广西马流感的诊断

蒙振亩,张民秀,侯韶毅,覃 勇,卢桂娟,兰家暖,廖承球,黄伟坚

(1.广西百色市动物疾病预防控制中心,广西百色533000;2.广西大学动物科学技术学院,广西南宁530004;3.广西丽原生物股份有限公司,广西南宁530001)

马流感(EI)是由马流感病毒(EIV)引起马属动物的一种高度接触性传染病,临床特征主要为发烧、咳嗽、流鼻液、母马流产等,本病传播迅速,发病率极高,常达100%。患病动物呈现运动失调,精神沉郁而不愿活动,丧失劳动力,并常继发其他细菌性疾病导致死亡,对养马业和赛马业造成巨大影响。2007年起我国的甘肃,新疆,内蒙古,青海以及东北的主要养马地区均有马流感发生的报道[1],2009年11月底,广西百色市的多个马群中发生了疑似马流感的病例,我们对疑似病马采集鼻拭子并进行了实验室诊断,确诊为由 H3N8马流感病毒引起的马流感。

1 发病情况和流行病学

百色市是广西的主要养马地区,全年存栏量23万匹左右。近年来,每年都有疑似马流感病例发生,但一直都未能对该病进行确诊。2009年11月22日开始,多个乡镇部分马匹出现咳嗽、流鼻涕、发热等症状,经调查本次共有5个县区15个乡镇32个行政村发生疑似马流感病例,发病马490匹,病死数为10匹。

2 临床症状

首先个别病马出现呼吸困难、咳嗽、流大量鼻涕、病马体温升高等症状,并迅速波及整屯所有马匹,马匹出现肌肉疼痛,不愿运动,丧失劳动能力。病马经过治疗可康复,病程4～7 d,病马死亡率低,死亡率为0.08%。

3 实验室诊断

3.1 病料检测 应用针对M基因设计的流感病毒通用检测引物[2]对15份鼻拭子样品进行检测,检测结果显示,有3个样品出现预计约244 bp的片段,判定这3个样品为阳性(如图1)。

3.2 病毒分离 对阳性样品按常规方法加入双抗处理样品后,过滤除菌后接种到MDCK细胞上,细胞在24 h后开始出现病变,细胞变圆肿胀,脱落,细胞核固缩或破裂,有部分细胞脱落(图2)。72 h收毒,经过RT-PCR检测,电泳后出现经凝胶成像系统显示出预计片段。

3.3 NA基因的扩增及初步比较 设计引物,对其中一份出现细胞病变的细胞毒样品提取 RNA后,经过RT-PCR扩增1 413 bp(NA基因)得到与预计的大小相一致。经克隆到p MD-18T载体后测序比对分析,NA基因的核苷酸序列与2007～2008年的新疆株、辽宁株马流感毒H3N8株的同源性为98%～99%,属于同一个亚系。

4 讨论

根据其发病较急,传播迅速,患病马匹出现呼吸困难,咳嗽,流大量鼻涕,病马体温升高等症状可初步判断为马流感。经实验室对鼻拭子进行流感病毒RT-PCR诊断,对阳性样品病毒分离在MDCK细胞上出现明显的细胞病变,并扩增出相应的NA基因,测序结果表明属于马流感病毒H3N8血清型。可确定本次广西百色市发生的马匹疾病是由马流感病毒引起的。

从对该毒株NA基因的比较分析结果表明,其与2007～2008年在我国西北和东北地区的马流感病毒毒株同源性极高,高达98%～99%,说明广西地区的马流感流行毒株与东北和西北地区的流行毒株属于同一个亚系,可能来源于同一毒株。但近年来百色无从这些地方引种的历史,因此流行同一个亚系的原因有待进一步研究。

广西百色市地处西南云贵高原,马成为必不可少的交通工具和劳动工具。百色地区的全年存栏量为20多万匹马。马流感是一种高传染病的呼吸道疾病,本病传播迅速,潜伏期短,往往呈现突然发病,患病马匹会出现发烧、干咳、流鼻涕和乏力等症状,并有2～3周无法行动。百色市近年来经常发生疑似马流感的流行,严重影响百色的养马业发展。此次马流感的确诊将对今后当地马流感的预防和控制提供帮助。

马流感的控制主要依赖疫苗接种,但是马流感病毒容易产生变异,出现抗原漂移和转变,给疫苗的研究和使用带来许多困难。国外多次出现免疫马群流行马流感的报道[3-5],因此要控制好马流感应加强对马流感病毒血清学、病原学和分子流行病学的监测工作。了解马流感病毒在当地的流行特点,采取针对性的措施才能有效控制马流感的流行。

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