抗敏止痒乳膏处方优选的正交试验研究*

江苏省南通市第四人民医院(226005) 丁晓云

抗敏止痒乳膏处方优选的正交试验研究*

江苏省南通市第四人民医院(226005) 丁晓云

目的优选抗敏止痒乳膏处方中最佳药物用量。方法 采用正交试验设计法进行处方中各成分用量筛选，以镇痛实验的小鼠痛阈提高百分率和抗炎实验的小鼠耳肿胀抑制率为考察指标，确定乳膏的最佳处方并进行验证试验。结果 优选的抗敏止痒乳膏的最佳处方为1 000 g乳膏中含盐酸利多卡因20 g，扑尔敏5 g，冰片20 g，氯霉素10 g，验证试验中小鼠痛阈提高百分率和耳肿胀抑制率均＞60%，考察指标结果达到要求。结论 优选的抗敏止痒乳膏处方合理，可为临床应用提供实验依据。

抗敏止痒乳膏 正交设计 处方优选

*：南通市社会发展科技计划项目(No：S2007026)

本文根据瘙痒性皮肤病的发病机理以及临床表现并结合多年的临床治疗经验，运用中西药物进行合理组方，研制了非激素类复方外用制剂抗敏止痒乳膏，用于治疗急慢性湿疹、神经性皮炎和局限性瘙痒症。为了选择一个最佳处方的药物用量，从而达到临床疗效好，副反应小的治疗目的，本文采用正交试验设计法〔1，2〕并以实验性动物的抗炎镇痛作用，对抗敏止痒乳膏的处方进行了优选。

材 料

1.试验药物

盐酸利多卡因(江苏济川制药有限公司，纯度99.9%，批号：090531);扑尔敏(河南九势制药有限公司，纯度：99.6%，批号：081013)，冰片(南通薄荷油厂有限公司，纯度：99.5%，批号：090125);氯霉素(南京白敬宇制药有限公司，纯度：99.8%，批号：090907);抗敏止痒乳膏(南通市皮肤病性病防治所提供，规格：20g/盒，批 号：091107，091113，091119，091123，091127)。

2.试验动物

昆明种小鼠，18～22 g，雌雄兼有(南通大学医学院实验动物中心提供，生产许可证：SCXK2002-0019)。

实验方法

1.因素水平的确定

根据预试验，抗敏止痒乳膏由盐酸利多卡因、扑尔敏、冰片、氯霉素4种药物和乳膏基质组成，前三种药物对疾病治疗起主要作用，试验时每个因素安排4个水平，氯霉素主要起预防搔抓所致皮肤继发性感染的作用，试验时安排2个水平。各因素具体试验的水平见表1。

表1 因素水平表(1000g乳膏中加入药物的克数)

2.各因素水平的选择

表1是一个43×21的试验，拟选用L16(43×26)的正交表。因在表1中每个因素的水平都是由小到大按顺序排列的，按正交表试验，所有的1水平要碰在一起，这种极端的组合易增加试验误差，因此本文对起主要治疗作用的前3个因素的水平进行了随机化处理，见表2。

表2 随机化后各因素水平表

3.热板法镇痛试验〔3〕

(1)小鼠分组 将雌性小鼠置于(55±0.5)℃恒温水浴上的金属盆低热板上测定痛阈值。选用痛阈值在20～30 s(疼痛反应不规则者如过敏、迟钝或喜跳动的小鼠剔除不用)的小鼠80只，随机分成16组，每组5只，分笼存放并编号。实验前1日给各组小鼠腹部剃毛，面积1 cm2。

(2)试验方法 根据人体常用推荐剂量0.05 g·cm-2，按体表面积换算出〔4〕小鼠用量为 0.032 mg·cm-2。按表3试验号对应的处方用量制备的抗敏止痒乳膏给上述相应编号的每只小鼠涂药，共4次，每次用量0.032 mg·cm-2，前2次涂腹部去毛皮肤，后2次涂四足掌，用药面积约1 cm2，每次用药间隔30 min，给药前测各小鼠2次痛阈值，取其平均值为正常痛阈值。各组小鼠在末次涂药后90 min时分别测定痛阈值，求出每组动物给药后的痛阈提高百分率。为便于计算，结果均取5只小鼠的平均值。

4.对小鼠耳肿胀的影响〔4〕

(1)小鼠分组 选取小鼠80只，雌雄各半，随机分为16组，每组5只，分笼存放并编号。

(2)试验方法 按表3试验号中对应的处方量制备的抗敏止痒乳膏给上述相应编号的每只小鼠右耳涂药，共4 次，每次用量 0.032 mg·cm-2，面积约 2 cm2，每次用药间隔30 m in，左耳作对照。末次给药30 min后，各小鼠右耳以温水洗去残余药物并擦净，再给各小鼠双耳涂二甲苯，每只0.05 mL，1.5 h后处死小鼠，用8 mm直径打孔器将双耳同部位打下圆耳片，称量重量，求出耳肿胀抑制率。为便于计算，结果均取5只小鼠的平均值。

5.评价标准

为了便于对最佳处方提供评价依据，本文对镇痛和抗炎试验的数据分别进行了分级量化评分。

(1)镇痛试验量化评分〔5〕以小鼠痛阈提高百分率(%)=［(给药后平均痛阈-给药前平均痛阈)/给药前平均痛阈］×100%为评价指标，评价抗敏止痒乳膏的局部止痛、止痒效果，以y1表示效果。优为y1≥60%，良为60% ＞y1≥50%，中为50% ＞y1≥25%，差为y1＜25%。

