卤制品中人工合成着色剂检测方法的探讨

陈 磊

(上海铁路局蚌埠疾病预防控制中心,安徽蚌埠 233000)

卤制品中人工合成着色剂检测方法的探讨

陈 磊

(上海铁路局蚌埠疾病预防控制中心,安徽蚌埠 233000)

目的:探讨卤制品中人工合成着色剂的检测方法。方法:卤制品经石油醚脱脂,乙醇氨水解析,超声波振荡提取,水浴挥干后进行聚酰胺粉吸附,分别用甲醇-甲酸洗脱,乙醇-氨解析后,水浴近干定容,采用C18色谱柱(250nm×46nm,5μm),流动相为0.02mol/L乙酸铵-甲醇梯度洗脱,254nm波长下检测,保留时间定性,峰面积定量。结果:测定的合成着色剂峰面积与含量在1.0～50.0μg/ml浓度范围内成良好线性关系,相关系数γ均大于0. 999,相对标准偏差在1.18%～3.35%之间。回收率在87.5%～97.1%之间。结论:该方法操作简便,准确可靠,适用卤制品中人工合成着色剂的测定。

卤制品;人工合成色素;高效液相色谱法

人工合成色素是食品中添加的非营养成分,而人工合成色素主要是以苯、甲苯、萘等化工产品为原料,经有机反应化合而成的化合物,这类色素大多都具有一定毒性,尤以偶氮化合物合成着色剂的致癌作用更明显。某些不法商贩为使卤制品颜色鲜艳诱人,会添加合成着色剂。但由于卤制品具有高脂肪、高蛋白质特性,给检验的前处理工作带来很大麻烦。目前国家标准中没有具体规定前处理方法[1],本文结合实际工作和有关文献报道[2]-[3],挑选偶氮化合物合成着色剂中日落黄、胭脂红、苋菜红为代表,建立了有效地测定卤制品中合成着色剂的前处理方法,操作简便,准确可靠。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

Waters高效液相色谱仪(2487检测器),ER-180A电子天平,PHS-T4电位仪。

1.2 检测试剂

日落黄标准品 GBW(E)100003a浓度0.50mg/ml(国家标准物质研究中心)

胭脂红标准品 GBW(E)100004a浓度0.50mg/ml(国家标准物质研究中心)

苋菜红标准品 GBW(E)100002a浓度0.50mg/ml(国家标准物质研究中心)

乙酸铵溶液(0.02mol/L);甲醇(色谱纯);甲醇+甲酸(6+4);乙醇+氨+水溶液(无水乙醇7+氨水2+水1);石油醚;氨水(1+1);PH=4的纯水。

1.3 色谱条件

按GB/T5009.35-2003进行HPLC分析。

色谱柱:Waters C18色谱柱(250nm×46nm,5μm),柱温30℃,检测波长254nm,进样量:20μl;流动相:乙酸铵溶液(0.02mol/L)-甲醇 (色谱纯),梯度洗脱;流量: 1ml/min。

1.4 样品处理

称取5g已粉碎均匀样品,以石油醚分3次提取脂肪,倾去石油醚后,移入比色管,加入乙醇+氨+水溶液30ml, 70℃超声8～10分钟,充分提取色素,将乙醇-氨-色素滤液通过G3垂融漏斗抽滤,再用少量乙醇+氨+水溶液反复洗涤残渣,抽滤后合并滤液。水浴除去乙醇和氨水,待浓缩至约2ml,取下加水溶解色素,用氨水(1+1)调节至PH=6,加热至60℃,将1～2g聚酰胺粉加入,搅拌均匀,以G3垂融漏斗抽滤,用PH=4的60℃纯水洗涤3～5次,然后用甲醇+甲酸(6+4)溶液洗涤3～5次,除去天然色素,再用水洗至中性,最后用乙醇+氨+水溶液解吸3～5次,收集解吸液,调节至PH=7,水浴蒸发到近干,加纯水定容至5ml,经0.45μm水相滤膜过滤后直接进样,保留时间定性,峰面积定量。

1.5 标准溶液的配制

精密吸取日落黄、胭脂红、苋菜红标准液,分别配成1.0、2.5、5.0、10.0、25.0,50.0μg/ml的混合标准溶液系列,按 GB/T5009.35-2003进行 HPLC分析,绘制标准曲线。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理与探讨

由于卤制品具有高脂肪、高蛋白质特性,色素提取困难,因此,首先要对样品进行脱脂,减少脂肪对色素溶出的影响。在用石油醚提取脂肪时,可以温水浴加热,可促进脂肪溶解;利用乙醇+氨+水溶液作为提取溶剂,能够提高色素的溶出率,同时减少蛋白溶出造成的影响;超声波能够破坏样品的油包水平衡,促进样品中色素更加充分地溶于水,70℃超声8～10分钟可使色素全部溶出。在水浴挥干乙醇-氨时,一般温度控制在80～85℃,挥发至2ml即可,防止影响回收率;使用甲醇+甲酸(6+4)溶液洗脱色素吸附解析液,可除去天然色素及少量残留的脂肪,保证出峰效果。

2.2 线性与检出限

将标准溶液系列按按 GB/T5009.35-2003进行HPLC分析,保留时间定性,峰面积定量。得到表1:出峰时间,相关系数及检出限(以10倍仪器噪声所对应添加剂的量计算检出限),结果表明各组分在1.0～50.0μg/ml的浓度范围内线性关系良好,具体色谱图见图1。

表1 出峰时间,相关系数及检出限

图1 混合标准液色谱图

2.3 回收率与方法精密度

采用空白添加标准品方式,分别加入10.0、50.0μg/ml的标液,按1.4前处理方法处理后,进行重复性实验(n= 3),测定结果见表2。

表2 测定结果

3 小结

卤制品具有高脂肪、高蛋白质特性,给实验分析特别是前处理造成很大麻烦,容易使实验结果偏离。本实验将样品经石油醚脱脂后,采用乙醇+氨+水溶液直接提取色素,待水浴浓缩后加水溶解再进行吸附解析,方法简便。所测三种人工合成色素最低检测限均低于国家现行标准要求,回收率在87.5%～97.1%之间,相对标准偏差在1.18%～3.35%之间,证明结果灵敏,准确,适用卤制品中人工合成着色剂地测定。

[1] GB/T5009.35-2003食品中合成着色剂的测定[S].

[2] 牛晋阳,郭文萍,赵榕.高效液相色谱法测定肉制品中的着色剂[J].肉类工业,2007,312(4):23-26.

[3] 欧阳燕玲,陈玲,谢维平.肉制品中人工合成着色剂测定前处理方法的研究[J].中国卫生检验杂志,2006, 16(10):1269.

责任编辑:张彩云

TS202.3

A

1671-8275(2010)03-0141-02

2009-12-20

陈磊(1977-),男,江苏苏州人,上海铁路局蚌埠疾病预防控制中心理化检验技师。