高效液相色谱法测定金葱粉中的罗丹明B含量

郝燕花 闫正 邓荔

(河北大学化学与环境科学学院，河北保定 071002)

高效液相色谱法测定金葱粉中的罗丹明B含量

郝燕花 闫正 邓荔

(河北大学化学与环境科学学院，河北保定 071002)

建立了金葱粉中罗丹明B的提取、富集净化和测定的方法。样品经加热萃取、聚酰胺吸附罗丹明B、碱液解吸、蒸发、定容，用高效液相色谱-紫外检测器进行测定。测定条件：色谱柱为ODS C18；流动相为甲醇-水(体积比为70∶30)；流速为1.5 mL／min；检测波长为550 nm。罗丹明B在0.14～22 μg／mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 8)。方法的回收率为91.7%～104.7%，测定结果的相对标准偏差为0.46%～1.45%(n=5)。方法的检出限(S／N=3)为0.033 μg／mL，定量限(S／N=10)为0.11 μg／mL。该方法适用于测定金葱粉中的罗丹明B含量。

高效液相色谱法 金葱粉 罗丹明B

金葱粉作为一种效果独特的表层处理材料，广泛用于工艺品、化妆品、高档装潢、油漆、服饰、玻璃工艺及皮革加工等领域，其特点在于增强产品的视觉效果，使装饰部分凹凸有层次，更具立体感。罗丹明B(Rhodamine B)又称玫瑰红B，亮绿色结晶粉末，是一种具有鲜桃红色的人工合成色素。若将罗丹明B加到金葱粉中用于化妆行业则对人体有潜在的致癌和致突变危害性，国家禁止使用。目前，还未见有金葱粉中的人工合成色素的处理和检验方法。笔者参照食品中人工合成色素的测定方法［1-3］，建立了金葱粉中罗丹明B的测定方法。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：LC-10A型，SPD-10A紫外可见检测器，日本岛津（苏州）公司；

紫外可见分光光度计：UV-4802H型，尤尼柯(上海)公司；

电子天平：AG245型，瑞士Mettler Toledo公司；

自动双重纯水蒸馏器：SZ-93型，上海亚荣生化仪器厂；

甲醇：色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；

盐酸：AR，天津开发区跨跃工贸有限公司；

聚酰胺：74～150 μm(100～200 目 )，色谱级，上海天莲精细化工有限公司；

乙醇：AR，天津市进丰化工有限公司；

氨水：AR，天津市华东试剂厂；

盐酸溶液：体积分数为10%；

无水乙醇-氨水-水：体积比为7∶2∶1；

罗丹明B：AR，上海源叶生物科技有限公司；

实验用水：二次水。

1.2 样品预处理

准确称取0.02～0.03 g样品于烧杯中，加入100 mL二次水，加入2～3 mL盐酸溶液，将烧杯置于加热套上加热提取2 h，加热过程中补充二次水以防蒸干。过滤提取液，剩余残渣重复提取一次。合并提取液，加热蒸至20 mL左右，加入1 mL盐酸溶液，停止加热，冷却。称取2～4 g聚酰胺粉末于提取液烧杯中，将提取液调成糊状。用G3垂融漏斗抽滤，用二次水冲洗3次，弃去滤液。用无水乙醇-氨水-水搅拌解吸色素4～5次(每次10 mL)，抽滤，收集滤液于烧杯中，于加热套上加热蒸发至近干，冷却后用二次水溶解，定量转移至50 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，备用。上机测试前用0.22 μm水系微孔滤膜过滤。

1.3 标准溶液的制备

准确称取0.02 g罗丹明B标准样品于100 mL容量瓶中，制成罗丹明B的标准储备液。按1.2方法处理，制成 22、8.8、4.4、1.1、0.14 μg／mL 的系列标准工作溶液。

1.4 液相色谱条件

色谱柱：ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，迪马科技公司)；流动相：甲醇-水(体积比为70∶30)；流速：1.5 mL／min；进样量：20 μL；检测波长：550 nm。

1.5 色谱图

在1.4色谱条件下，罗丹明B标准品的色谱图见图1。

2 结果与讨论

2.1 样品处理条件的选择

以甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙腈等溶剂超声萃取样品，发现甲醇、二氯甲烷萃取样品中的色素较完全；乙腈、丙酮可部分萃取；正己烷和乙酸乙酯萃取率极低。试验发现甲醇萃取液的测定峰形很好，而二氯甲烷萃取液的峰形很差，表明甲醇作为萃取液的选择性优于二氯甲烷。采取加入盐酸溶液并加热的方式萃取样品时，萃取率高。考虑到甲醇有毒，且成本较高，故选择加入盐酸溶液并加热的方式萃取样品。盐酸溶液浓度过大，则样品萃取溶液变黄，无罗丹明B色谱峰，经试验，确定用体积比为10%的盐酸溶液，试验发现酸化变色的样品，加碱后恢复原色，上机测试有罗丹明B峰。样品的解吸液中含有无水乙醇和氨水，可直接采用加热蒸干法除去。

