一特殊的可变性红斑角化症家系的研究

张晓岚，陈洋，李久宏，李波，姜奕

（中国医科大学附属第一医院 1.皮肤科；2.中心实验室，沈阳 110001）

一特殊的可变性红斑角化症家系的研究

Study of a Specific Erythrokeratodermia Variabilis Family

张晓岚1，陈洋2，李久宏1，李波1，姜奕2

（中国医科大学附属第一医院 1.皮肤科；2.中心实验室，沈阳 110001）

收集一个特殊的可变性红斑角化症的北方汉族家系血样，从血样中提取DNA，利用直接测序法测定其GJB3和GJB4序列。在本家系中未发现GJB3与GJB4的突变。

可变性红斑角化症；GJB3；GJB4

可变性红斑角化症（erythrokeratodermiavariabilis，EKV）是一种罕见的常染色体显性遗传病。E K V除具有特征性皮损外，还可伴掌跖角化［1］。国外对此病的突变基因的研究主要集中于GJB3及GJB4［2，3］。针对可变性红斑角化症的发病分别与两个基因的第2外显子区的基因突变有关，因此我们利用直接测序的方法对此中国家系进行了GJB3与GJB4基因的第2外显子区的基因检测及筛选。现报告如下：

1 材料与方法

1.1 临床资料

2009年7月于中国医科大学附属第一医院皮肤性病科门诊收集1个特殊的可变性红斑角化症北方汉族家系。共有4代22人。现有患者13人（男9人，女4人），正常亲属9人（男4人，女5人），家族系谱见图1。其遗传特点为：先证者的父亲患此病，父辈家系中每代均有患者，呈连续传递，且每代中均有半数以上的人患有此病。其先证者，女，32岁，躯干四肢角化性红斑31年。患者从1岁起躯干处无明显诱因开始出现片状角化性红斑，渐于下肢伸侧、上肢伸侧出现同样皮损。其界限清楚，表面粗糙（图2）。皮损范围与程度会随温度和心情的变化出现改变。自诉家系中其他患者表型相似，但程度有差异。30年来未曾治疗。既往体健。

图1 可变性红斑角化症家族系谱图

图2 先证者的腹部及双膝部典型的红斑角化型皮损

体格检查：一般状况良好，各系统检查未见异常。专科查体：躯干、四肢伸侧可见散在分布大小不等的红色角化性斑块，其上可见少量鳞屑，期间可见大小不等的正常皮岛。边缘清晰，形状不规则。双手双足未见角化。实验室检查：血、尿常规、肝肾功、血离子均正常。下肢伸侧病理检查示：镜下见网篮状的角质层，未见明显的角化不全，粒层略增厚，棘层略增厚，棘层内无明显水肿及炎性细胞外溢，上皮脚存在，基底层完整，真皮浅层血管周围散在少许炎性细胞浸润（图3）。结合临床可诊断为：可变性红斑角化症。

图3 可变性红斑角化症的病理结果 H E×40

1.2 实验方法

1.2.1 提取外周血DNA：获得知情同意后，收集该家系中先证者及其父亲和弟弟的外周血2m l。加入2%EDTA抗凝，利用酚氯仿法提取DNA。用T E溶液-70℃保存。提取100例无亲缘关系的健康个体基因组DNA作为对照。

1.2.2 GJB3与GJB4的扩增和测序：网络数据库（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）检索GJB3和GJB4的DNA序列。应用Primer5.0设计其扩增引物为：GJB3F：5′GCCTGGTACATAGTAAATGC3′；GJB3R2：5′CTGAACAGGTAGGTCCACCA3′；GJB3F2：5′GCCGGCACCGCCAGAAACAC3′；GJB3R：5′CAGCCCCTGTAGGACCTCTCC3′；GJB4F：5′TCAATCGCACCAGCATTAAG3′；GJB4R：5′GGGGGACCTGTTGATCTTATC3′。

