薄层液基细胞学与高危型人乳头瘤病毒DNA检测及阴道镜联合检查在宫颈病变中的临床应用

承莉

薄层液基细胞学与高危型人乳头瘤病毒DNA检测及阴道镜联合检查在宫颈病变中的临床应用

承莉

目的 探讨宫颈病变的筛查方法及其临床价值。方法 对540例TCT异常患者行HC-II（Hybird Capture-II）高危型HPV-DNA检测，其中120例细胞学结果为ASC的患者因高危型HPV-DNA检测结果阴性未进行阴道镜检查，余均行阴道镜检查及多点活检组织病理学检查。结果 液基细胞学与HPVDNA检测结果比较，ASCUS、LSIL、HISL阳性率分别为36%、53.3%、61.3%，P＜0.05；HPV-DNA检测结果与病理结果比较,炎症、CINI、CINII-III阳性率分别为67.2%、68.2%、91.9%，P＜0.05，有显著性差异。结论 TCT是宫颈病变筛查中是首选方法，联合高危型HPV-DNA检测及阴道镜检查则能提高宫颈病变的检出率。

薄层液基细胞学；高危型人乳头瘤病毒；阴道镜；宫颈上皮内瘤变

目前，宫颈癌在女性中的发病率仅次于乳腺癌，位居第二。统计显示，我国每年新发病例13.5万，约占世界的1/4。宫颈癌与人乳头状瘤病毒（HPV）感染有明确关系［1］。宫颈上皮内瘤变是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变，它反映宫颈癌发生发展中的连续过程[2]。因此，早期发现和治疗子宫颈的早期病变，是预防子宫颈癌发生的关键。本研究采用液基细胞学方法在普通妇科门诊进行宫颈癌筛查3679例，对540例细胞学结果异常患者行高危型HPV-DNA检测，并进行阴道镜下宫颈多点活检，通过组织病理学比较，评价液基细胞学检查联合高危型HPV-DNA检测及阴道镜检查对宫颈病变的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年12月～2011年2月我院妇科门诊就诊行宫颈细胞学筛查患者3679例，年龄25～70岁，结果异常者540例，且均行HC-II（Hybird Capture-II）高危型HPV-DNA检测，其中120例细胞学结果为ASC的患者因高危型HPV-DNA检测结果阴性未进行阴道镜检查,余均行阴道镜检查及多点活检组织病理学检查。

1.2 方法

1.2.1 标本的采集 采集前轻轻用无菌干棉签擦除宫颈表面粘液，保持适当压力将液基细胞刷插入宫颈管内约1cm，使细胞刷呈扇形，顺时针或逆时针旋转3圈，收集宫颈外口及宫颈管的脱落细胞，洗入装有Autocyte prep保存液小瓶中，保存液中的标本经Thinprep2000系统程序化处理(将标本中的黏液、血液和炎细胞与上皮细胞分离,经高精密度滤器过滤后转移到静电处理过的载玻片上),制成直径为2cm的薄层细胞涂片,95%酒精固定,巴氏染色,根据TBS分级做出描述性诊断报告。

1.2.2 细胞学诊断方法 采用2001年TBS分类法［3］：（1）正常范围（WNL）。（2）鳞状上皮细胞异常：①不典型鳞状细胞（ASC）,分两类意义未明的不典型鳞状细胞（ASC-US）和不能排除高度上皮内病变的不典型细胞（ASC-H）;②鳞状上皮内低度病变（LSIL）;③鳞状上皮内高度病变（HSIL）;④鳞状细胞癌（SCC）;⑤不典型腺细胞（AGC）。（3）腺细胞异常：①不典型腺细胞（AGC）；②宫颈管原位癌（AIS）；③腺癌。

1.2.3 宫颈活检组织病理组织学检查 对420例患者行阴道镜指引下多点活检送病理。按TBS方案统一组织学和细胞学诊断术语，低度上皮内病变（LSIL）宫颈上皮内瘤变I级（CINⅠ）和宫颈人乳头瘤病毒感染，高度上皮内病变（HSIL）含CINⅡ及其以上病变（CINⅢ）。

1.2.4 阴道镜检查 用棉球轻轻擦去宫颈分泌物，调焦距，用3%～5%醋酸棉球浸湿宫颈表面60s后取出，等待1～2min，观察宫颈的上皮变化：(1)病变的区域性分布；(2)上皮的颜色和浑浊度；(3)表面构型；(4)血管结构。其中醋白上皮、点状血管和镶嵌三个特征是CIN最常见的异常阴道镜所见。然后用3%复方碘溶液涂布宫颈表面，在碘不着色区活检，如阴道镜不满意，加行颈管搔刮。

1.2.5 HPV-DNA检测取宫颈管分泌物用美国Digene公司生产的第二代基因杂交捕获信号放检测系统（Hybird Capture,HC-II）检测。

1.2.6 统计学处理x2检验。

2 结果

2.1 液基细胞学检查结果 液基细胞学宫颈癌筛查标本例，WNL 3139例（85.32%），ASC 375例（10.19%），LSIL 90例（2.45%），HSIL 75例（1.33%）。

2.2 液基细胞学与病理结果 ASC中CINI6.27%（16/255），CINII-III7.45%（19/255）；LSIL中CINI25.56%（23/90），CINII-III27.78%（25/90）；HSIL中CINI33.33%（25/75），CINII-III 56%（42/75）（见表1）。

