固相萃取－气相色谱法测定调味品中的9种防腐剂

海华，兰希，李光浩

（大连民族学院a.生命科学学院;b.现代教育中心，辽宁大连 116605）

固相萃取－气相色谱法测定调味品中的9种防腐剂

海华a，兰希a，李光浩b

（大连民族学院a.生命科学学院;b.现代教育中心，辽宁大连 116605）

建立了一种简单、快速、准确的固相萃取－气相色谱法，用于分离和测定调味品中常见的9种防腐剂（山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、6种尼泊金酯类），样品经C18固相萃取柱净化，气相色谱测定，外标法定量。9种防腐剂在0.10×10－4～1.00×10－4g·mL－1范围线性良好，相关系数为0.991 6～0.998 7，回收率为90.72%～109.43%，相对标准偏差为1.25%～4.10%。方法净化效果好，可以满足日常食品中多种防腐剂的检验要求。

防腐剂;调味品;固相萃取;气相色谱

防腐剂是在食品生产、加工和存储过程中添加的，以达到延长食品保存期限的化合物。过量摄入会加重人的肝、肾负担［1］，我国对这些防腐剂的使用量和残留量都有严格的规定［2］。因此，建立一种简单、快速，同时检测多种防腐剂的方法，对实现行业监管意义重大。目前，测定防腐剂的方法主要有高效液相色谱法［3－6］、毛细管电泳法［7］、气相色谱法［8－13］等。气相色谱法由于成本低、操作简单，成为近年来迅速发展的检测技术，也得到了越来越广泛的应用，但目前气相色谱法测定的防腐剂种类少，分离时间过长，如有采用毛细管气相色谱内标法同时测定食品中8种防腐剂的时间达20分钟以上［14］。本研究采用毛细管气相色谱，对实际样品进行超声和固相萃取处理，利用色谱升温程序能够在8min内分离和检测出9种食品中常见的防腐剂（山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸和6种尼泊金酯类）。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪器

GC－2010气相色谱仪（日本岛津）;GHL－300氢气发生器、GNB－300氮气发生器和GAX－2000空气发生器（北京汇佳精仪公司）;12管固相萃取仪（迪马公司）;Milli Q超纯水仪;毛细管柱: Rtx－1型，柱型15 m×0.53 mm i.d.×1.5 μm。1.1.2试剂

山梨酸（99%）、苯甲酸（97%）、脱氢乙酸（98%）、对羟基苯甲酸甲酯（99%）、对羟基苯甲酸乙酯（99%）、对羟基苯甲酸丙酯（99%）标准品均为分析纯（Aldrich Chemical Company.Inc.USA）;对羟基苯甲酸异丙酯（99%）、对羟基苯甲酸异丁酯（99%）、对羟基苯甲酸丁酯标准品（99%）均为分析纯（Tokyo Kasei Kogyo Co.，Ltd.Japan）;乙醇为色谱纯（Honeywell International Inc.USA）;实验用水为超纯水。

1.2 样品的前处理与净化

每种样品称取5 g，用盐酸调节至样液pH值为4，超声30 min，用水定容至25 mL;取C18固相萃取小柱加3 mL甲醇活化，再加3 mL水平衡小柱，然后取经上述步骤处理过的样品清液10 mL，以1.0 mL·min－1流速通过萃取柱，用3 mL超纯水清洗萃取柱，弃去清洗液。最后用3 mL乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，供气相色谱分析。

1.3 气相色谱条件

进样口温度为220℃;检测器温度为290℃;载气流速为10 mL·min－1;柱温:起始100℃，以20℃·min－1升至150℃，保持1 min;再以10℃· min－1升至190℃，保持1 min;再以50℃·min－1升至280℃，保持1 min。不分流进样方式，进样量为1 μL。9种防腐剂的峰谱如图1。

图1 9种防腐剂标准品色谱图

2 结果与讨论

2.1 SPE柱的选择和洗脱条件的优化

对于酱油和陈醋样品，用液液萃取容易产生乳化现象，使用固相萃取技术可以防止乳化。选择6种固相萃取小柱，分别测定其对9种防腐剂的回收率，通过比较发现，CleanertTM C18小柱总体回收率最高。

