高效液相色谱法测定吐泻肚痛胶囊中厚朴酚与和厚朴酚含量

许景景，吴纤愫

(浙江省舟山市食品药品检验所，浙江 舟山 316000)

吐泻肚痛胶囊由木香、茯苓、赤石脂、厚朴、甘草等9味中药制成，具有化气消滞、去湿止泻功效，用于治疗湿热积滞引起的肚痛泄泻、晕眩呕吐。其药品标准中仅有常规检查项[1]。为了确保产品的质量，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂的厚朴酚及和厚朴酚含量，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型HPLC系统(美国安捷伦公司);SB3000型超声处理器(上海必能信公司)。厚朴酚对照品(批号为110729-200208)，和厚朴酚对照品(批号为110730-200609)均来自中国药品生物制品检定所;乙腈、甲醇(色谱纯)，水(重蒸馏水)，其他试剂(分析纯);吐泻肚痛胶囊(广东嘉应制药股份有限公司，批号分别为 20080702，20080911，20081110)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Zorbxa SB-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱温:25℃;检测波长:294 nm;流动相:乙腈-甲醇-水(20∶60∶20);流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取厚朴酚对照品12.28 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为122.8 μg/mL的厚朴酚对照品溶液;精密称取和厚朴酚对照品11.09 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为110.9 μg/mL的和厚朴酚对照品溶液。取装量差异项下的本品，研细，取约0.3 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超声处理(功率400 W，频率50 kHz)30 min[2]，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取厚朴阴性样品，按供试品溶液制备法制备阴性对照品溶液并测定。结果在和厚朴酚和厚朴酚对照品出峰处未出现色谱峰，表明阴性对照品溶液中的组分不干扰厚朴酚及和厚朴酚的测定。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取厚朴酚对照品溶液(122.8 μg/mL)1，2，2.5，3，4，5，10 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各取10 μL注入色谱仪，测定峰面积 Y，得回归方程 Y=29.532 X+59.181，r=0.999 2。结果表明，其质量浓度在 12.28 ～122.8 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。精密量取和厚朴酚对照品溶液(110.9 μg/mL)1，2，2.5，3，4，5，10 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各取10 μL注入色谱仪，测定峰面积 Y，得回归方程Y=35.303 X+49.841，r=0.999 3。结果表明，其质量浓度在11.09～110.9 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取厚朴酚和和厚朴酚对照品溶液，分别重复进样6次，测定。结果厚朴酚和和厚朴酚峰面积的 RSD分别为0.6%和0.9%(n=6)。

稳定性试验:按上述色谱条件，每隔一定时间，精密量取供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。结果在10 h内样品中厚朴酚及和厚朴酚峰面积积分值的 RSD分别为0.7%和1.2%(n=7)。

重复性试验:取同一批样品(批号为20080702)样品6份，依法测定峰面积并计算含量(mg/g)。结果厚朴酚的平均含量为5.43mg/g，RSD为1.0%(n=6);和厚朴酚的平均含量为6.09mg/g，RSD为0.9%(n=6)。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20080702)0.2，0.3，0.4 g，各 3份，分别精密加入厚朴酚对照品 1.134，1.697，2.262 mg 及和厚朴酚对照品 1.496，2.280，3.040 mg，按供试品溶液制备法制备溶液并依法测定。结果见表1。

表1 厚朴酚与和厚朴酚加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

依法测定了3批样品，结果厚朴酚含量分别是5.43，5.07，5.52 mg/g，和厚朴酚含量分别为 6.09，5.84，6.28 mg/g。

3 讨论

参照2005年版《中国药典(一部)》中厚朴、藿香正气水、人参再造丸等厚朴酚及和厚朴酚的含量测定方法，分别以甲醇[3]、稀乙醇[4]为提取溶剂，对超声和浸渍[5]两种提取方式进行了考察，发现甲醇的提取效果较彻底，而超声和浸渍的提取效果相差不多，考虑到超声提取较为简便，最终确定以甲醇为提取溶剂，对样品超声提取30 min。

比较了 Diamonsil C18柱、Zorbxa SB-C18柱、Kromasil 100-5 C18柱 3种色谱柱(均为 250 mm ×4.6 mm，5 μm)，结果发现 Zorbxa SB-C18柱对样品中和厚朴酚与厚朴酚的分离效果最佳。

考察了乙腈-水(50∶50)、甲醇-水(90∶10)和乙腈-甲醇-水(20∶60∶20)3种流动相，结果采用最后一种流动相时分离度较好，且保留时间适中。

[1]WS3-B-2315-97，卫生部药品标准·中药成方制剂(第十二册)[S].

[2]龙晓蕾，刘 高，陈 曦，等.厚朴酚与和厚朴酚的超声提取工艺研究[J].湖南农业科学，2009(5):99-101.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:176，661，313.

[4]郭丽冰，赵丽华.HPLC测定不同来源姜制厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的含量[J].中国现代中药，2006，8(9):17-19.

[5]苏 健，王宝琴.厚朴及其制剂中厚朴酚、和厚朴酚含量测定方法研究综述[J].中国中医药信息杂志，2002，9(9):35-37.