Bcl-2，Bax在反复自然流产的表达及意义

张娟

Bcl-2，Bax在反复自然流产的表达及意义

张娟

目的探讨Bcl-2与Bax的表达与反复自然流产的关系。方法随机选取反复自然流产的患者50例作为实验组，正常妊娠流产患者30例作为对照组，采用免疫组织化学SP法检测绒毛细胞滋养细胞和合体滋养细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果实验组妊娠组织中Bcl-2的表达明显低于对照组，而Bax的表达明显高于对照组。并且Bax及Bcl-2表达呈负相关。结论Bcl-2低表达，Bax高表达，二者表达失衡可能是发生反复自然流产的重要因素。

反复自然流产;Bcl-2;Bax

反复自然流产(RSA)的病因十分复杂，它的病因除有染色体、内分泌、感染、内生殖器官解剖异常、环境因素及精神压力外，目前RSA的凋亡蛋白的相关机制的研究越来越受到重视，成为当今研究的热点。通过对凋亡相关蛋白的研究，希望在临床方面的治疗有新的突破。

1 资料与方法

1.1 一般资料随机选取2008年2月至2009年11月在我院妇科确诊并住院的反复自然流产患者50例作为实验组，统计患者年龄20～40岁，平均年龄(28.74±0.69)岁，孕龄41～59 d，平均(45.31±1.25)d。选择同期同期在我院计划生育手术室正常妊娠的要求行人工流产手术者30例作为对照组，年龄19～42岁，平均年龄(27.31±0.54)岁，孕龄39～60 d，平均(50.46±1.48)d。两组差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 实验方法两组确诊后行人工流产术，取出绒毛组织，反复用生理盐水连续漂洗，取出绒毛组织0.5 cm×0.5 cm× 0.5 cm固定完全后石蜡包埋切片，采用免疫组织化学SP法检测绒毛细胞滋养细胞和合体滋养细胞Bcl-2及Bax的表达。免疫组化采用试剂盒内提供的组织标本作阳性对照，每例随机选取5个400倍视野，细胞内有棕黄色点状或颗粒状物质为阳性，按照平均阳性细胞染色强度分为4级:阴性(-):无阳性细胞;弱阳性(+):浅棕黄色;阳性(++):介于(+)与(+++)之间;强阳性(+++):深棕黄色。

1.3 统计学方法应用SPSS 13.0软件进行数据处理。两组间均数比较采用两独立样本t检验，计数资料采用χ2检验。假设检验水准定为双侧，以P＜0.0 5为差异有统计学意义。

2 结果

Bcl-2及Bax在绒毛滋养细胞的表达及相关性。

Bcl-2在正常妊娠组织中呈高表达，RSA组织中呈低表达见表1。Bax则相反，在正常妊娠组呈低表达，在RSA中呈高表达见表2。二者都有显著性的差异。Bcl-2与Bax的相关性研究发现Bcl-2与Bax呈负相关r=-0.53，P＜0.01。

表1 Bcl-2在绒毛表达

表2 Bax在绒毛中的表达

图1 Bcl-2在正常妊娠组织中表达(S-P 400)

图2 Bcl-2在RSA组织中表达(S-P 400)

图3 Bax在RSA组织中表达(S-P 400)

图4 Bax在正常妊娠组织表达(S-P 400)

3 讨论

复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指临床上连续发生3次或3次以上自然流产，妊娠不足20周或者胎儿体重＜500 g而终止者，是妊娠期最常见的并发症之一，流产是因母胎之间免疫状态失衡，发生免疫排斥所致。反复自然流产可分为原发性的反复自然流产和继发性的反复自然流产，而继发性的反复自然流产被认为是一个妇女无论有多少次的流产，至少又一次是成功的妊娠。流行病学调查一个妇女如果连续发生两次的流产，下一次妊娠流产的发生率大约为24%。连续三次流产下次妊娠流产发生率大约为30%，四次以上连续流产的发生率可能40%［1］。病因是多种多样的，RSA不单单是一种疾病，更是一种综合征［2］。Bcl-2蛋白家族分为三个亚家族:①Bcl-2亚家族:抑制细胞凋亡的发生，结构上拥有保守的BH1～BH4的结构域或跨膜区。BH1和BH2结构域是抗凋亡蛋白必备的结构域;②Bax亚家族:促进细胞凋亡，结构上缺BH4结构域;③BH3亚家族:结构上仅有BH3结构域，促进细胞凋亡。Bcl-2基因是细胞凋亡调控基因，Bcl-2蛋白是Bcl-2基因功能活动的外在表现形式。定位于染色体18q213，编码229个氨基酸，是Bcl-2亚家族中一个被发现的凋亡蛋白。Bcl-2蛋白可以通过维护线粒体膜的稳定，阻止其释放凋亡因子发挥抗凋亡作用［3］。Bax是与Bcl-2同源的类似物，由192个氨基酸残基组成，分子量为21KDa，定位于人类第19号染色体q13.3～13.4上，Bax的主要作用是抗Bcl-2的生物活性，主要作用是加速细胞死亡，并与Bcl-2一起调节细胞凋亡。

