实验用猴脑脊液采集技术方法的创新

陈 霆，丛 喆，魏 强

(中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021)

实验用猴脑脊液采集技术方法的创新

陈 霆，丛 喆，魏 强

(中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021)

脑脊液在艾滋病的研究中有着重要的意义。近年来脑脊液的检测逐步成为SIV/SHIV感染猴模型研究和应用中的重要指标。传统的采集方法不易学习和掌握。针对上述情况我们优化了脑脊液的采集方法，优化后的方法明显缩短穿刺时间，显著提高成功率。

脑脊液;脑脊液采集;方法改进

脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)为无色透明的液体，充满在各脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内［1］。由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似。它供应脑细胞一定的营养，运走脑组织的代谢产物，调节着中枢神经系统的酸碱平衡。并缓冲脑和脊髓的压力，对脑和脊髓具有保护和支持作用。在艾滋病研究中发现，HIV-1具有嗜神经的特点，可依靠突变而获得亲神经的特异性变种，HIV可在中枢神经系统内长期存活，并直接感染而造成许多损害，同时，神经组织还可以作为病毒储存的地方［2］。因此，脑脊液的检查，包括细胞涂片染色，病毒分离和培养，载量的测定，蛋白水平的评价等，在艾滋病研究中有着重要的意义，是 SIV/SHIV感染猴模型研究和应用中的重要指标。

恒河猴脑脊液的采集主要集中在腰椎穿刺采集，特殊情况下可由小脑延髓池或侧脑室穿刺获取［3］。操作过程中要保证穿刺进针的方向和力度，否则很容易损伤脊髓，抽出浑浊的脑脊液或者带血的脑脊液，影响样品的质量。

传统方法中，动物麻醉后取侧卧位固定(图1)，使头部及尾部向腰部尽量弯曲，使腰部拱起。在动物背部第七腰椎间隙垂直刺入，当有落空感及动物的后肢跳动时，表明针已达椎管内(蛛网膜下腔［4］)。此时，观察是否有脑脊液流出。如果穿刺时有创伤，CSF可能稍带血色。收集CSF时，CSF应清澈无血，除非存在蛛网膜下腔出血。如果脑脊液流出不畅，可将针头旋转90度，因为针头开口处可能被神经根堵塞或者是没有刺破蛛网膜。

采用传统的穿刺方法采集脑脊液对于新人来说不易学习和掌握。因为没有专用的动物固定装置，猴子侧卧位不易固定，需要有实验人员辅助，由此也导致实验人员在穿刺时不易发力，穿刺针经常出现左右晃动的情况难以刺穿动物皮肤。即使成功刺穿皮肤，在穿透皮下组织和韧带时也极易发生滑动，造成穿刺不成功。

针对上述情况我们做了两点针对性改进：首先，我们尝试使用复方氯胺酮代替盐酸氯胺酮进行麻醉(主要成分是：盐酸氯胺酮、盐酸二甲苯噻嗪、盐酸苯乙哌酯)。盐酸二甲苯噻嗪为镇痛性化学保定药，比氯胺酮有明显的镇痛、镇静及中枢性肌松作用。两者配伍制成复方制剂麻醉效果好于盐酸氯胺酮麻醉效果，麻醉的时间延长，且实验猴的肌肉能够更好地放松，有利于穿刺针的进入。其次，我们调整了实验猴的固定姿势，不再采用传统的侧卧位固定，而是让实验猴双腿盘坐(图2)，上身顺势趴下，用其双腿固定上身不会左右晃动，脊椎自然突起，动物背部髂骨连线中点稍向下方第七腰椎间隙(第七腰椎与第一荐骨之间)正好处于最高处(图3)。实验猴的这种卧姿最大限度地保证了固定的效果，而且实验人员在实验猴正上方操作，能更好地发力。猴子固定好以后，第七腰椎与第一荐骨非常明显，剪去背毛用3%碘酊和75%酒精严格消毒后，用左手拇指、食指固定号穿刺部位的皮肤，右手持腰穿刺针垂直刺入(图4)，可以更加明显的体会到落空感及动物的后肢跳动。当有落空感时，表明针已达椎管内(蛛网膜下腔)。此时慢慢将猴上身直立，然后抽出穿刺针芯，可见透明的脑脊髓液慢慢滴出(图1～4见文后彩插3)。

脊髓穿刺技术经过改进后，非常利于新手的学习和掌握，更加重要的是穿刺时间明显缩短，成功率明显提高。

［1］ Jay A.Levy，著，邵一鸣，译.艾滋病病毒与艾滋病的发病机制［M］.北京：科学出版社.2010：38-40.

［2］ 王佑春，主编.艾滋病实验室检测技术与质量保证［M］.北京：科学出版社.2009：66.

［3］ 杨之兰，肖明英，赵祥，等.侧入法和直入法腰椎穿刺285例临床观察［J］.大理学院学报，2006，12(5)：28-29.

［4］ 田野，黎兰芝，陈强，等.提高腰椎穿刺成功率的体会［J］.现代医药卫生，2004，14(20)：1393-1394.

Improvement of the Collection Technique of Cerebrospinal Fluid in Monkeys

CHEN Ting，CONG Zhe，WEI Qiang
(Key Laboratory of Human Diseases Comparative Medicine，Ministry of Health;Institute of Medical Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Sciences;Key Laboratory of Human Diseases Animal Models，State Administration of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100021，China)

Cerebrospinal fluid，plasma and lymph have a similar nature，and have important significance in AIDS research.In recent years the detection of cerebrospinal fluid has gradually become an important indicator in research and application of SIV/SHIV infection models in monkeys.The traditional puncture method of cerebrospinal fluid collection is not easy to learn and master.In this paper we report the results of our technical optimization for the collection of cerebrospinal fluid in monkeys.This method has significantly improved the successful rate and much shortened the time spent in collection of cerebrospinal fluid in monkeys.

Cerebrospinal fluid;Fluid collection;Improvement，technique

R33

A

1671-7856(2011)02-0049-02

2010-10-09

10.3969/j.issn.1671.7856.2011.02.11

科技重大专项(项目号2009ZX10004-402)，NIH项目(3 R01 DA020419-02S1)。

陈霆(1985-)，男，从事实验动物病毒分子生物学研究工作。

魏强，教授，博士生导师，研究方向：实验动物病毒学。E-mail：weiqiang0430@sohu.com.