异丙酚对大鼠急性坏死性胰腺炎的干预作用

吴敬医 张义胜 金孝岠 赵国海

·论著·

异丙酚对大鼠急性坏死性胰腺炎的干预作用

吴敬医 张义胜 金孝岠 赵国海

目的探讨异丙酚对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)的干预作用及其机制。方法54只雄性SD大鼠按随机表法分为假手术组、ANP组、异丙酚组。异丙酚组在ANP制模后经阴茎背静脉持续泵输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1。制模后3、6、12 h分批处死大鼠，取血检测血清淀粉酶、脂肪酶、一氧化氮(NO)、TNF-α、IL-6水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性，取胰腺组织常规病理检查并评分。结果制模后6 h，假手术组、ANP组和异丙酚组的血淀粉酶水平分别为(1743±370)U/L、(7745±1030)U/L和(5529±874)U/L；脂肪酶为(274.9±36.1)U/L、(1672±262)U/L和(1219±207)U/L；TNF-α为(1.110±0.276)mg/L、(3.191±0.279)mg/L和(2.361±0.281)mg/L；IL-6为(102.6±28.5)ng/L、(334.1±34.0)ng/L和(268.6±29.8)ng/L；NO为(42.2±18.1)μmol/L、(120.7±22.3)μmol/L和(73.6±19.3)μmol/L；SOD为(120.6±20.1)U/ml、(54.1±15.3)U/ml和(85.7±17.1)U/ml；胰腺病理评分为0.333±0.408、4.417±0.665和3.500±0.707。ANP组血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平及胰腺病理评分均较假手术组明显升高(P<0.05)，而SOD活性明显降低(P<0.05)。异丙酚组血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平及胰腺病理评分均较ANP组明显降低(P<0.05)，而SOD活性明显升高(P<0.05)。结论异丙酚可降低ANP大鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平，减轻胰腺组织的损害，对ANP具有一定的治疗作用。

胰腺炎，急性坏死性； 异丙酚； 模型，动物

大多学者认为,在重症急性胰腺炎(SAP)的发病过程中，炎症介质、氧自由基的大量释放起着重要的作用。因此，如何阻止炎症介质、氧自由基的大量释放成为阻止胰腺炎症及坏死发展的重要手段。异丙酚(propofol)是一种常用的静脉麻醉药，具有作用迅速、消除半衰期短等优点，已广泛应用于麻醉诱导、维持及重症监护患者的镇静。近来研究发现，异丙酚还具有较强的抗炎、抗氧化作用[1-2]。本研究旨在探讨异丙酚对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠的干预作用。

材料和方法

一、实验动物及分组

健康成年雄性SD大鼠54只，体重为(300±30)g，清洁级，由南京安立默公司提供。按随机表法分为假手术组、ANP组和异丙酚组。每组再分为术后3、6、12 h 3个时间点，每个时间点6只大鼠。

参照Aho等[3]和王勇等[4]方法，以微量输液泵持续向胆胰管逆行输注4%牛磺脱氧胆酸钠溶液1 ml/kg体重(0.1 ml/min)制备ANP模型。制模前，以4.5号头皮针经大鼠阴茎背静脉建立静脉通道。ANP组在制模后立即以微量注射泵持续静脉输注生理盐水12 ml·kg-1·h-1。异丙酚组在制模后立即持续输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1(用生理盐水稀释为总容量12 ml·kg-1·h-1)。假手术组进腹后仅翻动胰腺数次，随即关腹，静脉输注等容量生理盐水。

术后3、6、12 h处死大鼠，经下腔静脉取血，分离血清，-20℃ 保存。取部分胰腺组织置10%中性福尔马林溶液固定，常规病理检查。

二、观察指标和检测方法

1．血清淀粉酶、脂肪酶检测：采用全自动生化分析仪检测(日立7170 全自动生化分析仪，日本)，按试剂盒说明书操作。

2．血清TNF-α、IL-6含量检测：应用中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供的TNF-α、IL-6试剂盒，按说明书操作，应用中科大公司生产的GC-911γ免疫计数仪检测。

3．血清NO、SOD水平检测：应用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒检测，严格按照说明书操作。NO含量测定采用硝酸还原酶法，以NO2-/NO3-的比值反映NO水平；SOD活性采用比色法测定。

