羟丙基－β－环糊精－芒果苷包合物在小鼠体内的药代动力学研究

李 杰，周 慧，郑一敏，曾品涛，王琳琳，胥秀英，傅善权

(重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400050)

羟丙基－β－环糊精－芒果苷包合物在小鼠体内的药代动力学研究

李 杰，周 慧，郑一敏，曾品涛，王琳琳，胥秀英，傅善权

(重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400050)

目的建立测定小鼠血浆中羟丙基－β－环糊精－芒果苷包合物质量浓度的高效液相色谱(HPLC)法，并用于药代动力学研究。方法小鼠一次性灌胃给予3.0 g/kg羟丙基－β－环糊精－芒果苷包合物后，用HPLC法检测不同时间间隔的血药浓度，计算药代动力学参数。结果小鼠一次性灌胃给予羟丙基－β－环糊精－芒果苷包合物后，分布相半衰期(t1/2α)为(8.226±0.972)h，消除相半衰期(t1/2β)为(8.674±1.112)h，药时曲线下面积(AUC)为 (3.058±0.836)μg·h/kg。结论HPLC法简便、可靠，可用于芒果苷包合物药代动力学研究，小鼠体内药代动力学过程符合二房室开放模型。

芒果苷;包合物;高效液相色谱法;药代动力学

芒果苷(mangiferin)是一种四羟基吡酮的碳糖苷，属双苯吡酮类黄酮类化合物，存在于多种植物中。现代药理研究表明，芒果苷具有广泛的药理作用，如抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗变态反应、增强免疫功能、对血脂质的抑制效应、降血糖和保肝利胆作用等[1－3]。但芒果苷溶解度较差，难溶于水，也不溶于有机溶剂，严重限制了其制剂的开发[4]。关于芒果苷的包合及药代动力学研究迄今尚未见文献报道。本试验中，将芒果苷与羟丙基－β－环糊精(HP－β－CD)制成HP－β－CD－芒果苷包合物，以增加药物的溶解度，并建立了测定小鼠血浆中芒果苷质量浓度的高效液相色谱(HPLC)法，研究了芒果苷在小鼠体内的药代动力学过程，为进一步研究其药理作用及其制剂开发提供理论依据。

1 仪器与试药及动物

Waters高效液相色谱仪(Waters 1525二元泵，Waters 2487紫外检测器);Breeze液相色谱工作站(Waters公司);85－1型恒温磁力搅拌器(江苏中大仪器厂);CR22F型高速离心机(日本日立公司);KQ－50型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂);202－I型恒温烘箱(上海浦东荣丰科学仪表有限公司)。芒果苷(实验室自制，纯度为98%，批号为070608);HP－β－CD(上海昆山化工厂，批号为080301)。昆明种小鼠，体重18～22 g，由重庆医科大学实验动物中心提供。

2 方法与结果

2.1 HP－β－CD－芒果苷包合物制备

预试验比较了搅拌法、超声法和研磨法的包合效果，提示搅拌法包合效果较好。由搅拌包合的预试验得知，影响HP－β－CD－芒果苷包合效果的主要因素为芒果苷与HP－β－CD的比例(因素A)、乙醇体积分数(因素B)、搅拌时间(因素C)。采用L9(34)正交试验 法 ，以 HP－β－CD－芒果苷包合物的载药量为指标，以优选出确定最佳包合条件。因素水平见表1。

正交试验结果表明，芒果苷与HP－β－CD按1∶0.5摩尔比投料、以体积分数为70%的乙醇作溶剂、搅拌时间1.5 h时制备包合物最适宜。按此最佳包含条件进行HP－β－CD－芒果苷包合物的制备，所得包合物溶解度约增加300倍，收率和载药量分别为94.53%和12.58%。包合物收率=包合物收得量/(芒果苷投入量+HP－β－CD投入量)×100%，包合物载药量=包合物中芒果苷量/包合物收得量×100%。

表1 因素水平表

2.2 血浆样品制备

动物于试验前禁食12 h，自由饮水。将正常小鼠随机分为14个试验组，每组对应一个时间点，每个时间点用5只小鼠，同时设空白对照。给药剂量以芒果苷计为3.0 g/kg，分别于灌胃给药后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，20.0，24.0，30.0 h时从股动脉取血，血液置肝素钠离心管中，以3 000 r/min转速离心10 min，分离出血浆。精密吸取血浆样品0.2 mL，置离心管中，加入甲醇2.0 mL，旋涡混合3 min后，以3 000 r/min转速离心10 min，在40℃以下用氮气流吹干，残渣加入0.2 mL甲醇溶解，0.45 μm 滤膜滤过，备用。

2.3 血药浓度测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Hypersil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇和0.04%磷酸溶液，比例在0～15 min内由22∶78变化至32∶68;流速:1.0 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。在该色谱条件下，分别测定芒果苷对照品、空白血浆样品以及给药后制备的血浆样品，色谱图见图1。可见，色谱峰分离良好，血浆中内源性物质不干扰测定。

图1 高效液相色谱图

2.3.2 对照品溶液制备

精密称取芒果苷对照品适量，用甲醇溶解，制成质量浓度为0.10 g/L的溶液，经0.45 μm滤膜滤过，作为对照品溶液。

2.3.3 方法学考察

线性关系考察:分别精密量取对照品溶液适量，加小鼠空白血浆，稀释制成质量浓度分别为 0.01，0.10，0.40，0.80，1.60，3.20 μg/mL的溶液，后续处理同2.2项下血浆样品制备方法操作，以甲醇定容至最终质量浓度分别为 0.01，0.10，0.40，0.80，1.60，3.20 μg/mL 溶液，进样 10 μL，以色谱峰峰面积 (Y)对质量浓度(X)进行线性回归，线性回归方程为Y=75 740X+7 274，r=0.999 5(n=6)。结果表明，芒果苷质量浓度在 0.01 ～3.20 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样6次。结果芒果苷峰面积的RSD为1.36%(n=6)，表明仪器进样精密度良好。

