改良布氏肉汤用于解脲脲原体的保种研究

刘光金，李乐平，张日妹

(深圳市龙岗区平湖人民医院检验科，广东 深圳 518111)

改良布氏肉汤用于解脲脲原体的保种研究

刘光金，李乐平，张日妹

(深圳市龙岗区平湖人民医院检验科，广东 深圳 518111)

解脲脲原体；保存；布氏肉汤；改良

解脲脲原体(mycoplasma urealytium)是临床上引起非淋菌性尿道炎最为常见的病原体之一，能引起男性和女性泌尿生殖道的急性和慢性感染，是导致男性不育和女性继发不孕的重要原因[1]，因此对于解脲脲原体各方面生物学特性的研究逐渐成为研究解脲脲原体的重点。在研究解脲脲原体各生物学特性的过程中，必然涉及到临床分离菌株的保存和传代问题，吴汉勇等[2]曾利用甘油培养液短期保存溶脲脲原体，为了探讨能更长时间保存解脲脲原体的方法，笔者采用改良布氏肉汤保存解脲脲原体，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 病例为深圳市龙岗区平湖人民医院性病科、泌尿科及妇科就诊的患者，病史中否认近1周内使用过抗生素，具有非淋菌性尿道炎的症状和体征。其中男性患者主诉尿痛、尿频、尿急伴尿道灼热感，体征有尿道口有糊状分泌物。女性患者主诉阴道分泌物增多并有异味，体征检查宫颈有脓性分泌物，伴宫颈充血。用无菌棉拭子取材，其中男性患者取尿道分泌物或前列腺液，拭子插入尿道1～2cm，停约5～10s。女性患者取宫颈分泌物以及宫颈拭子，首先用一根拭子拭去宫颈口的黏液，再用另外一根拭子取材，插入宫颈约2～3cm，停约5～10s。标本采集后立即接种到 珠海市银科生物技术应用研究所生产的支原体药敏试剂瓶中。置37℃温箱，5%～10%CO2培养24～48h。共收集临床分离株96株。

1.2 保存液成分 采用改良的布氏肉汤培养基保存临床分离株。参考张卓然等[3]的布氏肉汤配方配制，改良的布氏肉汤培养基的配方：胰胨10g，眎胨10g，NaCl 5g，重亚硫酸钠0.1g，葡萄糖 10g，酵母浸膏 2g，加入 0.4%的酚红 10ml，并用3%的盐酸调pH值至6.0，分装至每瓶70ml，15磅高压蒸汽灭菌15～20min，冷却后每瓶加入20%的无菌小牛血清20ml，25%的鲜酵母浸液 10ml，2%盐酸半胱氨酸 100μl，2%尿素4ml，20 万 U/ml的青霉素 0.5ml，5g/L 多粘菌素 B0.1ml， 校正pH至6.0。将分装好的培养基冻入-20℃冰箱。临用前分装至无菌试管中，1.5～2ml/管至4℃冰箱备用。

1.3 培养与保存方法

临床标本培养24h后或48h后，若发现培养基颜色转红，并且培养管澄清，立即进行移种，用移液枪吸取50μl加入到配制好的改良布氏肉汤培养管中，每株临床分离株移种16 管，置 37℃温箱、5～10%CO2培养 24～48h。 24h 后，若培养基颜色微转红，培养管澄清，立即取出并立即冻入-20℃冰箱(8支/株)和-70℃冰箱(8支/株)。定期复苏，观察成活情况。

2 结果

临床分离株在不同温度相同保存时间后成活情况，在-20℃冰箱保存时，32周和 48周存活率分别为 90.69%和86.5%，但72周存活率仅有54.2%。在-70℃冰箱保存时，32周和48周周存活率都为100%，而且72周存活率达96.9%，并且96周的存活率也达94.8%，而-20℃冰箱保存时只有13.5%。

3 讨论

由于目前临床上由解脲脲原体引起的非淋菌性尿道炎的发病率日趋上升，在欧美国家已经居性传播疾病之首。而在对患者治疗的过程中，抗生素的耐药现象也逐渐出现并呈增加趋势，并且发现临床分离解脲脲原体菌株的一些生物学性状也发生改变。因此加强对临床分离株各种生物学性状的研究，有助于临床诊断和治疗措施的选择。而在研究的过程中，如何对分离的临床株进行保存又显得尤为重要。本研究采用改良的布氏肉汤培养基保存临床分离株，从结果可以看出其-20℃冰箱保存时间可达48周，而-70℃冰箱的保存时间96周左右，保存效果良好，明显优于吴汉勇等[2]利用甘油培养液保存溶脲脲原体的方法。并且发现在相同的保存培养基条件下-70℃低温保存效果明显较-20℃保存好(P＜0.05)。而且培养基中采用青霉素和多粘菌素替代了毒性强烈的醋酸铊，易在普通实验室使用。在采用珠海市银科生物技术应用研究所生产的支原体药敏试剂对临床标本进行初次分离后再传代本培养基时，阳性率达100%。因此，改良的布氏肉汤培养基是实验室保存临床分离解脲脲原体株的一种可行方法。

[1]杨麦贵,张竹映,郑善銮,等.精液中溶脲脲原体与不育症相关[J].第四军医大学学报,2000,12:21.

[2]吴汉勇,吴发龙.解脲支原体保存方法探讨[J].福建医药杂志,1997,19:6.

[3]张卓然.医学微生物实验学[J].第2版,北京:科学出版社,2005:215-216.

R375+.1,R446.5,R518.9

B

1674-1129(2010)06-0649-01

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.06.065