高效液相色谱法测定当归活血胶囊中芍药苷的含量

李 进，陈秋香，梁 晓，邓曼静*

（长沙市第八医院，湖南 长沙 410100）

高效液相色谱法测定当归活血胶囊中芍药苷的含量

李 进，陈秋香，梁 晓，邓曼静*

（长沙市第八医院，湖南 长沙 410100）

目的 建立高效液相法测定当归活血胶囊中芍药苷含量的方法。方法 采用Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86）；检测波长为 230 nm。结果 芍药苷在 0.142～1.42μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.999 8）；平均加样回收率为97.28%，RSD=1.60%。结论 该方法重复性好，操作简单、准确，可用于当归活血胶囊的质量控制。

当归活血胶囊；芍药苷；含量测定；高效液相法；白芍；当归；威灵仙

当归活血胶囊是本院骨伤科的协定处方，其处方由白芍、当归、续断、威灵仙、骨碎补、生地黄、泽兰、五加皮等10味中药组成，具有活血舒筋止痛、祛瘀生新的功效，用于治疗外伤早期。原标准中无含量测定，为了更有效地控制产品质量，本文建立高效液相色谱法测定处方中君药白芍中有效成分芍药苷的含量，为当归活血胶囊的质量控制提供实验数据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪和紫外检测器；CT-100柱温箱。CQ-250型超声波清洗器（必能信超声上海有限公司）。AB 265-S电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]。

1.2 试药

乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇、磷酸为分析纯，水为重蒸水。芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200632）；当归活血胶囊（长沙市中医医院提供， 批号：080120、080211、080312、080414、080529、080618、080808、090415、090421、090201)。

2 方法与结果

图1 芍药苷测定的HPLC图

2.1 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥12 h的芍药苷对照品7.1 mg，加乙醇制成每1 mL含0.071 mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取当归活血胶囊20粒，倾出内容物，精密称定，研细，取细粉约0.8 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，称定质量，超声处理45 min，放冷，再称定质量，以50%的乙醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上清液用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 阴性对照溶液的制备

按处方比例称取除白芍外其它药材适量，依照当归活血胶囊的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.4 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；检测波长：230 nm； 流速：1.0 mL/min； 柱温：40 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数以芍药苷峰计算应不低于3 000。在上述色谱条件下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液的色谱图分别见图1。结果表明，阴性无干扰。

2.5 线性关系的考察

分别精密吸取芍药苷对照品溶液 2、4、12、18、20 μL，注入液相色谱仪，测定，以芍药苷的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：

结果表明芍药苷在0.142～1.42μg范围内具有良好的线性关系。

2.6 精密度试验

精密吸取芍药苷对照品溶液10 μL，重复进样6次，峰面积积分值的RSD=0.71%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批当归活血胶囊（批号：0801020）5份，每份约0.8 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备样品溶液，进行含量测定。结果平均含量0.657 1 mg/g，RSD为2.06%，表明本方法具有较好的重复性。

2.8 稳定性试验

取重复性试验项下的供试品溶液，每隔2 h进样1次，每次10 μL，连续进样6次，峰面积积分值的RSD为2.62%，结果表明样品在10 h内基本稳定。

2.9 回收率试验

贮备溶液:精密称取芍药苷对照品5.70 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL中含芍药苷0.228 mg的溶液。

取已知含量（0.657 1 mg/g）的当归活血胶囊(批号：080312)，倾出内容物，研细，取约 1.4 g(6 份)，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入贮备溶液1、2、3号 2.4 mL，4、5、6 号 4 mL，7、8、9 号 4.6 mL，水浴挥干，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

2.10 样品测定

按拟定的含量测定方法，测定10批当归活血胶囊中芍药苷的含量，每批5份，结果见表2。

表1 回收率试验结果

表2 样品测定结果 （n=5）

3 讨论

供试品溶液制备：曾对提取溶媒、提取时间、提取方法进行了考察，结果以加入50%乙醇、超声处理45 min为佳。

比较了文献测定芍药苷含量的几种溶剂系统，甲醇-水(68∶32)[1]、甲醇-0.1%甲酸溶液(50∶50)[2]、甲醇-水-磷酸(25∶75∶0.2)[3]，乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）[4]。 结果以乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）为流动相时，当归活血胶囊中的芍药苷峰与其他峰分离度最好。选用HPLC测定当归活血胶囊中芍药苷的含量，操作简便、准确，重现性好，可用于当归活血胶囊质量控制的指标之一。

根据测定的结果，并考虑到方中白芍药材的产地、采收、加工等因素，暂定当归活血胶囊中芍药苷含量不得少于0.50 mg/g。

[1]Wang Q， Yang H Y， Liu W N， et a1.Determination of paeoniflorin in rat plasma by a liquid chromatography—tandem mass spectrometry method coupled with solid—phase extraction[J].Biomed Chromatogr，2006，20（2）：173.

[2]Xia S M， Shen R， SunX Y， et a1.Development and validation of a sensitive hquid chromatography—tandem mass spectrometry methodforthe determination of paeoniflorin in rat brain and its application to pharmacokinetic study[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2007，857(1)：32.

[3]王文芝，杨洪伟，曲 明.HPLC法测定乳核内消液中芍药苷的含量[J].中国中医药科技，2010,17(4):297.

[4]王文芝，杨洪伟，曲 明.HPLC法测定除脂生发片中芍药苷的含量[J].海峡药学，2009,21(5)：54.

（本文编辑 徐爱良）

Determination of paeoniflorin in Danggui Huoxue capsules with HPLC

LI Jin,CHEN Qiu-xiang,LIANG Xiao,DENG Man-jing
(Eighth Hospital of Changsha,Changsha,Hunan 410100,China)

Objective To establish a high performance liquid chromatography(HPLC)method for the determination of paeoniflorin in Danggui Huoxue capsule.Methods The separation of paeoniflorin was performed on Diamonsil C18column with a detection wavelength of 230 nm.The mobile phase was composed of acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution(14:86).Result The linear range of paeoniflorin was 0.142～1.42 mg(r=0.999 8).The average recovery was 97.28%and the RSD was 1.60%.Conclusion The method is simple,accurate with good reproducibility and can be used for the quality control of Dangguihuoxue Capsule.

Dangui Huoxue capsules;paeoniflorin;determination;HPLC;radix paeoniae alba;angelica sinensis;radix clematidis

R284.1

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.05.010.031.03

2010－12－12

李 进（1959-），女，湖南长沙人，主管药师，主要从事医院药房及制剂工作。

* 邓曼静，女，主任药师，E-mail：dmj914@sina.com。