1.2.3 聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）：PCR反应在PCR仪3100（AppliedBiosystems，美国）上进行，反应体系包括：10×反应缓冲液5μl，MgCl23μl；dNTP4μl，TAP酶1μl，引物75ng，基因组DNA50ng，加去离子水至50μl。PCR条件：94℃预变性2min；94℃30s，60℃50s，72℃1min，36个循环；72℃7min。取2μlPCR产物行2%琼脂糖凝胶电泳分析。GJB3的目的片段分别为499bp和591bp，GJB4的目的片段为964bp。回收目的片段，纯化后用ABI3100自动测序仪进行双向测序，用Chroma软件包分析所得到的目的片段的测序结果。

2 结果

通过患者的临床表现、病理结果及家谱分析确诊为可变性红斑角化症，针对此家系DNA进行GJB3和GJB4的外显子全测序，未发现有意义的突变。见图4。

图4 GJB3及GJB4的测序结果

表1国内以往报告的可变性红斑角化症的病例特点总结编号 作者 报告年份 患者数皮损分布性 别 先证者男 女 发病年龄1 王丽英 2000 2 2 0 2个月 面部，小腿［6］2 赵天恩 2004 2 1 1 18岁 躯干、下肢、双足［7］3 李常兴 2005 1 1 0 18岁 左大腿伸侧［8］4 杨宝琦 2006 1 1 0 5岁 躯干，四肢［9］5 孙文启 2006 7 3 4 1个月 四肢，面部［10］6 任军 2010 1 0 1 3岁 口周、腋下、腹股沟［11］

3 讨论

红斑角化症是一组以广泛分布的角化性红斑为主要临床特征并伴随掌跖角化等表现的疾病。临床上可分为进行性对称性红斑角化症和可变性红斑角化症2种类型［4］。其中，可变性红斑角化症是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病，由MendasdaCostas［5］于1925年首次报道。临床表现主要有2种：（1）起于正常皮肤或在红斑基础上的散在、持久性红棕色角化过度性斑片，常呈图案形、逗点形、环形或多环形；（2）边缘清晰的红斑，散乱分布，大小、数量和位置变化迅速，可在数小时或数天内消退，部分持久不变，逐渐形成角化过度斑片。本例家系整个家族4代22人中发病13人，健康者9人。其中先证者分别在腹部、四肢处出现角化性红斑，且发病会受到环境及情绪的影响。其他家庭成员中患者的表型相似，而程度不同。其病理检查结果结合临床特征符合可变性红斑角化症。近年来国内针对可变性红斑角化症的病例报告共有5例，总结以往病例特点见表1。

GJB3与GJB4基因又名为缝隙连接蛋白基因。其中GJB3基因定位于1p 33-1p 35，由2个外显子和1个内含子组成，全长5178b p，GJB4基因定位于1p 34-1p 35，具有2个外显子和1个内含子，全长3984b p。目前国外研究认为，E K V的发病与GJB3和GJB4的基因突变有关，该病患者GJB3及GJB4基因分别有8个和6个突变位点［12，13］。在亚洲人群中GJB3的第357位点处C T点突变占患病者的1/8，GJB3的94位点处C T点突变占发病人群的1/80，但是前者为无意义突变［14］。崔勇等［15］于2004年曾进行了进行对称性红斑角化症的基因学研究，针对L O R、GJB3和GJB4的基因进行测序，均未发现突变。2008年Akman［16］报道了1例土耳其的进行性对称性红斑角化症的家系，也未在GJB3和GJB4基因中发现突变位点。本研究是国内首次针对1个可变性红斑角化症的北方汉族家系的DNA，运用直接测序法进行GJB3和GJB4基因全外显子测序，结果均未发现有意义的突变，与国外针对E K V的基因突变研究的结果不同。本研究于国内首次提出了E K V具有遗传异质性，我们认为针对不同的种族可能有不同的突变基因。

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（编辑王又冬，英文编辑王又冬）

R758.61

A

0258-4646（2011）02-0184-02

doiCNKI：21-1227/R.20110212.0956.025

张晓岚（1984-），女，硕士研究生.

姜奕，E-mail：yjiang58@hotmail.com

2010-09-17