微柱凝胶检测在新生儿溶血性疾病中的临床应用

李就文 陈昌达 陈超群

(广东省东莞市常平医院检验科 广东东莞 523573)

微柱凝胶检测在新生儿溶血性疾病中的临床应用

李就文 陈昌达 陈超群

(广东省东莞市常平医院检验科 广东东莞 523573)

目的 探讨微柱凝胶试验(MGT)技术在新生儿溶血病(HDN)中的应用。方法 采用微柱凝胶试验技术对189例疑为HDN的高胆红素患儿做“溶血三项试验”,即:(1)红细胞抗球蛋白试验;(2)抗体放散试验;(3)血清游离抗体试验。结果 A型与B型2组患儿(母亲O型)HDN检验结果比较,2组HDN阳性率比较差异无统计学意义。结论 MGT具有敏感度高,特异度显著,操作简便,耗时40m in左右,标本用量少,结果易判定等优点,值得临床推广应用。

微柱凝胶试验技术 新生儿溶血病

新生儿溶血病又称母子血型不合溶血病,是母亲对胎儿红细胞发生同种免疫反应引起的溶血性疾病,RH血型和ABO血型不符都能引起这种疾病,但前者引起的比较严重,是新生儿病理性黄疸最常见的原因,也是引起新生儿高胆红素的最重疾病,目前已发现26个血型系统,160种血型抗原,在我国以ABO血型不合溶血病发生率最高,RH血型不合溶血病发生较少,但Rh溶血临床表现比ABO血型不合溶血病重。MN溶血最为罕见。为了解微柱凝胶试验在新生儿溶血性疾病中的应用,本研究采用MGT对189例疑为HDN的高胆红素患儿进行了检测,收到良好效果,现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

189例疑为新生儿溶血病高胆红素患儿均来自我院新生儿科自2009年9月至今的住院病人,出生10d内的患儿为A型或B型,母亲为O型。

1.2 仪器与试剂

(1)仪器:TD-3A型血型血清学多用离心机与FYQ免疫微柱孵育器(均由长春博研科学仪器有限公司生产)。MATIC ⅡKA-200血库专用离心机(日本KUBOTA公司)。(2)试剂:新生儿溶血病血型不完全抗体检测卡(微柱凝胶检测卡)和6%小牛血清(均由长春博迅生物技术有限责任公司提供)。标准ABO红细胞(上海血液生物医药有限责任公司提供)。试剂均在有效期内使用。

1.3 方法

表1 189例A型和B型2组患儿HDN检测结果的比较

取患儿的压积红细胞洗涤3遍,制成0.5%～1%的红细胞悬液备用。(1)直抗试验:取Coombs卡1张,于一孔内加入患者1%红细胞悬液50μL,将卡放入专用离心机上离心5min后判读结果。(2)游离试验:取Coombs卡1张,分别标记A、B、O,各加入1%A、B、O型标准红细胞悬液50μL,再各加入乙二胺四乙酸二钾抗凝的患儿血浆50μL,将此卡放入37℃专用孵育器孵育15m in,离心5m in后判读结果。(3)热放散试验:取Coombs卡1张,分别标记A、B、O,各加1%A、B、O型标准红细胞悬液50μL,再各加入红细胞放散液50μL,将此卡放入37℃专用孵育器孵育15m in,离心5m in后判读结果。

1.4 结果判定标准

3项试验以出现凝集为阳性(位于凝胶表面或凝胶中),红细胞沉降到底部即为阴性。(1)游离和放散试验均以检出可以和新生儿红细胞反应的抗体为阳性。(2)单项放散试验阳性及其他项目阳性同时合并放散试验阳性的结果均可判定为HDN阳性。(3)直抗及游离试验2项同时阳性可判定为HDN阳性。(4)直抗或游离试验1项阳性可疑为HDN。

1.5 统计学处理

所得数据采用卡方检验方法,利用SPSS 14.0软件进行统计,结果P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

189例高胆红素患儿与其母均为ABO血型不合,即母亲血型均为O型,RH(D)阳性。母亲血清中ABO血型以外抗体筛查均为阴性。其中母-婴血型为OA者为96例,OB者为93例。采用MGT进行溶血3项检测证实为HDN者为152例,阳性率为80.42%。母-婴OA型和OB型2组溶血3项试验比较,差异无统计学意义,P均>0.05,见表1。

