度他雄胺PLGA微球的加速释放度试验研究

王恺源，高永良

度他雄胺PLGA微球的加速释放度试验研究

王恺源，高永良

生物可降解注射微球是近三十年来药剂学的研究热点之一[1]，它能够显著延长给药间隔，大大提高患者用药的顺应性，同时维持最低有效浓度，减少给药次数。聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）由于其良好的生物相容性和可降解性，已被 FDA 正式批准为药用辅料。但缓释微球释放周期较长，给处方筛选和日常质量控制带来较多困难。因此，建立体外加速释放度试验方法，从而快速地评价微球的释药性质，缩短处方工艺优化的周期，有助于制剂工作者更加快速有效地进行处方分析。

度他雄胺（dutasteride）是第 2 代 5α 还原酶抑制药，是目前第一种也是唯一一种同时抑制 I 型和 II 型 5α 还原酶的药物[2]，由葛兰素公司研究开发。2002年美国食品与药品管理局批准其在美国上市。度他雄胺能长久改善症状性良性前列腺增生（BPH）症状，减少急性尿潴留的发生，同时具有很好的预防癌变作用。鉴于患者需要每日服药，为了减少给药次数，提高患者用药的依从性，以聚乳酸-羟基乙酸共聚物 PLGA（75/25）15000 为载体，采用 O/W 型乳化溶剂挥发法制备了在体外可缓释 28 d 的度他雄胺微球。本研究通过三个处方进行加速试验分析，主要考察高温和不同 pH 值的释放介质对度他雄胺微球释药速度的影响，本文筛选其中一个最佳方程作为相关性方程，以期建立与长期释放度试验具有良好相关性的加速实验方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器 度他雄胺为武汉仙保生物技术公司产品，批号：20091001，自制度他雄胺 PLGA 微球；聚乳酸羟基乙酸共聚物购自西南交通大学（两单体比例 75∶25，相对分子质量 15000，批号 20091016）；甲醇，乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。SPD-10AVP 紫外-可见检测器购自日本岛津公司；N2000 色谱数据工作站购自浙江大学智能信息工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 HPLC 法测定释放介质中度他雄胺的含量 色谱柱：ApolloC18色谱柱（150 mm × 4.5 mm，5 μm），以甲醇-水（80∶20）为流动相；流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃；检测波长：220 nm，进样量：20 μl。定时量取度他雄胺微球的释放液 1 ml，用 0.22 μm 滤膜过滤，取续滤液 20 μl 进样；配制 50 μg/ml 的度他雄胺对照溶液，在相同色谱条件

下进样，通过对照品计算释放介质中药物的含量。在上述色谱条件下，度他雄胺溶液在 1.28 ～ 63.9 μg/ml 的范围内峰面积（Y）和浓度（X）的线性关系良好，Y = 17947X +1324.8，R2= 0.9999（n = 3）。高（32.08 μg/ml）、中（16.04 μg/ml）、低（8.02 μg/ml）3 种浓度的回收率分别为 99.79%、99.15%、98.56%，RSD 分别为 0.25%、0.67%、1.01%（n = 5），其日内精密度分别为 0.37%、1.04% 和 1.87%（n = 5）；日间精密度分别为 1.07%、1.02% 和 1.81%（n = 5）。

1.2.2长期释放度试验方法 采用摇瓶培养法。精密称取度他雄胺微球 10 mg，置于 25 ml 容量瓶中，加入 pH 7.4的磷酸盐缓冲液[含 0.5% 十二烷基硫酸钠（SDS）]25 ml，置于温度为（37.0 ± 1.0）℃，速度为 72 r/min 的恒温振荡仪中，定时取样 0.4 ml，同时补充介质 0.4 ml。HPLC 法测定介质中药物的含量，计算累积释放度。

1.2.3 加速释放度试验 操作方法同长期试验，但释放介质为不同浓度的盐酸溶液及氢氧化钠溶液，同时考察了 55 ℃ 对释放的影响。定时取样 0.4 ml，同时补充介质0.4 ml。HPLC 法测定介质中药物的含量，计算累积释放度，分别考察释放介质的 pH 和温度对释放度的影响。

