液相分析仪荧光检测器标准物质的研制

赵鹏，吴建刚，李咏雪，沈娟，马飞，武文君

总后卫生部药品仪器检验所，北京100071

液相分析仪荧光检测器标准物质的研制

赵鹏，吴建刚，李咏雪，沈娟，马飞，武文君

总后卫生部药品仪器检验所，北京100071

按照国家检定规程的要求，研制了液相分析仪荧光检测器检定用标准物质。本文简要介绍了标准物质的配制方法；重点介绍了标准物质的均匀性检验、稳定性检验过程，详细分析了标准物质不确定度的评定。

液相分析仪；荧光检测器； 标准物质； 均匀性； 稳定性

研究背景：本研究受总后卫生部药品仪器检验所苗圃基金资助，主要研究荧光检测器检定用标准物质的研制。

应用要点：本标准物质主要用于高效液相分析仪荧光检测器的质量控制。

同行评议：分析仪器的质量控制一直是实验室管理的重点和难点，该标准物质（已获批为国家二级标准物质，编号为GBW(E)130292～ 130294）的研制，有效地解决了军队实验室高效液相分析仪荧光检测器的质量控制问题，提高了军用实验室管理水平以及军队各级医院分析仪器的质量控制工作。

0 前言

高效液相分析仪是药品检验和分析领域一种非常重要的仪器，其性能指标准确与否直接影响分析结果，目前液相分析仪常用的检测器有荧光检测器、紫外-可见检测器、二极管阵列检测器、示差折光检测器等。JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程规定了液相分析仪各种检测器检定用标准物质和检定方法，其中检定荧光检测器时需要使用1.00×10-4g/mL、1.00×10-6g/mL、1×10-9g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质。本文主要介绍硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质的研制过程，该标准物质已经获批为国家二级标准物质，编号为GBW（E）130292～130294 。

1 国内外同种标准物质主要特性的对照比较情况

通过向国家标物中心申请查新，经查询，中国计量科学研究院和上海市计量测试技术研究院有同类标准物质、有类似标准物质，主要特性对照比较如表1所示。

2 标准溶液的配制方法

2.1 试剂和设备

(1) 硫酸奎宁(2H2O)：批号：WS20080123，国药集团化学试剂有限公司；

(2) 高氯酸：分析纯，金鹿化工有限公司；甲醇：色谱纯，批号076535，Fisher公司；2010年第25卷 10期

VOL.25 No.10

表 1 国内同种物质主要特性对照表

(3) 纯净水；

(4) MES电子天平；

(5) 100mL、1000mL容量瓶；10mL分度吸量管；5mL刻度吸管；1000mL量筒。

2.2 配制步骤

精密称定硫酸奎宁（2H2O）0.10101g，用0.05mol/L高氯酸水溶液溶解并定容至1000mL，即得1.00×10-4g/mL（A）的硫酸奎宁/高氯酸水溶液;用分度吸量管取（A）液10mL，用0.05mol/L高氯酸水溶液定容至1000mL，即得1.00×10-6g/mL（B）的硫酸奎宁/高氯酸水溶液；用分度吸量管取B液10mL，用0.05mol/L高氯酸水溶液定容至100mL，即得1.00×10-7g/mL（C）的硫酸奎宁/高氯酸水溶液;用分度吸量管取（C）液10mL，用0.05mol/L高氯酸水溶液定容至1000mL，即得1.00×10-9g/mL（D）的硫酸奎宁/高氯酸水溶液。

3 标准溶液的均匀性检验

3.1 均匀性检验方法

由于本标准物质为溶液，使用前摇匀可以排除瓶内不均匀性，这样就不必进行瓶内均匀性检验，只进行瓶间均匀性检验。按照ISO Guide 35的要求，用不均匀性的不确定度作为评价标准物质均匀性的指标，用方差分析法进行均匀性验证。具体方法如下：

m——测量的样品数；

N——测量的总体数据数；

n——测量次数。

若在重复性条件下测量的全部数据，统计检验结果不存在显著性差异，即统计量小于其临界值（F统＜F临），即可判断所测定的特性值在样品中的分布是均匀的。

3.2 均匀性检验过程

均匀性实验所用仪器为岛津公司的LC-20A型高效液相分析仪，荧光检测器型号RF-10AXL，编号C20954305031。

将配制好的标准溶液分装100瓶，每瓶20mL。分别从分装的初始、中间、结束阶段中抽取10个样品，对样品按分装顺序编号。测量各个样品的吸光度以检验样品的均匀性。每个样品重复测量2次，每次测量读取6个测量值，取其平均值作为测量结果。