稳定性试验:取2.2项下方法处理的血浆样品10 μL，分别于0，2，4，8，16 h 时进样，依法测定。结果芒果苷峰面积的RSD为1.98%(n=5)，表明血浆样品在16 h内稳定。

回收率试验:分别取3份不同量的HP－β－CD－芒果苷包合物，各加入0.2 mL空白血浆，混匀，制成高、中、低3种不同质量浓度的血浆样品(以芒果苷计)。后续处理按2.2项下血浆样品制备方法操作，测定回收率。结果见表2。

表2 回收率试验结果(n=5，±s)

表2 回收率试验结果(n=5，±s)

加入质量浓度(μg/mL)0.10 0.50 1.00测定质量浓度(μg/mL)0.096 ± 0.004 0.471 ± 0.022 0.978 ± 0.037回收率(%)96.0 ± 4.0 94.2 ± 4.4 97.8 ± 3.7 RSD(%)2.21 2.78 1.66

2.4 药代动力学试验

小鼠一次性灌胃给予HP－β－CD－芒果苷包合物后，平均血药浓度－时间曲线见图2。试验数据的测定值以均值和标准差()表示，采用3P97药动学软件进行曲线拟合。根据药代动力学房室模型的判断方法，确定HP－β－CD－芒果苷包合物在小鼠体内的过程符合二房室模型，主要药代动力学参数见表3。

图2 平均血药浓度－时间曲线(n=5，±s)

表3 药代动力学参数(n=5，±s)

表3 药代动力学参数(n=5，±s)

参数分布相药物量(A，μg/mL)分布相速率常数(α，h－1)消除相药物量(B，μg/mL)消除相速率常数(β，h－1)延滞时间(Lag time，h)分布相半衰期(t1/2α，h)消除相半衰期(t1/2β，h)转运速率常数(K21，h－1)消除速率常数(K10，h－1)转运速率常数(K12，h－1)达峰时间(Tpeak，h)最大血药浓度(Cmax，μg/kg)曲线下面积(AUC，μg/h·kg)消除率[CL，g/(kg·h)]分布容积(V，g/kg)数值0.224 ± 0.012 0.084 ± 0.009 0.290 ± 0.039 0.080 ± 0.015 0.429 ± 0.020 8.226 ± 0.972 8.674 ± 1.112 0.082 ± 0.011 0.082 ± 0.014 0.0002 ± 0.0001 8.591 ± 1.232 0.124 ± 0.017 3.058 ± 0.836 0.981 ± 0.104 12.009 ± 1.124

3 讨论

本试验中，对芒果苷与HP－β－CD的包合条件进行了探索，并用正交试验优化最佳包合工艺;首次建立了测定小鼠体内HP－β－CD－芒果苷质量浓度的HPLC法，该法灵敏度高、准确度好、特异性强，且芒果苷与内源性杂质峰分离良好且峰形良好，符合生物样本测定的要求。

笔者首次研究了小鼠单剂量灌服HP－β－CD－芒果苷的体内药代动力学特点，从药代动力学参数可见，芒果苷在小鼠体内的药代动力学过程符合二房室开放模型，且分布较慢、消除较快。为了更好地评价芒果苷的药用价值，对了芒果苷的其他药效学性质，以及在其他动物体内的组织分布、排泄与代谢产物、作用特点尚待进一步的研究。

[1]邓家刚，曾春晖.芒果叶及芒果苷30年研究概况[J].广西中医学院学报，2003，6(2):44－49.

[2]李好文，邓家刚，邓 静.芒果苷国外研究进展[J].广西中医学院学报，2003，6(4):62－66.

[3]廖洪利，吴秋业，叶光明，等.芒果苷药理研究进展[J].天津药学，2005，17(2):50 －52.

[4]王志萍，邓家刚，王 勤，等.羟丙基－β－糊精包合法提高芒果苷溶解度的研究[J].中成药，2008，30(8):1 123－1 156.

Study on Pharmacokinetics of HP－β－CD－Mangiferin in Mice

Li Jie，Zhou Hui，Zheng Yimin，Zeng Pintao，Wang Linlin，Xu Xiuying，Fu Shanquan
(College of Pharmacy and Bioengineering，Chongqing University of Technology，Chongqing，China400050)

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of hydroxypropyl(HP)－β－cyclodextrin(CD)－mangiferin in mice and to investigate its pharmacokinetics.Methods After administration of 3.0 g/kg inclusion compound of HP －β －CD －mangiferin by gavage for once in mice，the serum concentrations at differential time intervals were determined by RP －HPLC.The compartment model was calculated with 3P97 software.Resultst1/2αwas(8.226 ± 0.972)h，t1/2βwas(8.674 ± 1.112)h andAUCwas(3.058 ± 0.836) μg·h/kg in mice after once gavage administration of HP－β －CD－mangiferin inclusion compound.Conclusion The HPLC method is simple and reliable，which can be applied to the pharmacokinetic study.The kinetics process of HP－β－CD－mangiferin is fitted to two－compartment model in mice.

mangiferin;inclusion compound;HPLC;pharmacokinetics

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)02－0024－02

2010－01－22)