反相高效液相色谱法测定洁白胶囊中没食子酸含量

王 景，徐秀珍，夏文孝，李小萍

(1.宁夏多维药业有限公司，宁夏 银川 750101; 2.宁夏药品检验所，宁夏 银川 750100)

反相高效液相色谱法测定洁白胶囊中没食子酸含量

王 景1，徐秀珍2，夏文孝1，李小萍1

(1.宁夏多维药业有限公司，宁夏 银川 750101; 2.宁夏药品检验所，宁夏 银川 750100)

目的建立测定洁白胶囊中没食子酸含量的反相高效液相色谱法。方法以5C18－MS－Ⅱ柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)为固定相，甲醇－水－磷酸 (6∶94∶0.4)为流动相，检测波长272 nm。结果没食子酸进样质量浓度在3.32～39.84 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好，r=0.999 9(n=5);平均回收率为99.80%，RSD=2.50%(n=6)。结论该方法测定简便、快速、灵敏、重现性好，可用于测定洁白胶囊中没食子酸的含量。

反相高效液相色谱法;洁白胶囊;没食子酸;含量测定

洁白胶囊为国家中药保护品种，系由诃子、翼首草、丁香、肉豆蔻等中药提取加工而成的复方制剂，具有健脾和胃、止痛止吐、分清泌浊的功效，用于治疗胸腹胀满、胃脘疼痛、消化不良、呕逆泄泻。原药品标准收载于2005年版《中国药典(一部)》，无含量测定项。为提高质量标准的可控性，笔者参考文献[1－4]，采用反相高效液相色谱(HPLC)法测定洁白胶囊中没食子酸的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱系统，Waters 2487型紫外检测器;TU－1901型双光束紫外可见分光光度计;BP211D型Sartorivs电子分析天平。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110831－200302);洁白胶囊及其阴性样品(宁夏多维药业有限公司);甲醇(色谱纯，美国天地公司)，水(去离子水)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters 5 C18－MS－Ⅱ柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －水 －磷酸 (6 ∶94 ∶0.4);流速:1.0 mL/min;检测波长:272 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥器干燥24 h的没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，作为对照品溶液。取重量差异项下的本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)45 min，放冷，滤过，滤液置25 mL容量瓶中，用甲醇洗涤残渣和滤器，并入容量瓶中，再加甲醇稀释至刻度;精密吸取2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取除诃子外的其他药材，按样品处方比例及制备工艺制成缺诃子的制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，进行分析。结果见图1，没食子酸的保留时间约为11 min，与其他组分峰的分离度均大于1.5，阴性对照品溶液对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含没食子酸66.4 μg的对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.5，1.5，3.0，4.5，6.0 mL，分别置 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各精密吸取10 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，线性回归方程为Y=37 622X－20 872，r=0.999 9(n=5)。结果表明，没食子酸质量浓度在3.32～39.84 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

稳定性试验:吸取同一供试品溶液 10 μL，分别于 0，2，4，8，12，24 h时进行测定。结果峰面积的RSD=1.27%(n=6)，表明供试品溶液在常温下24 h内稳定性良好。

精密度试验:精密吸取质量浓度为20 μg/mL的对照品溶液10 μL，连续进样 6 次。结果峰面积的RSD=0.62%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定。结果没食子酸平均含量为2.27mg/粒，RSD=1.7%(n=6)。

加样回收试验:精密称取已知含量(5.775 mg/g)的样品6份，分别准确加入没食子酸对照品溶液各2份，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率。结果见表1。

表1 没食子酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

按供试品溶液制备项下方法分别制得3批供试品溶液，精密吸取 10 μL，依次进样，测定，每批次测定3次，按测得的峰面积积分值取平均值，计算含量。结果见表2。

3 讨论

考察了以甲醇－0.025 mol/L磷酸溶液(2∶98)、甲醇－水(13 ∶67)、0.2%甲醇的乙腈溶液 －0.1%三乙胺和 0.1%磷酸水溶液(1∶99)、甲醇 －四氢呋喃 －冰醋酸 －水(0.08 ∶0.64 ∶2 ∶97.28，v/v)、甲醇 －水－磷酸(6∶94∶0.4)为流动相时的效果，发现以甲醇－水－磷酸(6∶94∶0.4)为流动相较适宜，没食子酸的峰形尖锐，分离度好，色谱分析15 min内即可完成。

采用二极管阵列检测器检测，发现供试品溶液色谱中的没食子酸峰与对照品色谱峰均在272 nm波长有最大吸收，两者紫外吸收光谱完全一致，阴性对照无干扰，因此选用272 nm为测定波长。

表2 样品含量测定结果(n=3)

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:565.

[2]许乾丽，茅向军，熊慧林，等.HPLC测定宁泌泰胶囊中没食子酸的含量[J].中成药，2001，23(9):641.

[3]周 萍.高效液相色谱法测定生诃子及炒诃子中没食子酸含量[J].时珍国医国药，2001，12(4):291.

[4]陈秀勤，林 燕，康双龙，等.反相高效液相色谱法测定蒙成药八味清心沉香散中没食子酸的含量[J].中国民族医药杂志，2003，9(4):43－44.

Determination of Gallic Acid in Jiebai Capsules by RP－HPLC

Wang Jing1，Xu Xiuzhen2，Xia Wenxiao1，Li Xiaoping1(1.Ningxia Duowei Pharmaceutical Co.，Ltd.，Yinchuan，Ningxia，China750101;2.Ningxia Institute for Drug Control，Yinchuan，Ningxia，China750100)

ObjectiveTo establish a RP － HPLC method for the determination of gallic acid in Jiebai Capsules.Methods To determine the gallic acid content by HPLC with the 5C18－MS－Ⅱ column (250 mm ×4.6 mm，5 μm)as the stationary phase.The mobile phase was methanol－ water－ phosphoric acid(6 ∶94 ∶0.4).The detection wavelength was 272 nm.Results The linear range of gallic acid was 3.32 －39.84 μg/mL，r=0.999 9(n=5).The average recovery rate was 99.81% ，RSD2.50%(n=6).Conclusion The method is fast，simple，sensitive and repeatable，which can be used to determine the gallic acid content in Jiebai Capsules.

RP－HPLC;Jiebai Capsules;gallic acid;content determination

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)02－0041－02

王景(1967－)，女，高级工程师，研究方向为中药新剂型与新药，(电话)0951－6149306(电子信箱)wang.jing666@163.com。

2010－02－06;

2010－08－12)