4．病理学检查：胰腺组织切片由我院病理科医师在光镜下观察，并按Schmidt标准[5]进行双盲评分。

三、统计学处理

结 果

一、各组血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、NO水平及SOD活性的变化

与假手术同时间点组相比，ANP组血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平均明显升高(P<0.05)，而SOD活性明显降低(P<0.05)。异丙酚组血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、TNF-α、NO水平较ANP同时间点组明显降低(P<0.05)，SOD活性明显升高(P<0.05);与假手术组比较，除3 h组的NO含量及SOD活性外，其他各组仍有明显差异(P<0.05，表1)。

表1 各组血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、NO水平及SOD活性的比较

注：与假手术组同时间点比较,aP<0.05；与ANP组同时间点比较,bP<0.05

二、大鼠胰腺组织病理改变

假手术组胰腺无明显改变。ANP组大鼠胰腺肉眼可见明显充血水肿、出血，胰腺周围散在淡黄色皂化斑；光镜下见间质充血水肿，胰腺组织出血、坏死，大量炎性细胞浸润，胰腺腺泡结构消失，腺泡出现空泡化。异丙酚组胰腺的病理改变较ANP组减轻。假手术组、ANP组和异丙酚组3 h点的病理评分分别为0.417±0.376、3.417±0.585和2.417±0.736；6 h点分别为0.333±0.408、4.417±0.665和3.500±0.707；12 h点为0.250±0.418、6.333±0.606和5.750±0.758。ANP组和异丙酚组的胰腺病理评分均明显高于假手术组(P<0.05)；异丙酚组3、6 h点的胰腺病理评分又明显低于ANP组(P<0.05)，但12 h点的差异无统计学意义。

讨 论

本实验采用经胰胆管内逆行注射4%牛磺脱氧胆酸钠建立ANP模型。制模后3 h血淀粉酶、脂肪酶明显升高，胰腺出血、坏死、炎性细胞浸润、腺泡空泡化，表明模型制备成功。

在胰腺炎的发生、发展中，大量炎性介质及氧自由基的生成，促炎与抗炎因子的失衡已被认为是其主要机制之一。在SAP时，胞内诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)的转录和翻译水平增加，iNOS大量产生并激活，致使NO生成增多，诱导胰腺损伤[6]。超氧化物岐化酶(SOD)可以特异性地催化氧自由基发生岐化反应，对机体起保护作用，其活性的高低间接反映机体清除氧自由基的能力。本实验结果显示，ANP组血清NO水平在制模后持续升高，SOD活性持续下降，表明机体清除氧自由基的能力下降。与ANP组相比，异丙酚干预后，血清NO、淀粉酶、脂肪酶水平均明显降低(P<0.05)，SOD活性明显增加(P<0.05)，胰腺组织病理评分也降低，但仍高于假手术组，表明异丙酚干预ANP有一定的治疗作用，与杨引等[7]的报道一致。这可能与异丙酚具有自由基清除剂类似的酚羟基结构有关。

文献报道[8-9]，急性胰腺炎症状出现后IL-6水平>140 U/L时提示为SAP。TNF-α也是SAP时最早升高的炎症介质之一，是刺激其他细胞因子释放的重要启动因子。本实验结果显示，ANP制模后，血TNF-α、IL-6水平较假手术组明显升高。应用异丙酚干预后血TNF-α、IL-6水平较ANP组均明显下降(P<0.05)。表明异丙酚具有抑制炎性介质的生成或释放、减轻炎症反应的功效，与国内外相关报道一致[1，10-11]。

总之，异丙酚具有抗氧化、抗炎、抑制炎性介质生成的作用，对SAP有着积极的干预作用，但单一应用异丙酚尚不能有效地控制胰腺炎的病变。因此，临床上还需要探索更多或更有效的治疗方法。

[1] Taniguchi T,Kanakura H,Takemoto Y,et al.Effects of ketamine and propofol on the ratio of interleukin-6 to interleukin-10 during endotoxemia in rats.Tohoku J Exp Med,2003,200:85-92.

[2] 金玄玉,赵芸慧,刘海梅，等.异丙酚对内毒素血症NO、SOD及MDA水平的影响.中国麻醉学杂志,2004,24:33-35.

[3] Aho HJ,Koskensalo SM,Nevalainen TJ.Experimental pancreastitis in the rat.Sodium taurcholate-induced acute haemorrhagic pancreatitis.Scand J Gastroenterol,1980,15:411-416.