首先采用容量法配制1×10-4g/mL、1×10-6g/mL和1×10-9g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液校准品，然后用配好的校准品对仪器整机性能进行检验，当整机性能合格后分别检测校准品和标准物质的峰面积，以标准物质和校准品的峰面积比值作为特性量值作为标准物质均匀性评价的指标。

3.3 均匀性检验结果

均匀性检验数据及结果如表2～4。

(1) 1×10-4g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质

F=0.94，F临（0.05，9，10）=3.02，F＜F临，因此该标准溶液是均匀的。

(2) 1×10-6g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质

F=0.54，F临（0.05，9，10）=3.02，F＜F临，因此该标准溶液是均匀的。

表 2 1×10-4g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质均匀性检验数据

表 3 1×10-6g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质均匀性检验数据

表 4 1×10-9g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质均匀性检验数据

(3) 1×10-9g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质

F=0.06，F临（0.05，9，10）=3.02，F＜F临，因此该标准溶液是均匀的。

4 标准溶液的稳定性检验

4.1 稳定性检验的方法

稳定性检验按照先密后疏的原则进行，在有效期的前3个月每两周测量1次，在第4个月到第6个月每月测量1次，共9次。测量方法与均匀性检验相同。为了保证测量结果准确可靠，每次测量前配制与标准溶液浓度相同的校准品，首先测量校准品的峰面积，然后测量标准物质的峰面积，计算标准物质和相应校准品的峰面积比值，并进行稳定性评价。

选用直线方程作为标准物质的经验模型。实际模型中，直线的截距(在定值范围内)应与1（标准物质和相应校准品的峰面积比值理论值为1）无显著性差异。同时，直线的斜率与零相比并无显著性差异。

斜率计算公式：

截距计算公式：

直线上每点的标准偏差计算公式：

斜率的不确定度计算公式：

其中，X为制备物的放置时间，Y为标准物质和相应校准品的峰面积比值

4.2 稳定性检验结果

表 5 1×10-4g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质稳定性检验结果

表 8 硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质不确定度分量

表 7 1×10－9g/mL硫酸奎宁/高氯酸水溶液标准物质稳定性检验结果

斜率： b1=-1.03×10-5

截距：b0=1.0056

斜率不确定度：s(b1) =7.98×10-5

从表5～表7的数据可以看出，3种标准物质与相应校准品的峰面积比值关于放置时间的函数曲线的斜率，满足说明斜率不显著，可认为所制备的标准物质的特性量值没有发生显著性变化，因此标准物质有效期暂定为6个月。从数据可以看出，标准物质稳定性非常好，稳定性对不确定度的贡献可以忽略不计，因此在不确定度评定时可以不考虑稳定性的影响。

5 标准溶液的不确定度分析

硫酸奎宁/高氯酸溶液水溶液标准物质的不确定度分量见表8：

(1) 1.00×10-4g/mL的硫酸奎宁/高氯酸水溶液的体积摩尔浓度相对不确定度为：

(2) 1.00×10-6g/mL的硫酸奎宁/高氯酸水溶液的体积摩尔浓度相对不确定度为：

(3) 1.00×10-9g/mL的硫酸奎宁/高氯酸水溶液的体积摩尔浓度相对不确定度为：

6 小结

目前，该标准物质已经获批为国家二级标准物质，并在部分军队医院及科研院所开展了液相分析仪荧光检测器的检定工作。

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Development of Reference Material for Fluorescence Detector of HPLC

ZHAO Peng, WU Jian-Gang,LI Yong-xue,SHEN Juan,MA Fei,WU Wen-jun
Institute for Drug and Instrument Control Health Dept Gid of PLA,Beijing 100071, China

TH833；TB9

A

10.3969/j.issn.1674-1633.2010.10.001

1674-1633(2010)10-0001-04

2010-05-22

2010-06-11

作者邮箱：yjs_zp@sina.com;

本文导读 >>

Abstract:According to verification regulation, we developed reference material for fluorescence detector of HPLC. This paper introduces the confect method, homogeneity test, stability test methods, and analyses uncertainty of reference material.

Key words:HPLC;fluorescence detector;reference material;homogeneity;stability