(2)抗炎试验量化评分〔6〕以小鼠右耳肿胀抑制率(%)=［(左耳平均质量-右耳平均质量)/左耳平均质量］×100%为评价标准，评价抗敏止痒乳膏的局部抗炎效果，以y2表示效果。优为 y2≥60%，良为60% ＞y2≥50%，中为 50% ＞y2≥25%，差为 y2＜25%。

6.正交试验结果

(1)正交试验方案与试验观察结果 见表3。

(2)直观分析 由表3看出，以镇痛作用为评价指标时，各因素对结果的影响大小顺序为C＞A＞B＞D，不同因素内各水平对结果的影响强弱为：A1＞A4＞A2＞A3;B4＞B3＞B1＞B2;C3＞C1＞C2＞C4;D2＞D1;其最佳因素水平组合为A1B4C3D2。以抗炎作用为评价指标时，各因素对结果的影响大小顺序为C＞B＞A＞D，不同因素内各水平对结果的影响强弱为A2＞A3＞A4＞A1;B4＞B1＞B2＞B3;C3＞C2＞C1＞C4;D1＞D2;其最佳因素水平组合为A2B4C3D1。两个指标的差异为A因素和D因素，即盐酸利多卡因和氯霉素的用量。

(3)方差分析 将表3中y1值和y2值进行方差分析，结果见表4。

表3 试验方案与结果

表4 方差分析

由表4看出，当以镇痛作用为评价指标时，因素C对结果有差异(P＜0.01)，因素A对结果也有差异(P＜0.05)，影响强度及最佳因素水平组合均与直观分析结果相符。当以抗炎作用为评价指标时，因素B和因素C对结果都有差异(P＜0.05)，影响强度及最佳因素水平组合也与直观分析结果相符。由表3的¯R值可知，在抗炎试验中，A1为33.2，A2为37.2，两者无统计学差异，任取一项均能满足实验要求，结合镇痛实验结果与方差分析取A1较合适。考虑到D因素的2个水平虽对试验结果有一定的影响，但从直观分析和方差分析看出，差异都很小，根据临床用药经验，D因素选取第1水平。综合直观分析和方差分析，最佳因素水平组合为A1B4C3D1。

6.优选处方的验证

根据优选结果，按最佳处方A1B4C3D1制备5批抗敏止痒乳膏，进行小鼠镇痛和抗炎作用试验，结果见表5。

表5 优选处方的验证

由表5看出，最佳处方制备的抗敏止痒乳膏，在镇痛试验中镇痛作用明显，痛阈提高百分率均＞60%，在抗炎试验中，耳肿胀抑制率均＞60%，都达到了预定评价指标的要求。

讨论与小结

由试验结果和分析可知，抗敏止痒乳膏的最佳处方为每1000 g乳膏中含盐酸利多卡因20 g，扑尔敏5 g，冰片20 g，氯霉素10g。各因素选出的最佳水平除氯霉素在实验中只安排了2个水平，评定时2者选1以外，其余对治疗起主要作用的3个因素的最佳水平都处于试验方案的中间，说明试验方案中各因素水平的确定是合理的。

处方中所含盐酸利多卡因为表面麻醉剂，具有止痛止痒效果，冰片局部使用可产生清凉、止痒、消炎作用〔7〕，以上两药配伍使用，使镇痛、止痒作用进一步增强。

处方中的冰片能抑制3α-羟基甾醇脱氢酶，从而可使3β-羟基甾醇脱氢酶发挥更大的作用，促进生成更多的氢化可的松，发挥抗炎作用〔7〕。扑尔敏具有拮抗组胺引起血管扩张和通透性增加的作用，并且还具有拮抗5-羟色胺、慢反应物质等炎症介质作用〔8〕。本制剂的抗炎作用主要与冰片和扑尔敏有关。

氯霉素抗菌谱广〔9〕，与具有温和防腐、抑菌作用的冰片配伍使用，对防止搔抓所致继发性皮肤细菌感染具有良好的预防作用。

本实验采用正交试验设计法优选抗敏止痒乳膏的处方，以镇痛试验的小鼠痛阈提高百分率和抗炎试验的耳肿胀抑制率为评价指标，采用统计学方法分析计算，较好地优选出抗敏止痒乳膏的处方，方法可行，收效满意，为临床应用提高了实验依据。

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2.张遂柱，胡玮.应用正交实验设计进行教学效果归因研究.中国卫生统计，2005，22(3)：167-168.

3.盛国荣.复方利多卡因乳膏的抗炎镇痛和抗过敏止痒作用的实验观察.中国医院药学杂志，2010，30(3)：217-220.

4.徐叔云，卞如廉，陈修.药理实验方法学.第3版.北京：人民卫生出版社，2005：905-912.

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ExperiMental Study of Formula Optim ization for Anti-allergic and Relieving Itching Cream

DingXiaoyun．4thpeople’shos-pitalofNantong(226006)，Jiangsu

Objective To choose the best formula for anti-allergic and relieving itching cream.MethodsOrthogonal experimentwas used to study the abirritation effect on rats and study the edema inhibition rate ofmouse ear.The best formulawas designed according to the result of these studies and do Validation test.ResultsThe formula was Lidocaine 20g，chlorpheniram inemaleate5g，borneol20g，chlormycetin 10g per1000g cream.ConclusionThe design of the formula was reasonable.

Anti-allergic and relieving itching cream;Formula optimization;Formula optimization