毛细管气相色谱法测定扎托洛芬中有机溶剂的残留量

吴春丽 ,张俊霞,史云涛,李 攀 ,李 幸,雷 伟,张振中

郑州大学药学院郑州 450001

(2009-09-04收稿 责任编辑 姜春霞)

扎托洛芬,化学名为 2-(10-氧-10,11-二氢二苯并 [b,f]硫杂艹卓-2-基)丙酸,是日本 Chemiphar和 Zeria公司开发研制的一种强效非甾体抗炎、镇痛、解热药[1]。为保证药品质量和用药安全,对扎托洛芬进行有机溶剂残留量检测就显得尤为重要。作者采用分步法,先检测中间体 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸中的有机溶剂四氯化碳、三氯甲烷及甲醇的残留,确保达到要求[2],再测定扎托洛芬中乙醇的残留。四氯化碳、三氯甲烷属于含卤素的溶剂,适宜采用响应值较好的电子捕获检测器(ECD),而乙醇、甲醇适宜采用氢火焰检测器(FID)。作者采用毛细管气相色谱法[3-5]测定扎托洛芬原料药中上述4种有机溶剂的限量,方法简单、易操作,且灵敏度高、结果准确,有利于产品安全性的保证。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 Agilent 6890气相色谱仪,HP6890化学工作站。FID和 ECD检测器(美国安捷伦公司)。5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸(郑州大学药学院);扎托洛芬(郑州思创化学生物科技有限公司);四氯化碳、乙醇均为分析纯;三氯甲烷、甲醇及 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)均为色谱纯。

1.2 溶液的配制

1.2.1 四氯化碳和三氯甲烷对照品溶液的配制分别精密称取四氯化碳、三氯甲烷适量,用 DMF稀释成 0.079 7、1.123 8 g/L的溶液,摇匀,作为对照品贮备液。精密量取贮备液 0.5 mL置 100 mL容量瓶中,用 DMF稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液 A。

1.2.2 甲醇对照品溶液的配制 精密称取甲醇适量,用 DMF稀释成 59.347 5 g/L的溶液,摇匀,作为对照品贮备液。精密量取贮备液 0.5 mL置 100 mL容量瓶中,用 DMF稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液B。

1.2.3 乙醇对照品溶液的配制 精密称取乙醇适量,用 DMF稀释成 98.660 g/L的溶液,摇匀,作为对照品贮备液。精密量取贮备液 0.5 mL置 100 mL量瓶中,用 DMF稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液 C。

1.3 色谱条件

1.3.1 四氯化碳和三氯甲烷测定色谱条件 物质的量分数 5%苯基甲基聚硅氧烷(HP-5)毛细管柱(0.32 mm×30 m×0.25μm);ECD检测器,温度为 250℃;进样口温度为 200℃;载气为氮气,流速为 1.0 mL/min;分流比为 50:1;柱温为 60℃;进样量 1μL。

1.3.2 甲醇及乙醇测定色谱条件 HP-5毛细管柱(0.32 mm×30 m×0.25μm);FID检测器,温度为250℃;进样口温度为 200℃;载气为氮气,流速为1.0 mL/min,分流比为 50:1;柱温为 80℃;进样量 1 μL。

1.4 线性关系考察 精密量取各相应对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0及 10.0 mL分别置 10 mL容量瓶中,加 DMF稀释至刻度,摇匀。按 1.3色谱条件进行测定,以各有机溶剂峰面积 Y对浓度 X,进行线性回归。实验重复 3次。

1.5 精密度实验 按 1.3色谱条件,取各对照品溶液重复进样 5次,记录色谱图,并计算结果考察精密度。

1.6 重复性实验 精密称取 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸或扎托洛芬 1.0 g,共 6份,分别置 10 mL容量瓶中,用 DMF溶解并稀释至刻度,摇匀。分别按 1.3.1及 1.3.2色谱条件测定,按外标法计算。

1.7 回收率实验 精密称取 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸 1.0 g,共 12份,分别置 10 mL容量瓶中,前 6份精密加入四氯化碳和三氯甲烷的对照品贮备液 2.0 mL,后 6份精密加入甲醇对照品贮备液,均用 DMF溶解并稀释至刻度,摇匀。分别按1.3.1及 1.3.2色谱条件测定。同时测定各相应对照品溶液。计算回收率。精密称取扎托洛芬样品约1.0 g,共 6份,分别置 10 mL容量瓶中,精密加入乙醇对照品贮备液 2.0 mL,用 DMF溶解并稀释至刻度,摇匀。按 1.3.2色谱条件测定。同时测定其对照品溶液,计算回收率。

1.8 样品测定 精密称取 3批 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸样品约 1.0 g,置 10 mL容量瓶中,用DMF溶解并稀释至刻度,摇匀得供试品溶液 a、b。按 1.3.1及 1.3.2色谱条件测定,按外标法计算样品中四氯化碳、三氯甲烷及甲醇的残留量。精密称取扎托洛芬样品约 1.0 g,置 10 mL容量瓶中,用DMF溶解并稀释至刻度,摇匀得供试品溶液 c。按1.3.2色谱条件测定,按外标法计算样品中乙醇的残留量。

2 结果

2.1 线性关系考察 见表 1。四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇的检测限分别为 0.012、0.168 6、4.75及 0.986 6 ng。

表 1 4种有机溶剂的回归方程和线性范围

2.2 精密度实验 四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇的 RSD分别为 2.62%、4.25%、2.38%及 2.79%。2.3 重复性实验 结果表明该样品中不含四氯化碳、三氯甲烷、甲醇和乙醇,方法重复性良好。

2.4 回收率实验 四氯化碳、三氯甲烷及甲醇的平均回收率分别为 98.0%、97.9%和 98.8%,RSD分别为 3.42%、3.70%和 0.30%(n=6)。乙醇的平均回收率为 103.9%,RSD为 5.01%(n=6)。

2.5 样品测定 3批检测样品均未检出四氯化碳、三氯甲烷、甲醇和乙醇。对照品和样品的气相色谱图见图 1。其中峰 6为溶剂杂质,该杂质在测定方法中无干扰,不影响测定。

图 1 对照品溶液(A)和样品溶液(B)的气相色谱图结果A:对照品;B:样品;1:三氯甲烷;2:四氯化碳;3:甲醇;4:乙醇;5:DMF;6:溶剂杂质。

3 讨论

HP-5是非极性毛细管柱,适用于多核芳烃、酚、酯、碳氢化合物、药物及醇等,比较适合用于残留溶剂分析。在该研究条件下各物质均可达到有效分离,且峰形好,灵敏度高,重现性好。

人用药物注册技术要求国际协调会议(ICH)中关于有机溶剂残留量的指导原则,将乙醇列为三类溶剂,而四氯化碳列为必须避免使用的一类溶剂,三氯甲烷和甲醇列为必须限制使用的二类溶剂[2]。根据 ICH的控制指标,四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇 4种溶剂的限度规定为 0.000 4%、0.006%、0.3%和 0.5%。上述测定结果远远小于这个限度。方法学研究表明该法对四氯化碳、三氯甲烷、甲醇和乙醇的检测具有很高的灵敏度、很好的精密度和准确性,所配制的溶液稳定性也能满足分析的要求。该方法快速简便,适用于扎托洛芬原料药中四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇残留量的测定。

[1]金辉.非甾体抗炎镇痛药扎洛芬合成研究[D].四川大学,2003.

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