2 结果

2.1 长期释放

度他雄胺微球长期释放结果见图 1。结果表明，3 批微球在 28 d 内释放较为完全，缓释效果较好。

2.2 加速释放

2.2.1 温度的影响 55 ℃ 时度他雄胺在 pH 7.4 磷酸盐缓冲液（含 0.5% SDS）和 pH 2 ～ 4 的盐酸溶液（含 0.5%SDS）及 pH 10 ～ 12 的氢氧化钠溶液（含 0.5% SDS）中放置 7 d，与 0 d 相比，药物含量无明显变化，同时色谱图没有新的色谱峰产生，表明度他雄胺溶液在 55 ℃ 的不同 pH溶液中是稳定的。

在 pH 7.4 的磷酸盐缓冲液中，55 ℃ 的释放条件下，度他雄胺微球的累积释放曲线见图 2。结果表明，在 pH 7.4磷酸盐缓冲液条件下，提高温度可以达到使度他雄胺微球在短时间内完全释放的目的。

图 1 3 批度他雄胺微球长期释放结果

图 2 温度对度他雄胺微球释放的影响

图 3 升高 pH 值对度他雄胺微球释放的影响

图 4 降低 pH 值对度他雄胺微球释放的影响

2.2.2 释放介质 pH 的影响 在 37 ℃ 条件下考察释放介质的 pH 对微球释药的影响。如图 3、4 所示，在 37 ℃条件下中，升高或降低释放介质 pH 并不能达到使度他雄胺微球在短时间内完全释放的目的。

2.2.3 加速试验结果 以 pH 7.4 磷酸盐缓冲液（含 0.5%SDS）为释放介质，T = 55 ℃ 作为加速条件，度他雄胺微球加速释放结果如图 5。结果表明，3 批微球在 120 h 内释放完全。

2.3 加速释药与长期释药的相关性评价

图 5 3 批度他雄胺微球加速释放结果

图 6 加速和长期释药曲线的相关性评价

表 1 长期释放数据的预测值和实测值

对长期（y）和加速（Y）释药曲线进行拟合，相关性示意图见图 6。拟合结果为 ln(100-y) = 1.979ln(100 － Y)－3.8837，r2= 0.9815，说明加速释药的方法可以较好地预测长期释药。

2.4 通过加速试验数据预测长期释放度

以 pH 7.4 磷酸盐缓冲液（含 0.5% SDS）为释放介质，T = 55 ℃ 作为加速条件，测定度他雄胺微球在 2、6、10、14、48、56 h 的累计释药百分率，由“2.3”中相关性方程，对长期累积释放度进行预测，比较实测值与真实值的差异，见表 1。

3 讨论

采用高温来缩短 PLGA 降解时间和揭示药物从PLGA 中释放的机理已被广大学者所采用[3]。本研究选择55 ℃ 作为加速释药实验的温度，已达到加快微球释药的目的[4]。升高介质温度，一般高于聚合物的玻璃化温度（Tg），此时聚合物松软，通透性增强，药物的分子运动也相对加剧[5]。结果发现，在 55 ℃ 情况下，度他雄胺微球释放速度快，与 37 ℃ 长期释药相关性好。

PLGA 微球的降解主要是由于酯键的水解，因此加酸或碱都可加速 PLGA 的降解[6]。但其加速效果相对升温而言较为温和，所以仅仅通过降低 pH 不容易实现微球释放的大幅度加速，对于一些释放周期长的微球往往难以达到加速的要求[7]。由于度他雄胺溶液在 pH = 1 及 pH = 13 溶液中有新的色谱峰产生，故无法进行更强酸、碱的考察。本研究中，微球在 0.01 mol/L 的氢氧化钠溶液中与长期释药曲线相似，其他 pH 溶液反而抑制了微球的降解及释药。这也可能是介质酸、碱性太弱，无法起到催化水解的作用。

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10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.02.014

100850 北京，军事医学科学院毒物药物研究所

高永良，Email：ylgao868@yahoo.com.cn

2011-01-20

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