禽白血病病毒自然感染及抗体变化动态规律

王彦军,孙 淼,王宏钧,侯忠勇,黄 翌,吴 艳,余 多,李金彩,杨飞跃,陈福勇,曹 红

(中国农业大学动物医学院,北京海淀100193)

1868年禽白血病被首次报道以来已有140多年,由于该病可造成较大的经济损失而日益为世人所重视[1]。近年来,中国大陆各品系鸡种的发展受到禽白血病的制约。我国政府有关部门正着手制定鸡白血病的检测技术、净化措施示范及相关标准。

本试验基于研究中国地方鸡种在自然条件下鸡白血病流行状况,通过了解禽白血病(AL)在该品种鸡体内的抗原、抗体消长规律以期为制定净化措施提供试验数据。本研究采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病毒的抗原及相应的抗体,并辅以病毒分离等方法进行复核[2]。

1 材料与方法

1.1 试验动物 地方原种鸡,共115只。

1.2 采样日龄 1、7、14、21、28、38、58、68、88 、98、108 、120 、130 、140 、150 、160 、170 、180 、190 、200 、210 、220、260、300 日龄 。

1.3 采集样本 泄殖腔拭子、血清、无菌抗凝血浆。

1.4 ALV p27抗原检测试剂盒 购自美国IDEXX公司。

1.5 ALV A、B亚型抗体检测试剂盒 购自美国IDEXX公司。

1.6 A LV J亚型抗体检测试剂盒 购自美国IDEXX公司。

1.7 抗原检测 采集的泄殖腔拭子,经-30℃冻融1次后,按照IDEXX公司A LV p27抗原检测试剂盒操作说明进行试验。

1.8 抗体检测 采集的血清,按照IDEXX公司ALV A、B亚型和J亚型抗体检测试剂盒操作说明进行试验。

1.9 病毒分离 采集的无菌抗凝血,分离血浆后按照常规方法,通过DF-1细胞培养进行病毒分离,用试剂盒鉴定。

2 结果

2.1 全群鸡只在试验阶段均未发现由于感染A LV而导致肿瘤死亡病例。至试验结束时,由于正常死淘等因素,共剩余 89只,其中公鸡 54只,母鸡35只。

2.2 全群鸡只在300日龄内的A LV p27抗原阳性率变化情况如图1所示。

图1 ALV p27抗原阳性率变化

由图1中可以看出,全群鸡在监测的300日龄内均有ALV感染发生。其中ALV p27抗原检出率在170日龄时达到最高峰,为32.18%;p27抗原检出率在7日龄时达到最低值,为2.11%。其他日龄呈现不规律的阳性率变化。

2.3 全群鸡只在300日龄内的ALV p27抗原阳性数随日龄增长情况如图2所示。

图2 新增p27抗原阳性个数趋势

由图2中可以看到,A LV p27抗原阳性鸡数随日龄的增长在不断增加。在98、140日龄和200日龄达到一个相对的平稳期。

2.4 全群鸡只在300日龄内的ALV A、B亚型抗体阳性率变化情况如图3所示。

图3 ALV A、B亚型抗体阳性率变化

由图3可以看到,全群鸡从1日龄到28日龄并未检测到ALV A、B亚型抗体,从38日龄到300日龄逐渐出现ALV A、B亚型抗体阳性鸡只,阳性率在10%以下。在260日龄时该阳性率达到最高峰,为30.86%。

2.5 ALV J亚型抗体阳性率变化情况,全群鸡只在监测的300日龄内各日龄段均未检测出A LV J亚型阳性鸡只。

2.6 260 日龄时对全群鸡只进行病毒分离结果,对全群鸡只无菌采集抗凝血,分离血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离。病毒分离率为29.49%(23/78),相比棉拭子p27检出率20%(16/80)要高。棉拭子p27检出阳性数和血浆病毒分离检出阳性数的符合率为79.49%(62/78)。

3 讨论

3.1 本试验主要通过酶联免疫吸附试验,并辅以病毒分离的方法,系统地对野外环境中的地方鸡种ALV的感染和抗体产生情况进行了调查研究。所得试验结果对于我们了解地方鸡种A LV的自然感染率提供了宝贵数据,同时也为净化方案的确定奠定了理论基础。

3.2 通过试验可以看出,地方鸡原种鸡在监测的300日龄内都有 ALV感染发生,但是并未检出ALV J亚型抗体,说明该鸡种没有感染 J亚型ALV。1日龄出现较高的阳性率,随后7日龄回落到很低的水平。通过对不同鸡种1日龄至50日龄的抗原监测看出,此现象是普遍存在的,可能是由于一些非特异性因素的影响造成假阳性结果,使得1日龄阳性率偏高。全群鸡只在监测过程中呈现不规律的排毒,在170日龄时其p27抗原检出率达到最高值,为32.18%。抗原阳性鸡只数随着日龄的增长不断增加,在98、140日龄和200日龄达到一个相对的平稳期。试验中公鸡的 p27抗原检出率(57.41%)略低于母鸡的p27抗原检出率(69.44%)。抗原的检出与抗体产生情况没有相关性。试验中我们还发现,对于某一感染鸡只,其排毒呈现明显的间歇性,而具体排毒时间点可能与感染日龄、感染方式、病原特性、宿主特性(包括种属、健康状态等)等因素有关。

3.3 目前,使用泄殖腔拭子来检测p27抗原是国内检测ALV感染的常用方法。但此方法存在一定的非特异性,并不能排除内源性病毒的干扰,而内源性病毒并不会对鸡的生产性能造成危害。因此,病毒分离仍然是判断鸡群是否感染ALV的标准。本试验中,在260日龄时对全群鸡进行病毒分离,结果病毒分离阳性率为29.49%。通过比较可以看到,其阳性率比棉拭子检出率要高,但两者符合率并不高,仅为79.49%。

3.4 最近,国内A LV感染频频发生,造成了严重的经济损失。采取必要的措施对该病进行控制与清除已经势在必行。由于该病的特殊性,必须采取净化的方法来根除本病。20世纪90年代初,国外已经开始进行鸡白血病的净化,并取得了成功。如果对全鸡群进行AL的净化,采用病毒分离的方法固然可靠,但成本较高,耗时费力,且需要具有一定试验操作技术的人员;若采取棉拭子检测方法,虽然简单快捷,但由于非特异性因素的影响会造成误判[2]。净化方法的选择,以及几种方法的联合运用,对于取得较好的净化效果具有重要的意义。

[1] Sai Y M.禽病学[M].苏敬良,高福,索勋,主译.11版.北京：中国农业出版社,2005.

[2] 张小桃,赖汉漳,曹伟胜.禽白血病病毒检测方法研究进展[J].养禽与禽病防治,2009(4)：4-6.

[3] 孙淼,李金彩,郭振华,等.J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[J].中国兽医杂志,2009,45(10)：46-48.