HPLC法测定复方止咳清肺胶囊中有效成分含量的研究

张新勇,刘丽芳,徐中南,张来芳,王宇新,霍立茹

(1.南京长澳医药科技有限公司,江苏南京 210038;2.中国药科大学;3.连云港正大天晴制药有限公司)

复方止咳清肺胶囊处方源自我国明代医学典籍《韩氏医通》经典方“三子养亲汤”三子养亲汤组方简洁而严谨,方中白芥子温肺理气,利膈消痰;莱菔子降气行痰,消食导滞;紫苏子降气祛痰,止咳平喘。三药皆有行气消痰之功,相互配合,相得益彰。为了更好地发挥其止咳清肺、化寒祛痰的治疗效果,我课题组按照现行中药六类新药的要求对其工艺和质量进行了深入研究,将其制成剂量小、药效高、易于服用、携带方便的现代新制剂—胶囊剂,已经申报并获得了国家药品监督管理局颁发的新药证书。现将其制剂中的主要有效成分的含量测定方法研究报道如下。

在本品中白芥子和莱菔子的原植物来源分别为十字花科的 Sinapis a lba L.,Raphanus sa tivus L.,这两种药材中均含有芥子碱硫氰酸盐[1-3],而且含量较高,该成分据报道有降压、抗炎、抗腹泻活性[1,4]。所以选择测定本品芥子碱硫氰酸盐的含量以控制本品的内在质量。研究内容如下。

1 仪器与药品

仪器:日本岛津 LC-6A高效液相色谱仪惠普HP3395A记录仪

对照品的来源及纯度:芥子碱硫氰酸盐自行制备和纯化,纯度大于 98%(HPLC图谱见下图)。

药品:磷酸二氢钾、甲醇均为分析纯,乙腈为色谱纯 (进口)。

2 色谱条件与系统适用性试验

用 Alltech pheayl柱,乙腈 -0.08 mol/L磷酸二氢钾溶液 (15∶85)为流动相。检测波长 326 nm。理论塔板数按芥子碱峰计算为 3 747,芥子碱峰半峰宽:0.496,杂质峰半峰宽:0.363,得分离度为 2.8。

3 标准曲线

精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品 (五氧化二磷干燥器中减压干燥 48 h)2.14 m g,用 0.08 mol/L磷酸二氢钾溶液定容至 10 mL,精密吸取 2μL、4μL、5 μL、6μL、10μL,注入液相色谱仪,用上述色谱条件测定。以进样量 (μg)为横坐标,测得的对照品吸收度积分值为纵坐标绘制标准曲线 (见图1),并计算得过原点的线性回归方程:A=19275276.8C-392085.39,r=0.999 7。表明在质量 0.428～2.140 μg之间有良好的线性关系。

图1 复方止咳清肺胶囊有效成分含量测定标准曲线图

4 精密度试验

精密吸取对照品溶液 (0.075 m g/mL)20μL注入液相色谱仪,同上法测定。结果见表1。

表1 精密度试验

5 稳定性试验

取前项试液的对照品溶液,分别在 0,1,2,3,5,7、8小时后测定,进样 20μL。结果见表2。

表2 稳定性试验

结果表明其积分值在 8 h内基本稳定。

6 提取方法考察

(1)考察了超声提取与用索氏提取器回流提取两种方法,结果表明,超声提取 2 h,可以将被测成分提取完全,而索氏提取器回流提取则要 6 h以上。故以超声提取 2 h为佳。

(2)考察了同一样品用甲醇超声提取 1,2,3,4次 (200V,250W)的比较,结果表明用 50 mL甲醇超声提取 3次可以将待测成分提取完全。

表3 提取方法考察

7 重现性试验

取同一批号样品 5份,按样品测定项下的方法制备样品液,进样 20μL,计算含量。结果见表4。

表4 重现性实验

8 样品测定

取本品内容物适量,干燥至恒重,研细后过 60目筛,取约 0.2 g,精密称定,置 100 mL三角瓶中,加甲醇 50 m L超声提取 2 h后过滤,并用少量甲醇洗涤滤器,洗液并入滤液中,蒸干甲醇,残渣用 0.08 mo l/L磷酸二氢钾溶液溶解并定容至 50 mL量瓶中,摇匀,用微孔滤膜 (0.45μm)滤过,取续滤液,进样 20μL,依法测定,计算结果见表5。

表5 成药中芥子碱的含量

中试样品中所采用的白芥子药材购于连云港,芥子碱硫氰酸盐含量为 0.2%;莱菔子药材购于连云港,芥子碱含量为 0.1%。

9 回收率实验

精密称取样品 (含量为 1.352%)0.1 g加入精密称定的芥子碱硫氰酸盐标准品 1 m g,置 100 mL三角瓶中,同法制备供试品溶液,进样 20μL,同法测定计算,结果见表6。

表6 回收率实验

10 关于成药中芥子碱的含量限度

根据我们测定的几批白芥子、莱菔子药材的含量,再结合所测定成药中芥子碱硫氰酸盐的含量情况,故暂定复方止咳清肺胶囊每粒含芥子碱以芥子碱硫氰酸盐 (C16H24NO5·SCN)计算,不得少于2.4 m g。

[1] 李 书,畅行若.白芥子化学成分的研究[J].陕西新医药,1983,12(9):57-58.

[2] 王维兰,朱 进,李钟大,等.莱菔子降压活性成分的研究[J].中草药,1987,18(8):5-7.

[3] 徐国钧,徐珞珊,金蓉鸾,等.中国药材学:下册 [M].北京:中国医药科技出版社,1996:1224-1226.

[4] 张明发,沈雅琴.芥子碱的抗炎和抗腹泻作用[J].中药药理与临床,1996(1):29-31.