3 讨论

随着中国新生儿免疫学的进步,已经完全改变了过去认为新生儿溶血病罕见的看法。过去未认识本病病因时,曾称其为“胎儿全身性水肿”、“胎儿有核红细胞增多症”、“先天性新生儿重症黄疸”、“新生儿溶血症”等。现在明确了解其发病机理而不是症状,故已统一命名为“新生儿溶血病”。新生儿溶血病(HDN)是指母婴血型不合引起的新生儿免疫性溶血性疾病。在我国最常见于ABO血型系统不合,其次RH血型系统不合。HDN的发病主要原因是新生儿溶血病是因胎儿红细胞具有从父亲遗传而来,而又为母亲红细胞所缺乏的抗原,此种红细胞血型抗原在胎儿时期进入母体,刺激母体产生相应的血型抗体,此种血型抗体中的IgG抗体透过胎盘进入胎儿体内与胎儿红细胞抗原产生抗原抗体反应,破坏胎儿红细胞而引起新生儿溶血病。病情的严重程度不同,重者可在宫内死亡,临床上可根据“溶血3项试验”,即红细胞抗球蛋白试验、抗体放散试验和血清游离抗体试验做出诊断[1]。RH新生儿溶血病因孕妇和胎儿的RH血型不符而引起的疾病。若孕妇为RH (-),胎儿为RH(+)(有D抗原),当孕妇第一胎分娩胎盘剥离时,胎儿的红细胞进入母体会刺激母体产生抗D抗体(IgG)。抗D抗体在母体怀第二胎时可通过胎盘进入胎儿,与胎儿的红细胞结合,引起胎儿发生溶血病。ABO新生儿溶血病因孕妇与胎儿ABO血型不符而引起的疾病。多见于O型孕妇,尤其多见于O型孕妇和A型胎儿。由于天然的抗A或抗B抗体(IgM)的分子大,不能通过胎盘进入胎儿血循环,而母亲为O型者比A型或B型人更容易产生抗A或抗B的IgG抗体,IgG抗体则能通过胎盘进入胎儿血循环,引起胎儿发生溶血病。A或B抗原也与部分抗A或抗B抗体发生作用,而且抗A的量高于抗B。但这类病例不多,病情也比较轻,加以胎儿血管内皮和组织细胞上有血型抗原,可部分吸收对应抗体,以减少抗体对红细胞的破坏。ABO血型的“天然”抗体主要是IgM类,但也有IgG类,后者有引起新生儿溶血病的可能[2～5]。微柱凝胶试验技术(MGT)是一种新的改良抗球蛋白试验技术,在国外输血领域已逐步作为常规应用。采用MGT做HDN检测,对提高ABOHDN的诊断率有实际意义。本研究采用MGT法检测189例ABO血型不合的新生儿标本。母-婴血型OA者96例,检出HDN阳性率为82. 29%;O-B者为93例,HDN阳性率为78.49%。2组比较,差异无统计学意义P均>0.05。说明ABO HDN的发生率与婴儿A、B血型无关,在ABO血型中呈正态分布。另处,母亲血清中ABO血型以外抗体筛查均为阴性,未发现RHHDN,可能与检测的病例较少有关。MGT作为一项十分必要的检测手段,具有敏感度高,特异度显著,操作简便,耗时40分钟左右,标本用量少,结果易判定等优点,对临床早期诊断早期治疗母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病提供了重要的参考依据,应广泛应用于临床。

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M icrobubes Gel Technology M easure in the Neonate Dissolving Clinical Practice of Hemolytic Disease

LI Jiuwen
Hospital of Changping of Dongguan,Dongguan 523573,China

【Abstrat】Objective Probe into M icrobubes gel technology(MGT) application of hemolytic disease of Newborn (HDN).Methods Adopt MGT do " 3 items of hemolytic test " high bilirubin infant of HDN to 189,i.e.:(1)The erythrocyte resists globulin to test;(2) The antibody diffuses and tests;(3)The free antibody of serum is tested.Results A type is compared w ith B type two group infant (mother w ith blood type O) HDN test results,two groups of HDN lead the comparative difference not to have statistics meaning positively.Conclusion MGT has sensitivities high,peculiar degree is prom inent,easy and simple to handle,time consum ing about 40 m in,there are few samples consumption,the apt advantage of judging etc.of the result,is worth popularizing and applying clinically.

M icrobubes gel technology;Hemolytic disease of the newborn

R446.6;R722.1

A

1674-0742(2011)05(a)-0007-02

2010-12-02