固相萃取中，使用的洗脱剂的pH值不同，样品回收也会受到影响。经实验发现，pH值为4时回收最好。为了进一步提高固相萃取的效果，还对上样和洗脱时溶液的流速进行了优化，最后确定流速为1.0 mL·min－1，既可在较短时间内将样品溶液通过萃取柱，又可保证被分析组分不受损失。

2.2 定性与定量测定

对9种防腐剂的混合标准溶液和实际样品进行分析，通过对照保留时间，并经过添加实验增加峰高的方法对9种防腐剂的色谱峰进行定性。

气相色谱定量分析采用外标峰面积法，在确定的最优气相色谱条件下，对质量浓度分别为100，80，60，40，20，10 μg·mL－1的标准溶液进行测定，经多次测量后取平均值，得出几种防腐剂的拟合标准曲线见表1。

表1 9种防腐剂的标准曲线和相关系数

2.3 精密度、回收率和检测限

取5种食醋样品，按每克添加100 μg标准品测定防腐剂的回收率，每个样品测定5次。用相对标准偏差RSD表示精密度，9种防腐剂分别小于4.10%、3.54%、3.24%、1.25%、3.20%、2.42%、1.87%、2.89%、3.20%。样品的回收率结果见表2，介于90.72%～109.43%。以基线噪声的3倍作为检出限，9种防腐剂的质量浓度分别为0.343，0.272，0.504，0.332，0.317，0.292，0.299，0.282，0.286 μg·mL－1。

表2 9种防腐剂的食醋添加回收率%

2.4 实际样品测定

从超市中选购5种常见酱油进行测定，每种样品称取5 g，用盐酸调节pH值为4，超声30 min，用水定容至25 mL;C18柱3 mL甲醇活化，3 mL水平衡后，取处理过的样液10 mL，以1.0 mL·min－1流速过柱，3 mL超纯水清洗，最后用3 mL乙醇洗脱，对洗脱液进行气相色谱测定。其防腐剂的测定结果见表3，每种样品中都含有多种防腐剂，但含量均未超过GB2760规定的国家标准。

表3 5种酱油样品中防腐剂的质量分数μg·g－1

3 结论

研究表明，对于具有复杂基质的调味品样品，采用超声、稀释、调节pH值和固相萃取净化，能更有效地富集待检物。对于宽沸程样品，采用程序升温，可使不同沸点的组分在适当的温度下得到分离，提高柱效，缩短分离时间。本研究中9种防腐剂在8 min内就得到了很好的分离。该方法快速、简单，能够很好地满足日常食品中多种防腐剂的测定要求。

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Determination of Nine kinds of Preservatives in Condiment by SPE－GC

HAI Huaa，LAN Xia，LI Guang－haob
（a.Department of Life Sscience;b.Modern Educational Technology Center，Dalian Nationalities University，Dalian Liaoning 116605，China）

A simple，rapid，and accurate method was presented for the separation and determination of the 9 kinds of antiseptic（sorbic acid，benzoic acid，dehydroacetic acid and 6 kinds of p－hydroxybenzoate）in the condiment by using a solid phase extraction following gas chromatography.The samples were purified with C18 solid phase extraction columns.Then we used the GC method for measurement and external standard method for quantitative.The 9 kinds of antiseptic show good linear at the range from 0.10×10－4to 1.00×10－4g·mL－1and the linear correlation coefficient is between 0.9916 and 0.9987.In the concentration 100μg·g－1，the recovery was 90.72%～109.43%and the relative standard deviation is 1.25%～4.10%.This simple，rapid method was suitable for the determination of preservatives in the condiment，thus it can meet inspection requirements of a variety of preservatives in food.

preservatives;condiment;SPE;GC

0657

A

1009－315X（2011）03－0253－03

2010－10－26;最后

2011－03－30

海华（1977－），女，辽宁营口人，讲师，主要从事食品分析研究。

李光浩（1953－），男，辽宁铁岭人，教授，硕士生导师，主要从事环境检测与评价研究，E－mail:lghao@dlnu.edu.cn。

（责任编辑 邹永红）