实验中发现Bcl-2及Bax在正常妊娠流产组及反复发作自然流产组都有阳性表达，无论在细胞滋养细胞还是合体滋养细胞中，Bcl-2在正常流产组呈高表达，而在RSA组织中呈低表达，二组中的表达有显著性的统计学意义。这与李威等［4］研究相符。Bcl-2蛋白不仅通过对胚胎细胞自身的调节，还可以通过对绒毛组织、免疫器官等支持组织的调节来实现对胚胎的保护作用。Bax的表达则正好相反，在正常流产组低表达，而在RSA则是高表达，也具有明显的统计学意义。Bax通过抑制Bcl-2的生物活性，Bax一起调节细胞凋亡。在相关性分析中二者呈负相关，r=-0.53，P＜0.01，具有明显的统计学意义。可能Bcl-2对Bax生物活性有抑制作用，使Bax无法发挥蛋白水解作用，从而使细胞凋亡无法进行。反复发作自然流产中Bcl-2的表达下降，Bax生物活性抑制因素解除，Bax表达逐渐升高，从而促进细胞凋亡的发生，影响了绒毛的发生、发育，从而导致了RSA的发生。张金萍等［5］在孕5周～7周绒毛及蜕膜中发现Bcl-2蛋白于孕5周表达于绒毛合体滋养细胞的细胞质和细胞核中，一直持续到孕7周。促凋亡的Bax蛋白在孕5～7周绒毛细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中均未见明显阳性表达，孕6周Bax蛋白表达于极少部分蜕膜细胞的细胞质。早孕期的Bcl-2蛋白的表达能有效地使蜕膜组织增殖、分化、蜕膜化，为胎盘形成做准备。Bc1-2和Bax蛋白在人早孕过程中参与了绒毛滋养层细胞的增殖和分化，子宫内膜蜕膜化的过程，在绒毛的发生、发育、胎盘形成和组织结构改建及功能完善等方面发挥着重要作用。米亚英等［6］观察Bcl-2和Bax在孕13 d自然流产与正常妊娠模型小鼠蜕膜组织中的表达，发现自然流产模型小鼠蜕膜细胞及子宫腺体上皮细胞Bcl-2的表达低于正常妊娠模型。可见Bcl-2的低表达和Bax的高表达可能参与了自然流产的发生。可见Bcl-2及Bax在妊娠绒毛组织中一旦表达发生异常，Bcl-2表达降低，Bax表达升高，则会造成二者表达失衡，从而诱发凋亡过度，影响绒毛的生长发育，使正常妊娠无法维持，便造成了RSA的发生。所以，Bcl-2/Bax平衡对妊娠的维持是很重要的，我们能否通过对这方面的研究，在临床治疗方面提供新的治疗方式，从而为RSA患者解除疾苦，是值得我们继续更深入的研究。

［1］Manoj kumar Panfey，Seema Thakur，Suraksha Agrawal．Lymphocyte immunotherapy and its probable mechanism in the maintenance of pregnancy in women with recurrent spontaneous abortion．Arh Gynecol Obstet，2004，269(6):161-172．

［2］Choi YK，Kwak-Kim J.Cytokine gene polymorphisms in recurrent spontaneous abortions:a comprehensive review.Am J Reprod Immunol，2008，60(3):91-110．

［3］倪永林．Bcl-2蛋白家族对卵泡和早期胚胎生长发育的调节．癌变畸变突变，2008，20(2):166-168．

［4］李威，王连卿．小鼠早期胚胎发育过程中的细胞凋亡及凋亡基因的表达的监测．细胞生物学杂志，2006，28(4):592-602．

［5］张金萍，刘学红．Bcl-2和Bax蛋白在人早孕胎盘绒毛和蜕膜组织中的表达．解剖学报，2008，39(4):590-593．

［6］米亚英，张列转．自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的研究．中国免疫学杂志，2008，24(7):737-739．

The expression and significance of Bcl-2，Bax in the recurrent spontaneous abortion

ZHANG Juan．Ma-ternal and Child Health Hospital of Zibo City，zibo，Shandong，255000

ObjectiveTo explore the expression and relationship of Bcl-2，Bax in trophoblast cells in recurrent spontaneous abortion.Methods50 cases of recurrent spontaneous abortion as the study group，30 cases of normal pregnancy as the control group，detected Bcl-2，Bax expression on villous cytotrophoblast and syncytial trophoblast cells by Immunohistochemistry SP method.Resultsthe expression of Bcl-2 in the experimental group was significantly lower than the control group，while the expression of Bax in the experimental group was significantly higher than the control group.And negative correlation between the expression of Bax and Bcl-2.ConclusionLow expression of Bcl-2，high expression of Bax，expression imbalance between them may an important factor in recurrent spontaneous abortion．

Recurrent spontaneous abortion;Bcl-2;Bax

255000山东省淄博市妇幼保健院妇科