2.3 HPV-DNA检测结果 540例细胞学异常的患者均行HPV-DNA检测，其中120例细胞学结果为ASC的患者因高危型HPV-DNA检测结果阴性未进行阴道镜检查；余均行阴道镜下活检组织病理学检查，随病变级别升高HPV阳性率呈递增趋势，阳性率有显著差异性,HSIL、LSIL组与ASC组比较HPV-DNA阳性率差异有显著性，P＜0.05。HSIL组与LSIL组比较HPVDNA阳性率无差异，(x2:1.068,P＞0.05)（见表2）。如表1所示在ASCUS且HPV阳性中有1例为扁平湿疣，220例为炎症；75例HSIL中宫颈活检结果有3例为炎症伴鳞状上皮化生见挖空细胞，高危型HPV-DNA均为阳性。在CINII-III中，仅有1例为高危型HPV-DNA阴性，其宫颈细胞学结果为LSIL。SCC组3例，且全部病例HPV阳性，本组阳性率100%，但由于样本量过少，现不与其他组进行比较。

表1 液基细胞学检查结果与病理结果比较

表2 液基细胞学与HPV-DNA检测结果

表3 HPV-DNA检测结果与病理结果比较

3 讨论

CIN约10年发展为原位癌，原位癌发展为浸润癌约需3～10a，而CIN发展为浸润癌可能需10～15a，因此早期筛查、早期诊断、早期治疗，将其阻断在癌前病变阶段，在宫颈癌的防治工作中占有非常重要的地位[4]。

液基薄层技术采用液体存储宫颈细胞，自动化制片，制成细胞单层、背景清晰的薄片，避免了常规刮片中因黏液、血液及炎性细胞的遮盖导致的漏诊［5］，提高了细胞学的准确性，1996年美国FDA批准用于临床。美国癌症学会(ACS)2004年版宫颈癌普查最新指南指出[6]:建议经阴道性交大约3年后应开始宫颈癌的普查,30岁之前的应每年做1次常规的宫颈细胞学检查,或者每两年做1次液基细胞学检查,对那些连续3次细胞学检查结果正常或阴性的女性,到30岁以后可每2～3年普查1次,70岁以上的妇女,如果有连续3年以上细胞学检查结果正常或阴性,同时在70岁以前的10年里没有异常或阳性细胞学检查结果,可以选择停止宫颈癌的普查。ACS强调这些检查结果必须有高效的技术保障为前提,使检查结果准确无误,目前高效的TCT技术在发达国家已经广泛使用,目前液基细胞学是宫颈病变的主要筛查手段。

阴道镜检查是CIN和早期宫颈癌的重要辅助诊断方法之一。能迅速有效的鉴别宫颈有无病变；准确定位，显著提高了活检的命中率[6]。对于细胞学异常的，应该进行阴道镜检查，特别是对于HSIL和可疑早期浸润癌应给予优先检查。我国由于受病理技术力量及采样等因素影响，故宫颈细胞学有一定的漏诊及误诊率。对高危型HPV-DNA阳性者应加强警惕，联合阴道镜可提高细胞异常的检出率，并有助于对疾病的了解及预后。

持续的高危型HPV感染是宫颈癌发生的高危因素。灵敏的HPV核酸检测对于肿瘤进展的评估是非常有价值的。细胞涂片为ASC-US女性中，如果HPV核酸检测为阴性，肿瘤进展的危险性则非常低。故本次研究中我院对细胞涂片为ASC-US，HPV核酸检测为阴性的女性，未行阴道镜检查，而是转为3～6个月复查宫颈细胞学密切随访。对于较高年龄的女性，如HPV核酸检测为阳性，也应转至阴道镜检查。阴道镜不满意者，需行活检及颈管搔刮。据相关文献报道，在美国，已同时使用液基细胞学和HPV检测作为宫颈癌的筛查，对于这双向检测均为阴性的个体进展为高级别的宫颈癌前病变以及宫颈癌的可能性几乎为零[7]。因此液基细胞学联合高危型HPV-DNA检测及阴道镜检查则更能提高宫颈病变的检出率。

[1] Saranath D,Khan Z,Tandle A,et al.HPV16/18 prevalence incervicallesions/cancersand p53 genotypes in cervical cancer patients from India[J].Gynecol Oncol,2002,86（2）:157-162.

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[4] 彭兰芝.宫颈上皮内瘤变的命名分类病理及转归[J].中国实用妇科与产科杂志，2003，19（8）：454-456.

[5] The 1998 Bethesda Systerm for Reporting Cervical/vaginal Cytological Diagnosis.National Cancer Institute Workshop.JA-MA,1989,262（7）:931-935.

[6] 连利娟.林巧稚妇科肿瘤学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2001：258.

[7] 廖秦平，刘朝晖，张岱，等.中国宫颈感染性疾病诊治策略[M].北京：人民军医出版社，2009：27-28.

Objective The clinical value of cytology high-risk human papillomavirus (HR-HPV) testing and colposcope in diagnosis of precancerous diseases. Methods 540 women with abnormal cervical smear were screened by using HPV DNA testing hybrid capture II(HC-II),Among those cases 120 women with high-risk human papillomavirus (HR-HPV) testing negatively cervical smear ASC,were not

Colposcopy.Simultaneously the rest cases were received by colposcopy and colposcope directed biopsy. Results Among 420 cases the positive rates of HR-HPV as ASCUS,LSIL and HSIL were 36%,53.3%,61.3%respectively (P＜0.05). the positive rates of HR-HPV as infl ammation ,CINI and CINII-III were 67.2%,68.2%,91.9% (P＜0.05) ,which have signifi cant deviation.Conclusion Cytology is the preferred method for screening cervical precancerous diseases. Cytology combined with HR-HPV testing and colposcopy can increase the detectable rate of cervical cancer.

Autocyte pap smear fl uid - based system; High-risk human pappilomavirus; Colposcope; Cervical intraepithelial neoplasia

10.3969/j.issn.1009-4393.2011.26.020

213001 苏州大学附属常州肿瘤医院（承莉）