[4] 王勇，刘志苏，江平，等．两种逆行胆胰管穿刺方法复制胰腺炎模型比较．医学新知杂志，2002，12：82-83.

[5] Schmidt J,Rattner DW,Lewandrowski K,et al.A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.Ann Surg,1992,215:44-56.

[6] Ozturk F,Gul M,Esrefoglu M,et al.The contradictory effects of nitric oxide in caerulein-induced acute pancreatitis in rats.Free Radic Res,2008,42:289-296.

[7] 杨引,刘欣,彭雪,等.异丙酚对急性坏死性胰腺炎肺损伤保护作用的研究.中国医师杂志,2005,7:1199-1200.

[8] Sathyanarayan G,Garg PK,Prasad H,et al.Elevated level of interleukin-6 predicts organ failure and severe disease in patients with acute pancreatitis．J Gastroenterol Hepatol，2007,22:550-554.

[9] Jiang CF,Shiau YC,Ng KW,et al. Serum interleukin-6, tumor necrosis factor alpha and C-reactive protein in early prediction of severity of acute pancreatitis.J Chin Med Assoc,2004,67:442-446.

[10] 金玄玉,戚其学,王昆鹏.异丙酚对内毒素血症大鼠肺中TNF-α作用影响的研究.中国血液流变学杂志,2004,14:169-172.

[11] 张倩，金玄玉，何晓帆.异丙酚对内毒素血症大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-10的影响.实验动物与比较医学,2006,26:98-100.

2009-05-25)

(本文编辑：屠振兴)

Effectsofpropofolonsevereacutepancreatitisinrats

WUJing-yi,ZHANGYi-sheng,JINXiao-ju,ZHAOGuo-hai.

DepartmentofICU,YijishanHospital,WannanMedicalCollege,Wuhu241001,China

ZHAOGuo-hai,Email:yjsyy228@126.com

ObjectiveTo investigate the therapeutic effects and mechanisms of propofol on acute necrotizing pancreatitis(SAP) in rats.Methods54 male Sprague-Dawley rats were randomized into three groups with 18 rats in each group: sham-operation group, ANP group, propofol-treated group. After ANP models were induced, propofol(10 mg·kg-1·h-1) were injected by dorsal vein of penis in the propofol-treated group. The rats in all groups were sacrificed at 3, 6, 12 hours after induction of the model. The serum amylase, lipase, nitric oxide (NO), TNF-α, superoxide dismutase (SOD), IL-6 were detected; the histopathological score of pancreatic tissue were evaluated.ResultsAt 6 h, the levels of serum amylase in sham-operation group, ANP group, propofol-treated group were (1743±370)U/L, (7745±1030)U/L and (5529±874)U/L; the levels of serum lipase were (274.9±36.1)U/L, (1672±262)U/L and (1219±207)U/L; the levels of serum TNF-α were (1.110±0.276)mg/L, (3.191±0.279)mg/L and (2.361±0.281)mg/L; the levels of serum IL-6 were (102.6±28.5)ng/L, (334.1±34.0)ng/L and (268.6±29.8)ng/L; the levels of serum NO were (42.2±18.1)μmol/L, (120.7±22.3)μmol/L and (73.6±19.3)μmol/L; the levels of serum SOD were (120.6±20.1)U/ml, (54.1±15.3)U/ml and (85.7±17.1)U/ml; the histopathological scores were 0.333±0.408, 4.417±0.665 and 3.500±0.707. The serum levels of amylase, lipase, NO, TNF-α, IL-6 and the histopathological score of pancreas in ANP group were significantly higher than those in sham-operation group group (P<0.05), while the serum levels of SOD were significantly lower (P<0.05). The serum levels of amylase, lipase, NO, TNF-α, IL-6 and the histopathological score of pancreas in propofol-treated group were significantly lower than those in the ANP group (P<0.05), while the serum levels of SOD were significantly higher (P<0.05).ConclusionsPropofol could decrease the levels of serum amylase and lipase, reduce pancreatic tissue damage, and had therapeutic effects on ANP in rats.

Pancreatitis,acute necrotizing； Propofol； Models,animal

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.01.014

241000 芜湖，安徽省皖南医学院附属弋矶山医院ICU

赵国海，Email:yjsyy228@126.com