节镜获取画面,在直视状态下,沿髌骨内侧支持带呈“Z”字形纵向切开,外侧支持带纵向切开。关节腔灌洗,拔除关节镜,采用1号线重叠缝合外侧支持带,延长松解缝合内侧支持带,关闭伤口。术中净滴抗生素,术后肌注抗生素,持续5d,以防发生感染。手术前后分别对山羊两侧膝关节进行CT扫描,以待留作实验观察。

1.2 双极射频处理

造模手术3个月后,采用双极射频进行治疗。选用山羊左膝为实验侧,右膝为对照侧。在左膝髌骨前正中切开长6cm的切口,沿髌骨外侧支持带Z形切开,将髌骨向外翻转,暴露髌骨关节面,使用双极射频对退变软骨进行消融治疗。设定射频能及为I级,处理表面纤维化或由小裂纹的软骨面时,与软骨面相距1mm,处理时间在1～2s左右;处理非全层软骨剥脱面时,将边缘处的不稳定软骨全部消融,时间控制在3～4s,射频头均匀移动,避免在一个地方停留较长时间。同时采用生理盐水持续灌洗关节腔,避免射频所产生的热量伤害软骨。处理完毕后进行缝合。

右膝采用相同方法,暴露髌骨关节面,不使用双极射频进行治疗,仅进行观察。

1.3 观察指标

1.3.1 即刻反应观察 从中选取5只山羊,在射频处理后,观察左膝经射频处理部位的即刻反应,观察右膝软骨退变情况。对实验侧和对照侧分别进行光镜、扫描电镜观察。10%中性甲醛固定软骨组织,脱钙3d,石蜡包裹切片,染色剂染色后,用光镜观察软骨大体退变情况;电镜液固定标本,漂洗、乙醇脱水,采用扫描电镜进行观察。

1.3.2 后期观察 射频处理后3个月,将余下5只山羊处死,并进行组织学观察和流式细胞学检测。组织学观察方法与上述方法类似。流式细胞学检测部位为实验侧和对照侧软骨。取软骨样品0.5cm×0.5cm,剪碎成0.1cm×0.1cm碎片。将碎片机械匀浆,3次,分别抽取匀浆液。离心、弃上清,沥干加入PBS液体1.5m L,细胞固定后放入冰箱过夜。过夜后,离心、弃上清,余液混匀,加入PBS液体2m L,再离心、弃上清,余液混匀,约留200uL。将PI终浓度调整为50mg/m L,过滤后送入流式细胞仪,自动计算正常细胞与死亡细胞的占比,计数数目为8000～10000个。

2 结果

2.1 山羊造模结果

造模手术3个月后观察山羊髌骨软骨面,出现不同程度的退变:软骨失去光泽、弹性,软化,表面不够光滑,是Ⅰ级退变的表现;若软骨表面出现细小裂纹,下极被滑膜组织覆盖,则是Ⅱ级退变的表现。

光镜观察结果显示,山羊髌骨内侧面软骨表层出现纤维样病变,少量软骨细胞坏死扫描电镜结果显示,山羊髌骨内侧面粗糙,有小裂纹出现,胶原排列紊乱或出现断裂。

2.2 即刻反应观察结果

光镜观察结果显示,实验组表面比较平坦,纤维化组织和程度减少,表层裂纹融合。实验组治疗区周边软骨组织与对照组相比,无明显差异。

扫描电镜观察结果显示,Ⅰ级退变软骨治疗后光滑平整;Ⅱ级退变软骨治疗后,表面裂纹融合,软骨面较光滑。

2.3 后期观察结果

光镜观察结果显示,实验侧软骨表面比较光滑,有些部位出现裂纹,但裂纹深度较浅。对照侧软骨面裂纹明显比试验侧的深,较多软骨细胞坏死,并可见细胞克隆样增生。

扫描电镜观察结果显示,实验侧仍然光滑平整,表面裂纹较少,粗糙部位较少,对照侧粗糙程度加深,软骨表面出现各种裂纹。

流式细胞学检测结果显示,实验侧软骨细胞死亡率为(16.98± 6.39)%,对照侧软骨细胞死亡率为(26.17±14.01)%,对照组明显高于实验组。

3 结语

在不同物种之间,负重关节活动度和力学结构不同。研究发现山羊关节的活动度与人膝关节较为接近,因此山羊模型被认为是建立关节软骨缺损较好的模型[1]。

通过光镜与扫描电镜观察,不难发现,在即刻反应结果与后期观察中,实验侧软骨面情况均要好于对照侧软骨面情况。说明使用双极射频治疗的软骨,开始逐步恢复,双极射频用于治疗软腐损伤有一定疗效。

此外有研究显示软骨细胞在50℃左右会发生死亡。因此在手术过程中,注意使用冷生理盐水冲洗,可降低软骨面温度,确保将双极射频对软骨的损伤降低到很小[2],由此可见,双极射频是一种较为安全的疗法。

[1]左镇华,杨柳,段小军,等.关节镜制备膝关节软骨缺损的动物模型[J].现代生物医学进展,2007,7(11):1665～1666.

[2]张君,王友,猴筱魁,等.双极射频治疗山羊髌骨软骨退变的实验研究[J].中华关节外科杂志,2009,3(3):33～37.

R681.8

A

1674-0742(2011)05(a)-0021-01

2011-01-12