ELISA与ICA法对甲胎蛋白检测的比较

郑定容 刘 仿

（1.广东医学院附属西乡人民医院检验科，广东深圳 518102；2.东莞市广东医学院实验教学管理处，广东东莞 523808）

甲胎蛋白（AFP）主要在胎儿肝中合成，分子量6.9万，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3[1]。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平（低于30μmg/L）。但当肝细胞发生病变时，AFP基因表达重新开放，于血清中可检测到AFP 浓度显著升高[2]。目前，定量检测血清AFP的方法很多，主要有化学发光法、放射免疫法和酶联免疫法，本研究分别应用对比试验、回收试验和精密度试验进行评价。

1 资料与方法

1.1 实验对象

样本取自2006年4月～2009年12月深圳市宝安区西乡人民医院住院或门诊原发性肝癌患者，随机抽检30例，年龄21～80岁，平均（55.0±5.3）岁。所有病例根据临床表现，经B超、CT、MRI及各项实验室指标检查确诊，部分病例经手术后病理证实。

1.2 实验试剂

甲胎蛋白诊断试剂盒（郑州市博赛生物技术股份有限公司）；AFP定值质控品（美国贝克曼库尔特公司，批号：33219））：7.00ng/mL、80.00ng/mL、1725.00ng/mL；AFP定值标准品（美国贝克曼库尔特公司）0.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、25.00ng/mL、100.00ng/mL、500.00ng/mL、3000.00ng/mL。

1.3 实验仪器

ACCESS全自动化学发光测定仪（美国贝克曼库尔特公司）、EPPENDDORF 5415 D高速冷冻离心机（德国EPPENDDORF公司）、RA-22100C Milcrop late Reader酶标仪、RA-2600CMilcrop lateWasher洗板机（深圳雷杜生命科学股份有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 对比实验 将随机抽检的30份患者标本分别用两种方法进行检测，并对两种方法进行比较。设y为ICA 法所测AFP含量，x为ELISA所测AFP含量，最后进行回归方程。

1.4.2 回收试验 取不同浓度的混合血清，AFP 浓度为10.71 ng/mL、18.08 ng/mL、46.83 ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ICA法和ELISA法分别检测其回收率。

1.4.3 精密度试验比较 取混合血清（AFP含量为56.00 ng/mL），分别用两种方法同时平行20次测定，计算批内误差；连续10d，2次/d，计算批间误差。

1.5 统计学处理

使用SPSS13.0 for windows统计软件包。

2 结果

ICA 法的批内、批间精密度均优于ELISA法，ICA法在检测准确度和稳定性上，较之ELISA具有很强的优越性。见表1。

表1 精密度实验（%）

将随机抽检的30份患者标本分别用两种方法进行检测，并对两种方法进行比较。设y为ICA 法所测AFP含量，x为ELISA所测AFP含量，则回归方程： y=1.54x＋9.09，相关系数r=0.982。该结果显示，ELISA测得的AFP含量与ICA法测的AFP含量存在回归关系，x和y正相关，且相关性较好。

取不同浓度的混合血清，AFP 浓度为10.71ng/mL、18.08ng/mL、46.83 ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ICA法和ELISA法分别检测其回收率。用ICA和ELSIA测得的回收率分别在96.84%～98.85%和93.90%～98.16%，平均回收率分别为98.04%和96.42%，ICA的检测精度高，稳定性强，回收率高于ELISA。见表2。

3 讨论

3.1 ELSIA在AFP肿瘤标记物检测中的应用

甲胎蛋白是1956 年由Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种甲种球蛋白，它被认为是辅助诊断肝癌最好的临床检测方法[3]。ELISA以快速、简便实效的优势在基层广泛应用。虽然ICA法的线性范围、精密度等方面明显优于ELISA法，但是在人体正常值参考范围内的AFP检测，ELISA法具有快速、简便、成本低廉的优点，在健康体检人群普查，良性肝病患者定期检查中起到很好筛查作用。由于ELISA反应中难以避免的“钩状效应”[4]，即测定显色随着待测标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度随抗原浓度的增加而开始下降至不显色，容易造成假阴性结果，AFP高值反而测为低值，样本需稀释才能准确测定。同时，ELISA反应存在手工操作误差，重线性不及ICA法。

表2 回收率实验(n=20)

3.2 ICA在AFP肿瘤标记物检测中的应用

ICA采用经典的免疫学原理，具有高度特异性，不受黄疸、脂血、溶血等因素影响。自动化程度高，减少了人为操作误差；方法灵敏度高可获得很低的检测下限值；稳定性好，标准曲线2～4周校正一次，患者可随到随做且无放射性污染。

ACCESS型全自动微粒子化学发光免疫分析系统以磁性微粒子为载体[5]，最大限度扩大包被面积，以碱性磷酸酶标记抗原、抗体，采用最灵敏的发光底物AMPPD磁性微粒子包被技术的应用大大提高检测的灵敏度，使化学发光法的线性范围更宽；光电倍增管接受发光强度信号（发光稳定后，记录11次/s，取9次均值为结果）；超声波清洁系统，防止交叉污染 （＜1PPM），使得检测结果更为稳定可靠。弥补了ELISA法批间误差大、结果不稳定的缺点。彻底解决了放射免疫检测的污染问题以及方法繁琐。

ICA 为化学发光法类型之一，将发光技术与免疫反应和计算机技术结合。ICA 法与其它标记免疫分析相比，具有检测灵敏度高、精密度好、准确性高、无放射性污染、检测线性范围宽、自动化程度高、操作简便等诸多优点，是目前成为免疫检测广泛采用的新技术之一[6]。具有灵敏度高、示踪物稳定、标准曲线剂量范围宽、自动化程度高、操作简便等许多优点，在临床和科研中得到了日益广泛的应用。

[1] Hayashi T，Arai G，HyochiN，et al.Suppression of spermatogenesis in ipsilateral and contralateral testicular tissues in patientswith seminoma by human chorionic gonadotropin beta subunit[J].Urology，2001，58（2）：251-257.

[2] Acevedo H F.Human chorionic gonadotrop in （ HCG），the hormone of life and death： a review[J].Journal of Experimental Therapeutic and Oncology，2002，2（3）：133-145.

[3] Goldstein MJ，Mitchell EP.Carcinoembryonic antigen in the staging and follow up of patientswith colorectal cancer[J].Cancer Invest，2005，23：338-351.

[4] 魏东，邓爱文，牟成惠. ICA，RIA和ELISA法测定甲胎蛋白的比较[J].第一军医大学学报，2001，21（6）：459-460.

[5] 凌庆枝，周昕，张纪原.磁性分离酶联免疫技术检测人类绒毛膜促性腺激素及其临床意义分析[J].生物学杂志，2000，17（3）：32.

[6] 罗俊敏，朱剑峰，宋小龙.动态检测HCG浓度对滋养叶细胞疾病的临床判断[J].中国误诊学杂志，2002，2（9）：1317-1318.