顶空气相色谱法测定布美他尼原料药中残留的溶剂

罗亚虹，侯 军

(1.广西壮族自治区桂林食品药品检验所，广西 桂林 541002; 2.广西桂林南药股份有限公司，广西 桂林 541003)

布美他尼为一速效利尿药，利尿作用强，起效快，可用于治疗各种顽固性水肿及急性肺水肿，尤其适用于急、慢性肾功能衰竭[1]93。由于该药在合成过程中需使用甲苯、乙醇等有机溶剂，产品中的有机残留量对人体有害，依据人用药品注册技术规范国际协调会(ICH)提出的残留溶剂指导原则，甲苯、乙醇分别列为药品必须限制的第二类、三类有机溶剂[2]。笔者采用顶空气相色谱法测定布美他尼中有机溶剂的残留量，报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津GC-17A型气相色谱仪，HSS-4A型顶空进样装置，CLASS-GC10型色谱工作站，GR-202型电子天平。布美他尼原料药(桂林南药股份有限公司，批号分别为080102，080103，080104);乙醇、甲苯、正丙醇均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:DB-1型石英毛细管柱(30 m×0.53 mm，1.5 μm);柱温:采用程序升温，起始温度35℃，维持3 min，再以55℃ /min升温至90℃，维持1.5 min;载气:氮气;流速:4 mL/min;氢火焰离子化检测器(FID);进样口温度:200℃;检测器温度:250℃;顶空瓶温度:80℃，平衡30 min，进样量1 mL。在此色谱条件下，甲苯与乙醇分离满意。甲苯、乙醇、内标物正丙醇保留时间分别约为5.8，2.1，3.2 min。理论板数按正丙醇峰计不低于8 000。甲苯、乙醇与内标物正丙醇的分离度均大于2。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称定正丙醇8.75 mg，置250 mL量瓶中，加水至刻度，作为内标溶液。分别精密称取乙醇9.25 mg，甲苯9.0 mg，置250 mL量瓶中，加水至刻度，作为对照品贮备液;精密量取对照品贮备液0.5 mL，置顶空瓶内，精密加入内标溶液1 mL，加盖密封，作为对照品溶液。精密称取供试品约0.2 g，置顶空瓶内，精密加入内标溶液1 mL，加盖密封，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取不加供试品的顶空瓶，精密加入内标溶液1 mL，加盖，按2.1项下色谱条件进样分析得色谱图。结果没有与乙醇、甲苯相同的色谱峰，说明内标物正丙醇所含的杂质对测定没有影响(图 1 C)。

线性关系考察:精密量取对照品贮备液0.1，0.3，0.5，0.7，0.9 mL，分别置顶空瓶中，各加内标溶液1 mL，加盖密封，在80℃保温30 min，按2.1项下色谱条件进样3次。分别以对照品乙醇、甲苯与内标物正丙醇的峰面积之比为纵坐标、对照品溶液的质量浓度为横坐标进行线性回归。结果乙醇和甲苯的回归方程分别为C=64.36 A-1.463，r=0.999 8(n=5)，C=12.37 A-2.536，r=0.999 6(n=5)。当基线噪音峰为 S/N=3时，乙醇和甲苯的最低检测限分别为0.02 μg/g和0.05 μg/g。结果表明乙醇和甲苯的质量浓度分别在 3.7～33.3 μg/mL 和 3.6～32.4 μg/mL 的范围内与峰面积之比线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次。结果乙醇及甲苯与正丙醇的峰面积之比的 RSD分别为1.19%，1.01%。

重复性试验:取供试品(批号为080102)，依法重复测定6次。结果乙醇的平均含量为4.08 μg/g，RSD为1.48%。

加样回收试验:用已测得残留量的试样，精密添加对照品贮备液0.3，0.5，0.7 mL，按2.1项下色谱条件进行测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 乙醇和甲苯的加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

称取3批样品，每份约0.2 g，各置顶空瓶中，分别加入内标溶液1 mL，加盖密封，按2.1项下色谱条件进行测定。结果样品中均未检出甲苯，乙醇溶剂残留符合规定[2]。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

在固定平衡时间时，曾对甲苯、乙醇在60，70，80，90℃下色谱响应值(峰面积)的变化进行试验，结果在80℃时两种溶剂的响应值(峰面积)最大，故选用80℃作为顶空平衡温度。

顶空平衡时间取决于被测组分分子从基质到气相的扩散速度，固定平衡温度为80℃时，曾试验甲苯、乙醇在平衡时间为5，10，20，30，40 min 时色谱响应值(峰面积)的变化，结果平衡时间30 min时达到最大值，说明在30 min时各组分已达到了气液两相平衡，故选择30 min作为顶空平衡时间。

本试验所建立的顶空气相色谱法，液体与固体共存顶空自动化进样，试验方法简便、灵敏度高、精密度及重复性好，可作为布美他尼原料药中的有机溶剂残留测定，对保证产品质量和用药安全具有实用性，可用于实际生产中的质量控制。

根据药品中常见的残留溶剂及限度[1]附录56规定及本试验的最低检测限，建议对本品中乙醇、甲苯的限度分别规定为5 mg/g和0.89 mg/g。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005.

[2]周海钧.药品注册的国际技术要求:质量部分(ICH指导委员会)[M].北京:人民卫生出版社，2000:88-89.