2.2 流动相的选择

试验了不同比例的乙腈与水、甲醇与水及甲醇与0.02 mol／L乙酸铵溶液作流动相的效果。发现乙腈与水作流动相时，罗丹明B的色谱峰变宽，拖尾较严重，且响应信号低，信噪比小。流动相为甲醇-水(体积比为75∶25)时，杂质峰与罗丹明B峰未完全分离；甲醇-水(体积比为70∶30)时，干扰峰与罗丹明B峰能完全分离，峰形好。甲醇与0.02 mol／L乙酸铵溶液为流动相时，乙酸铵溶液-甲醇(体积比为25∶75)能将测定峰和干扰峰分离开，分离效果和峰形都很好，但和甲醇-水为流动相相比，响应信号和信噪比没有显著变化。综合考虑，选择甲醇-水(体积比为70∶30)为流动相。

2.3 检测波长的确定

将罗丹明B的标准品和样品分别用紫外-可见分光光度计扫描，发现在550 nm左右有最大吸收。试验了500～600 nm波长对信噪比的影响，结果见图2。由图2可知，550 nm处罗丹明B信噪比最大，故选择550 nm作为检测波长。

2.4 线性范围、检出限和定量限

在最佳实验条件下，对1.3罗丹明B系列标准工作溶液进行HPLC分析，以罗丹明B的峰面积(y)为纵坐标，质量浓度(x，μg／mL)为横坐标进行线性回归，得线性回归方程为y=7 711.1+85 757.9x。在0.14～22 μg／mL浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性相关系数为0.999 8。以信噪比(S／N)为3和10时，分别测得方法的检出限为0.033 μg／mL，定量限为 0.11 μg／mL。

2.5 方法的回收率和精密度

按1.2处理样品并进行加标回收试验，回收试验结果见表1。由表1可知，回收率为91.7%～104.7%，说明方法的准确度较高；测定值的相对标准偏差在0.46%～1.45%之间，说明方法的精密度良好。

表1 回收试验结果(n=5)

2.6 样品的测定

采用建立的方法对8个样品进行分析测定，测定结果见表2。

表2 样品中罗丹明B含量的测定(n=5)

3 结语

建立了高效液相色谱法测定金葱粉中罗丹明B的方法，对样品预处理条件、流动相和检测波长等条件的选择进行了研究。该方法的灵敏度和准确度高，重现性好，为化妆品用金葱粉中违禁色素罗丹明B的测定提供了较好的分析方法。

［1］陈毓芳，林海丹，李为鹏，等.高效液相色谱法测定果汁和果蔬中柑橘红 2 号染料［J］.理化检验：化学分册，2011，47(5)： 536-538.

［2］陈青川，于文莲，王静.高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂［J］.色谱，2001，19 (2)： 105-108.

［3］杨闻翰，董媚娇，杜振霞.饮料中红花黄色素的固相萃取／超高效液相色谱-质谱测定［J］.分析测试学报，2010，29(5)： 455-459.

DETERMINATION OF RHODAMINE B IN GLITTER POWDER BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Hao Yanhua，Yan Zheng，Deng Li
(College of Chemistry and Environment Science，Hebei University，Baoding 071002，China)

A method for the extraction，purification，enrichment and determination of the rhodamine B in glitter powder was established. The sample was extracted by heating，rhodamine B in it was adsorbed by polyamide，resolved by lye，evaporated，diluted to volume and determined by high performance liquid chromatography-UV detector. Measurement conditions： column was ODS C18，mobile phase was methanol-water(volume ratio was 70∶30)，flow rate was 1.5 mL／min，detection wavelength was 550 nm. Rhodamine B had good linear relationship with the peak area in the range of 0.14-22 μg／mL(r=0.999 8). Recovery was 91.7%-104.7%. The RSD was 0.46%-1.45(n=5)%. Detection limit(S／N=3) was 0.033 μg／mL，and the limit of quantification(S／N=10) was 0.11 μg／mL. This method is suitable for determining the content of rhodamine B in glitter powder.

high performance liquid chromatography(HPLC)， glitter powder， rhodamine B

2011-08-12