高效液相色谱法测定眩痛定胶囊中延胡索乙素含量

曹 健，王 芳，陈 琳，张恩娟

(第三军医大学新桥医院药学部，重庆 400037)

眩痛定胶囊是我院研制的非标制剂，由天麻、元胡、白芷等中药组成，具有镇痉息风、通络止痛的功效，多年临床应用于眩晕、头痛等各种原因引起的周围神经痛、关节肌肉痛等，有较好疗效。延胡索乙素为元胡的主要有效成分之一，故选择延胡索乙素作为控制本品质量的指标成分。据文献报道，延胡索乙素的含量测定可采用高效液相色谱法[1]、薄层扫描法[2]等，由于眩痛定胶囊组成成分复杂，干扰因素较多，预试高效液相色谱法效果较好，故选用该法测定眩痛定胶囊中延胡索乙素含量。

1 仪器与试药

Waters 600型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；紫外检测器；ME235s型电子天平（德国 Sartorius）；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)；CSF-1A型超声波发生器(上海超声波仪器厂)；CS202A型电热保温干燥箱(重庆实验设备厂)；80-2型离心沉淀器(上海手术器械厂)。延胡索乙素对照品（批号为110726-200409，中国药品生物制品检定所)；眩痛定胶囊（0.45 g/粒，本院自制，批号分别为 070813，080602，080729）；阴性对照胶囊(缺元胡，本院自制）。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS柱(150 mm×4.6 mm，5!m)；流动相：含0.2%三乙胺的水 -甲醇(52∶48)；流速：1.2 mL/min；检测波长：283 nm；柱温：25 ℃；进样量：20!L。

2.2 溶液制备

精密称取延胡索乙素对照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇振摇使溶解，定容至刻度，即得对照品溶液。精密称取胶囊内容物5 g，加20 mL甲醇，85℃超声提取1 h，取甲醇层离心，上清液置25 mL量瓶中，少量甲醇洗涤药渣，超声10 min，依法离心，取上清液，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45!m)滤过，即得供试品溶液。精密称取按处方工艺制备的缺元胡的阴性对照胶囊内容物5 g，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：精密量取对照品溶液2.0 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。将对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液分别进样20!L。高效液相色谱图如图1。可见，保留时间26.02 min处色谱峰为延胡索乙素的峰，阴性对照品溶液几乎无干扰。

标准曲线绘制：精密量取对照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取20!L注入高效液相色谱仪测定。以峰面积 A对质量浓度 C进行线性回归，得回归方程 A=16 576.5C-16 466.5（r=0.999 9）。结果表明，延胡索乙素质量浓度在8.0～40.0!g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密量取对照品溶液1.0 mL，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，连续进样20!L，测定5次，记录色谱图，测定延胡索乙素对照品峰面积。结果5次测得的平均峰面积为 116 543，RSD=1.17%（n=5），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批供试品5份，按供试品溶液制备方法制备，进样20!L，测定延胡索乙素峰面积。结果5次测得的平均峰面积为178 789，RSD=1.75%（n=5），表明方法重现性良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液20!L，于0，5，24 h进样，记录每次进样的峰面积。结果延胡索乙素平均峰面积分别为177 512，177 341，178 624，RSD=0.29% ，表明供试品溶液在 24 h内基本稳定。

图1 高效液相色谱图

加样回收试验：分别精密称取眩痛定胶囊内容物5 g，精密加入对照品稀释液0.5，1.0，1.5 mL各3份，按供试品溶液制备方法提取并稀释，进样20!L，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=5）

2.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法制备样品溶液。分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各20!L进样，测定峰面积，计算延胡索乙素的含量。结果批号为070813，080602，080729的样品中，延胡索乙素平均含量分别为 0.020 51，0.026 79，0.021 52 mg/粒，RSD 分别为 0.76%，0.68%，1.04%（n=5）。

3 讨论

将延胡索乙素的甲醇溶液置紫外-可见分光光度计扫描，结果延胡索乙素在283 nm处有最大吸收峰，经试验证实，检测波长为283 nm时杂质干扰较少，故本试验采用283 nm作为眩痛定胶囊中延胡索乙素含量测定的检测波长。

制剂中延胡索乙素可以通过甲醇回流和甲醇超声的方法来提取。曾对所考察的几个批号的胶囊做了两种提取方法的对比试验，取相同量的胶囊内容物分别同时进行甲醇回流和甲醇超声（250 mA），时间均为1 h，此后的操作方法相同。结果采用甲醇回流提取的延胡索乙素含量仅为甲醇超声提取的70%～90%，有文献报道延胡索乙素受温度影响可能分解[3]，故采用甲醇超声的方法提取眩痛定胶囊中的延胡索乙素。试验证明，按药典方法，即甲醇超声提取后挥干甲醇，加氨水溶液溶解残渣，加乙醚萃取有机层，挥干乙醚后加甲醇溶解，干扰物质排除很多，但延胡索乙素回收率也大大降低，故将超声提取的甲醇高速离心后过0.45!m滤膜直接进样。

《中国药典》规定，元胡中的延胡索乙素含量按干燥品计应大于0.05%[4]，根据处方用量和工艺提取情况，将眩痛定胶囊中延胡索乙素的最低检出限度定为0.02 mg/粒。

[1]朱才庆，吴 迪，李 艳，等.高效液相色谱法测定复方元胡止痛胶囊中延胡索乙素的含量[J]. 时珍国医国药，2008，7（19）：1 727-1 729.

[2]俞 滢，徐红辉.强痛宁中延胡索乙素的质量标准研究[J].中国现代应用药学，1998，3：51-53.

[3]董 莹，魏献春.薄层扫描法测定胃得康片中延胡索乙素的含量[J].中国中药杂志，2004，10：84-85.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:化学工业出版社，2005：171.