HPLC测定克艾特胶囊中绿原酸的含量

饶伟源，李茂

（广西中医药研究院，广西 南宁 530022）

HPLC测定克艾特胶囊中绿原酸的含量

饶伟源*，李茂

（广西中医药研究院，广西 南宁 530022）

目的：建立克艾特胶囊的含量测定方法。方法：采用HPLC，色谱柱：kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈－0.4%磷酸溶液（10∶90）为流动相；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：327 nm；柱温：室温。结果：当进样量在0.026 8～1.068 0μg时，线性关系良好，r＝0.999 7，平均回收率为99.18%，RSD＝0.97%，结论：本法操作简便，重复性好，可用于本品的质量控制。

克艾特胶囊；薄层色谱法；高效液相法；绿原酸

克艾特胶囊是广东湛江贤博科技有限公司委托我院研究开发的治疗艾滋病的新药，目前已进入Ⅲ期临床试验。克艾特胶囊主要由金银花、海藻、半边莲等14味中药经提取加工制成，具有益气养阴，解毒散瘀，生津安神的功能。用于艾滋病毒感染及艾滋病感染的并发症等。为了更好控制该制剂的质量，本实验采用高效液相色谱法对金银花中的绿原酸进行含量测定［1］，结果表明本法操作简便，可作为本品的质量控制。

1 仪器、试剂与样品

1.1 仪器

日本岛津公司LC-10AT高效液相色谱议；SPD-10A紫外检测器；威玛通用多媒体色谱数据工作站。

1.2 试药

绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号10753－200212，供含量测定用）。乙腈为色谱纯，水为高纯水，磷酸为分析纯。克艾特胶囊（本院制剂室提供，批号090601，090602，090603）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相；乙腈－0.4%磷酸溶液（10∶90）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：327 nm；柱温：室温；进样量：20μL。理论塔板数以绿原酸计算，应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇溶液制成每1 mL含5.5μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

2.3 供试品溶液的制备

取本品10 g，研细，混匀，取约1.5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定重量，浸渍30 min，超声处理15 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性干扰试验

取缺金银花药材的阴性样品，按上述“2.3”项下的供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，按上述色谱条件测定。结果阴性对照在绿原酸出峰位置无吸收峰，表明处方中其他成分对测定无干扰，见图1。

2.5 线性关系考察

精密称取绿原酸对照品13.35 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取上述对照品贮备液0.25，0.5，1，3，5，10 mL，分别置25mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，按上述色谱条件测定。以绿原酸对照品进样量（μg）为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程为Y＝2 746 699X＋20 126，r＝0.999 7。结果表明当进样量在0.026 8～1.068 0μg时，绿原酸进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

对同一批（090601批）供试品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次，计算RSD＝0.54%（n＝6）。结果表明本法的精密度良好。

图1 对照品及克艾特胶囊的HPLC图

2.7 重复性试验

对同一批样品（090601批）平行测定6份，绿原酸含量的平均值0.141 mg·g－1，RSD＝0.86%（n＝6），结果表明本法的重复性良好。

2.8 稳定性试验

对同一份（090601批）供试品溶液，每隔4 h测定1次，共测定7次，结果7次测定绿原酸含量的平均值为0.140 mg·g－1，RSD＝0.80%（n＝7），结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9 加样回收率测定

精密量取线性关系考察项下的对照品储备溶液8 mL，置500 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（浓度为2.136μg·mL－1）。精密称取重复性试验项下克艾特胶囊（绿原酸含量为0.141 mg·g－1）约0.75 g，平行取6份样，分别精密加入上述绿原酸对照品溶液50 mL，按上述拟订的方法提取、测定，计算回收率，结果见表1。

2.10 样品测定

按拟订的含量测定方法，测定了本品090601，090602，090603 3批样品中绿原酸含量，结果分别为68，56，63μg／粒。

3 讨论

绿原酸在溶液中不稳定，受热及见光易分解，故不宜采用加热回流进行提取，加入溶剂后，浸渍30 min，然后超声处理15 min提取效果显著更好。故供试品溶液的制备，采用先浸渍30 min，然后超声处理。本实验参照《中国药典》2005年版一部“金银花”项下【含量测定】项所使用的流动相进行试验，经调整最后采用乙腈－0.4%磷酸溶液（10∶90）为流动相进行分析，结果绿原酸与相邻峰可达到基线分离，所以确定采用乙腈－0.4%磷酸溶液（10∶90）为流动相。本法操作简便，重复性好，可作为本品中绿原酸的质量控制方法。

表1 绿原酸加样回收率

［1］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：152-153.

Determination of Chlorogenic Acid in Ke′ai Te Capsules by HPLC

Rao Weiyuan，Li Mao
（Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning Guangxi530022，China）

Objective：To establish a method for determination chlorogenic acid in Ke′ai Te Capsules.Methods：The method of HPLC was used，chromatographic column：kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5μm），the mobile phase consisted of acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution（10∶90），the flow rate was1.0mL·min－1，the detection wavelength was 327 nm；the column temperature was room temperature.Results：The linear range of chlorogenic acid was 0.026 8～1.068 0μg，r＝0.999 7，and the average recovery was 99.18%，RSD＝0.97%.Conclusion：The method is accurate，repeatable and simple，it can be used for quality control of Ke′ai Te Capsules.

Ke′ai Te Capsules；TLC；HPLC；Chlorogenic acid

*饶伟源，Tel：（0771）5868874，E-mail：nn＿rwy163.com.cn＠163.com

2010-03-19）