女性不孕与解脲脲原体和沙眼衣原体感染的相关性研究

程细祥

(上海仁爱医院检验科，上海 200235)

解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，Uu)和沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)是泌尿生殖道感染的重要致病因子，是妇科不孕症的常见病因，而其感染率有逐年上升的趋势[1]。生育期妇女通过性接触感染Ct和Uu，可引起阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、急慢性输卵管炎和盆腔炎等生殖道感染，常以无明显症状为特征，但最终可导致不孕症及异位妊娠[2]。由于无症状患者观察的困难性，以及检测方法的局限性，目前Uu、Ct对于女性不孕的致病性和致病机理仍有待深入研究。为了深入探讨Uu和Ct感染与女性不孕症的关系，本研究通过荧光定量PCR方法，检测女性不孕症患者宫颈分泌物中Uu-DNA与Ct-DNA的表达情况，以探讨Uu与Ct在女性不孕患者中的感染情况和致病机制。

1 资料与方法

1.1 研究对象 观察组选自2008年5月至2009年7月在我院妇科门诊就诊的121例女性不孕患者，年龄22～41岁,平均31.7岁。选择102例正常生育妇女作为对照组，均来自本院正常体检人群，年龄21～38岁平均29.6岁。两组年龄差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 标本采集方法 所有分泌物标本采样应在非月经期进行；采样前3d内不使用阴道内药物，不冲洗阴道；24h内不应有性行为。用棉球沾无菌生理盐水洗去宫颈外分泌物(去除白带)，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5s后旋动棉拭子采取宫颈分泌物，将带有标本的棉拭子置1.5ml无菌离心管 (加1ml无菌生理盐水)中漂洗，将盖子压紧用胶布密封管口以防标本外泄。处理标本时要做到无菌操作，立即送检。

1.3 检测方法 采用荧光定量PCR方法，每份标本均进行Uu-DNA和Ct-DNA核酸扩增荧光检测。Ct和Uu PCR引物及Ct和Uu核酸扩增荧光检测试剂盒，以及DNA纯化试剂盒，均由中山大学达安基因股份有限公司合成和生产。实验步骤严格按照厂家实际说明书执行，实验仪器为罗氏的licycle 480全自动实时荧光定量PCR仪。

1.4 检测结果的处理分析 全部数据均采用SPSS 13.0统计软件处理，率的检验使用卡方分析，P＜0.05提示差异有显著性。

2 结果

2.1 解脲脲原体DNA检测结果：观察组宫颈分泌物中检测出解脲脲原体DNA阳性率为44.6%(54/121)，定量值 1.9×103～2.7×106copies；对照组阳性率17.6%(18/102)，定量值 7.3×103～4.3×106copies，两组比较差异有非常显著性(P＜0.01，见表1)。

2.2 沙眼衣原体DNA检测结果 观察组宫颈分泌物中检测出沙眼衣原体DNA阳性率为27.3%(33/121)，定量值 3.9×103～1.7×107copies；对照组阳性率6.9%(7/102)，定量值 1.5×104～6.1×106copies，两组比较差异有非常显著性(P＜0.01，见表1)。

2.3 观察组宫颈分泌物中，解脲脲原体DNA和沙眼衣原体DNA均阳性者19例，对照组宫颈分泌物中，解脲脲原体DNA和沙眼衣原体DNA均阳性者1例，两组比较差异有非常显著性(P＜0.01，见表1)。

表1 女性不孕患者宫颈分泌物中Uu-DNA和Ct-DNA的表达情况例数(%)

3 讨论

支原体是能在细胞外独立生存的最小微生物，种类繁多，其中Uu是引起人类泌尿生殖系统感染的病原体之一，与性传播有关；Ct为专性上皮细胞内寄生的原核细胞型微生物，易侵犯泌尿及生殖道上皮，可引起女性尿道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎，并最终导致不孕症及异位妊娠。

国内外研究表明，Ct导致女性不孕的致病机制比较明确，一方面，Ct能产生内毒素，导致生殖腔道的炎症、黏连和阻塞，使黏膜细胞坏死，输卵管纤毛运动停滞，引起不孕[3]。另外，Ct感染可使宫颈黏液的葡萄糖含量降低，影响进入宫颈管中的精子的活力而致不孕[4]。

Uu导致女性不孕的致病机理目前仍不清楚，有研究认为，炎症所致的输卵管性不孕与生殖道(通常指宫颈)Uu感染有关[5]。然而也有人认为，不孕症患者宫颈、阴道Uu阳性率与输卵管损伤不相关[6]。因此，Uu的致病性及其致病机制有待深入研究。本研究通过荧光定量PCR方法，观察女性不孕症患者宫颈黏液Uu-DNA和Ct-DNA的表达情况。

研究结果发现，在我院就诊的女性不孕患者中，Uu-DNA和Ct-DNA的表达与对照组相比均有显著增加，提示Uu与Ct的感染与女性不孕密切相关，研究也发现，在正常对照组中，Uu也有相当高的感染率 (17.6%)，提示Uu可能是一种条件致病菌，与Uu相比，Ct在观察组和对照组中的感染率都较低，提示Ct与女性不孕症的相关性更高，应该是女性不孕症的重要致病因素，Uu与Ct的混合感染率也提示这两种介于细菌和病毒之间的微生物可能在致病方面有一定的协同作用。

在临床实践中，使用Uu-DNA检测阳性和Uu培养阳性作为抗生素用药指标的做法非常普遍，在Uu检测出现反复阳性时又往往误判为耐药，从而更换或联合使用另外的抗生素，最终导致抗生素的滥用，而抗生素大量使用造成的菌群失调会进一步加重炎症反应，造成恶性循环，给病人带来更多的痛苦和负担。本研究结果提示，在女性不孕的致病机理中，Ct-DNA检测可能更适合作为造成女性不孕症的病因诊断，而Uu-DNA检测则更适合作为炎症病因判断和混合感染导致女性不孕的辅助性病因诊断指标。

[1]黄美琼,李北坤,陆翠群.女性不孕患者解脲支原体感染检测及耐药性分析[J].检验医学与临床,2009,6(10):773-774.

[2]Pimenta JM,Catchpole M,Rogers PA.Opportanistic screening for genital chlamydial infection.Ⅱ:prevalence among healthcare attendersoutcome and evaluation of positive cases[J].Sex Transm Infect,2003,79(1):22-27.

[3]郝翠芳,曹积功,杨秋花,等.不孕妇女宫颈沙眼衣原体感染的临床观察[J].实用妇产科杂志,2002,18(3):183-184.

[4]赵晓岚,楚雍烈,叶国玲,等.反复流产和不孕症与支原体和免疫因素的关系[J].第四军医大学学报,2003,24(20):1884-1886.

[5]周红霞.204对不孕夫妇支原体感染临床分析[J].中国妇幼保健,2006,21(15):2110-2111.

[6]彭慧兰,曹来英,魏敏.孕妇与不孕症妇女解脲支原体、沙眼衣原体感染的研究[J].第四军医大学学报,2005,26(1):64-66.