高效液相色谱法测定腺苷钴胺片的含量及含量均匀度

刘红莉，宋更申，郭 毅，孙 婷，刘俊红

(1.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011; 2.河北维尔康制药有限公司，河北 石家庄 050031)

高效液相色谱法测定腺苷钴胺片的含量及含量均匀度

刘红莉1，宋更申1，郭 毅1，孙 婷1，刘俊红2

(1.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011; 2.河北维尔康制药有限公司，河北 石家庄 050031)

目的建立测定腺苷钴胺片腺苷钴胺含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用Inertsil ODS－3色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(15∶85，用磷酸调pH至3.2)为流动相，检测波长260 nm，流速1.0 mL/min。结果腺苷钴胺质量浓度在20～500 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，回归方程A=8.797 36C+4.202 2(r=0.999 9)。结论HPLC法操作简单，测定结果准确，可用于腺苷钴胺片的含量和含量均匀度的测定。

高效液相色谱法;腺苷钴胺片;含量测定

腺苷钴胺片是维生素类药物，可被人体直接吸收利用，活性强，与组织细胞亲和力强，排泄较慢，主要用于巨幼红细胞性贫血、营养不良性贫血、妊娠期贫血，亦用于神经性疾患如多发性神经炎、神经根炎、三叉神经痛、坐骨神经痛、神经麻痹等的治疗。腺苷钴胺片系2005年版《中国药典(二部)》收载品种[1]，其中含量测定方法是紫外分光光度法比色法，操作烦琐，还使用剧毒氰化钾，对人体危害很大，误差也大。为此，笔者用高效液相色谱法测定该品种含量，报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。腺苷钴胺对照品(中国药品生物制品检定所，批号为140658－200501);腺苷钴胺片(市售品);乙腈(色谱纯)，磷酸、磷酸二氢钾(分析纯)，水(高纯水)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Inertsil ODS－3 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(15∶85，用磷酸调pH至3.2);检测波长:260 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:20 μL。在此条件下，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 方法学考察

专属性试验:在上述色谱条件下，空白溶剂在腺苷钴胺位置无吸收峰，表明溶剂对测定无干扰。按照模拟处方，配制不含主药的溶液，同法测定。结果显示，辅料在此色谱条件下有吸收峰，但不干扰腺苷钴胺主峰的测定。腺苷钴胺对照品经酸、碱、氧化、光照、高温破坏所产生的降解产物能与主成分的色谱峰完全分离(典型光谱见图2。

线性关系考察:取腺苷钴胺对照品，用水溶解并稀释成20，50，100，200，300，400，500 μg/mL 的溶液，并依法测定含量。以腺苷钴胺质量浓度(μg/mL)为横坐标(C)、腺苷钴胺的峰面积为纵坐标(A)绘制标准曲线。标准曲线A=8.797 36C+4.202 2，r=0.999 9(n=7)。结果表明，腺苷钴胺质量浓度在20～500 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

图2 破坏试验高效液相色谱图

精密度试验:取对照品溶液，照含量测定项下方法重复进样6次，测定峰面积。结果的RSD为0.17%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，8，12 h时取样测定峰面积。结果的RSD为0.29%，表明12 h内供试品溶液稳定。

回收率试验:根据各药厂提供的处方，称取与主药相应的最大量的各种辅料量，精密加入腺苷钴胺对照品适量，再加水超声处理20 min使溶解，加水定容至刻度，摇匀，取溶液，以4 000 r/min转速离心处理15 min，取上清液，用水配制成质量浓度为测定质量浓度80%，100%，120%的溶液，照含量测定项下的方法测定含量，计算回收率。结果见表1。结果表明，该方法回收率良好，辅料不影响含量测定。

表1 回收率试验结果(n=9)

耐用性试验:用3根不同的C18色谱柱，对同一批样品进行试验，结果3根柱子的分离度均良好。

2.3 样品测定

含量:避光操作。分别取样品30片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于腺苷钴胺2.5 mg)，置25 mL量瓶中，加水适量，超声20 min使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，取溶液，以4 000 r/min转速离心处理15 min，取上清液作为供试品溶液。进样 20 μL，测定含量(表 2)。

表2 样品含量均匀度测定结果

含量均匀度:避光操作。取本品1片，除去包衣，置5 mL量瓶中，加水适量，超声处理20 min使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，取溶液，以4 000 r/min转速离心15 min，取上清液作为供试品溶液。精密量取20 μL，注入液相色谱仪，测定含量均匀度，结果见表2。

3 讨论

原含量均匀度检查是根据紫外吸收响应值间接求出每片的含量，高效液相色谱法能够直接测定每片的含量，结果更准确。本品的规格很小，辅料及包衣对含量测定的影响很大，要尽量去除包衣，微露里面粉红色片心，否则测定的含量结果会偏低。由于辅料的影响，该品种不适合用滤纸过滤，应采用离心的方法取上清液试验。本品见光容易分解，所测项目均须严格避光操作。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:816－817.

R927.7;R977.2

A

1006－4931(2011)02－0040－02

2009－10－25)