细菌生长与接种条件

包春惠

(宣威市环保局,云南宣威 655400)

细菌生长与接种条件

包春惠

(宣威市环保局,云南宣威 655400)

通过对无菌室开紫外灯灭菌时间的长短进行空白营养琼脂培养基培养后细菌有无情况的比较分析,得出无菌室用紫外灯灭菌的最佳时间是 30min;并通过接种时控制培养基温度为 40～45℃,了解菌落分布均匀,生长良好的前提。

细菌生长;接种条件;实验

细菌广泛分布于我们的生活环境中,是空气和水中的微生物指标之一。空气中的细菌总数是指1m3空气中各种细菌的总数目。水中的细菌总数是指 1ml水样在普通琼脂培养基中,于 37℃经 24h培养后所生长的细菌菌落总数。一般认为每 1ml水中细菌总数小于 100个为极清洁的水,100～1000个为清洁水,1000～10000个为不太清洁水,10000个以上即为不清洁水。人们饮用了不清洁的水可产生各种疾病,如:细菌性痢疾、霍乱沙门氏菌病等。

1 材料与方法

1.1 实验器材

培养皿 (直径 90～100mm),500ml大烧杯,100℃温度计,500ml三角瓶,高压蒸汽灭菌锅,恒温生化培养箱,放大镜。

1.2 培养基的配方

蛋白胨 10g、牛肉浸膏 3g、氯化钠 5g、琼脂20g、蒸馏水 1000ml。

2 总结与讨论

2.1 实验过程

培养基在配制时各种配方称好后混于水中,经过加热熔化,熔化过程中要不断搅拌使各成分均匀混于水中,并在加热同时不断补充失去的水分,以补足至原来的体积。否则培养基各成份混合不均匀,水分不足,培养基营养不全,不利于细菌生长。配制好的培养基若有沉渣或混浊,趁热用三至四层纱布过滤,滤液最好用 pH计调节pH值为 7.2～7.4,过酸或过碱都不利于细菌生长,并在 2h内灭菌。灭菌的高压锅最好是单独使用放于无菌室中,灭菌好的培养基可于高压锅中存放 1～2h;待无菌室灭菌后,再打开高压锅取出备用,以达到备用培养基绝对无菌。

2.2 无菌室的灭菌

一般要求只要打开无菌室的紫外灯 20min后,无菌室就可以达到无菌,但经过实验验证无法达到要求,细菌空白对照实验如表 1所示。

表 1 空白对照实验

从 4组细菌空白实验可以看出无菌室达到真正无菌只要打开无菌室紫外灯 30min后,再打开无菌操作台的风机预热 20min后进行水样细菌接种实验,这样就可得到相对准确的细菌总数分析结果。这一结果是紫外灯更换 90d左右所得。但紫外灯使用 1a以上,接近 1.5a,开紫外灯 30min后,再预热无菌操作台 20min后进行空白实验,不能达到无菌室真正无菌的要求,建议紫外灯 1a更换 1次。

2.3 培养基的温度

水样接种时,培养基的温度非常关键,温度高了容易把水样中的细菌烫死,温度低了一方面琼脂培养基容易凝固 (尤其在冬季),另一方面水样与培养基混合不均匀,培养出的菌落分不开,成团生长,不易计数。培养基的温度在 40～45℃左右最佳,接种时最好用温度计控制温度,建议在无菌室放一个电炉,温度达不到时,以便加热使温度保持在一定范围内,也可用热水浴保持培养基的温度。

3 结论

试验表明,要准确掌握水样中的细菌总数,关键是细菌的培养。细菌培养的前提不仅有配制良好且无菌培养基,真正无菌的接种室,而且要有接种时培养基适宜的温度。

[1]吴邦灿.环境监测技木 [M].北京:环境科学出版社,1995.

[2]刘培哲.环境水质监测质量保证手册 [M].北京:化学工业出版社,1984.

[3]蔡宏道.环境医学 [M].北京:环境科学出版社,1990.

Bacteria Growth and Vaccination Condition

BAO Chun-hui

(Xuanwei Environmental Protection Bureau,Xuanwei Yunnan 655400 China)

The optimal time of sterilization is 30 minutes in sterile room with ultraviolet lamp by comparing between the time of sterilization in sterile room and the sum bacteria by blank cultivating nutrient agar.The condition with better bacteria growth is tested when controlling the vaccination temperature as 40 to 45℃.

bacteria growth;vaccination condition;test

X83

A

1673-9655(2010)增 1-0088-02

2009-06-05