大耳白兔髂动脉球囊扩张成形术后宏观四诊信息望诊的采集及分析※

柴欣楼 黄小龙 张永生

（1.北京中医药大学,100029 2.中国中医药出版社3.北京中医药大学附属东方医院）

冠状动脉严重狭窄,造成心肌细胞缺血缺氧,是冠心病的主要病理机制。经皮冠状动脉内球囊扩张成形术(Percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)可恢复冠状动脉前向血流,已成为治疗冠心病的基石。由于血管的弹性回缩及血管内膜增厚,术后半年内再狭窄的发生率高达40%～60%[1,2]。因而成为目前的研究热点。中医对其的认识也不断提高,但是其所属的证候不甚明确,本实验以PTCA术后大耳白兔为研究对象,旨在观察 PTCA术后实验动物的症状学。

实验材料

1.实验动物 :清洁级健康新西兰兔[提供单位:北京海淀兴旺动物养殖场,动物合格证号:SCXK(京)2006-0006]20只 ,雄性,体重2.5±0.3kg。

主要药品与试剂:①阿司匹林肠溶片(北京天惠药业股份有限公司,批号:H10940191,50mg/片)。②盐酸普鲁卡因注射液(北京市永康药业有限公司,批号:H11020574,2ml:40mg/支)。③乌拉坦(国药集团化学试剂有限公司,批号:T20070921,化学纯CP500g)。④肝素钠注射液(江苏常州千红生化制药有限公司,批号:H32002066,2ml:12500U/支)。⑤注射用青霉素钠(华北制药股份有限公司,批号:H13020657,80万U/瓶)。⑥甲醛溶液(济南鲁康化学工业有限公司,批号:T02010242,分析纯500ml)。⑦安尔碘皮肤消毒剂(上海利康消毒高科技有限公司,批号:20080421,40ml/瓶)。⑧ICAM-1试剂盒、VCAM-1试剂盒、MCP-1试剂盒(购买于武汉博士德生物工程有限公司)。

主要实验仪器:①SigmaK15台式低温高速冷冻离心机(博万力行仪器有限公司)。②电子天平DT-201A(江苏常熟金羊天平仪器厂)。③全自动生化分析仪(型号:OLYMPUSAU640日本造)。④DADEBEHRING(型号:BN-Prospec,美国 造)。⑤STAR72600酶标仪(型号:ICAP-9000,美国Jarrel-ASH公司)。⑥数码成像软件(SPOT-ⅡDiagnotisticinstrument inc.美国)。

动物分组:按计算器随机数随机分组编号:正常组6只,模型组6只,中药组8只。

实验方法

动脉粥样硬化模型的建立:新西兰兔分组适应性喂养 1周后,中药组(瓜蒌 2.14g/kg,生晒参0.64g/kg,酒大黄0.43g/kg)、模型组均给予高脂饲料(1%胆固醇+7.5%蛋黄粉+8%脂肪+83.5%普通兔全价饲料)100g/日喂养 6周,6周后中药组及模型组采用球囊拉伤术损伤髂动脉。术后均继续以高脂饮食喂养5周。正常组全程给予普通兔饲料喂养,各组均自由饮水。

手术方法:术前3天服用阿司匹林肠溶片25mg/日,术前禁食12h,不禁水。兔耳缘静脉注射部位备皮,75%酒精消毒,普鲁卡因注射液局部表面麻醉后静推10%乌拉坦10ml/kg,同时推入2%肝素钠注射液5ml。麻醉5min后,兔无明显挣扎,角膜反射迟钝,心率增快,将其仰卧位固定于兔台,右腹股沟区剪毛备皮,安尔碘局部消毒3次。寻找股动脉搏动部位,剪开皮肤约3cm开口,逐层分离筋膜及肌肉,暴露股神经及股静脉,于股静脉内下方找到股动脉后,分离股动脉与周围组织长约2cm段,远心端用丝线结扎,近心端套活结并加上动脉夹。将眼科镊柄垫于股动脉下,距离动脉结扎端较近部位剪一“V”形切口,将导管沿切口向近心端插入,拉紧活结,放松动脉夹,再稍放松活结,迅速将导管插入股动脉10～15cm,回拉至髂动脉,连接手推压力泵,注入肝素生理盐水,球囊充水约5个大气压后缓慢回拉,减除球囊压力后再次向前推进球囊导管。重复3次后拔出,结扎股动脉近心端,逐层缝合,伤口以安尔碘消毒,用生理盐水冲洗伤口周围3遍,臀部注射青霉素钠80万U/日(连用3天),待兔苏醒后放回兔笼,术后8h予生理盐水10ml口服。

在此过程中系统观察精神状态、活动性、毛色、毛质 、毛状 、耳郭 、望目色 、望舌 、舌形 、苔色 、舌下络脉 、舌静脉瘀黑伸展度、爪色、浮肿、伤口愈合、渗血渗液、食欲、饮食量、活动量等。

实验结果

一般状态观察:术后1～7天,各组大耳白兔均出现毛发杂乱、活动缓慢、精神迟钝等表现,与手术过程后失血、疼痛有关。术后7～10天,模型组、中药组宏观表现中精神状态、毛色、毛质、毛状、耳郭、目色、舌形、苔色 、舌下络脉 、舌静脉 、伸展度 、爪色 、浮肿 、伤口愈合 、渗血渗液、食欲等未见显著性差异。

各组新西兰兔腹主动脉内膜、中膜面积及内膜/中膜面积比值比较见表1。

表1 各组新西兰兔腹主动脉内膜、中膜面积及内膜/中膜比值

结果显示:模型组、中药组腹主动脉内膜、中膜面积及内膜/中膜比值较正常组有显著性差异;中药组内膜面积及内膜/中膜比值较模型组有显著性差异。

体重:各组兔子术后体重比较见表2。

表2 各组兔子术后体重比较

结果显示:PTCA术后20天中药组兔子的体重比模型组兔子更接近于正常。

各组兔子术后活动性比较见表3。

表3 各组兔子术后活动性比较

结果显示:PTCA术后20天中药组兔子的活动性明显好于模型组兔子。

中药组和模型组兔子术后伤口愈合程度比较见表4。

表4 中药组和模型组兔子术后伤口愈合程度比较

PTCA术后20天中药组兔子的伤口愈合情况好于模型组兔子。

结论

通过正常组、中药组、模型组大耳白兔髂动脉球囊扩张成形术后宏观四诊信息望诊的采集及分析得出:通过中药治疗,大耳白兔髂动脉球囊扩张成形术后比不治疗恢复情况更好。

讨论

目前常用的球囊拉伤术模型包括兔的髂动脉、犬的股动脉和冠状动脉及猪的冠状动脉[1]。兔的优点是易捕捉麻醉,操作简单、价廉、喂养方便及侧支血管丰富,可在术后保证侧支循环。缺点为髂动脉反应性高,易发生血管痉挛。本实验采用纯种新西兰白兔,用与血管直径约为1.2∶1比例的球囊过度扩张髂动脉,使得髂动脉血管损伤程度尽可能保持一致。病理结果显示,模型组与正常组相比,内膜和中膜都有不同程度的增厚,说明家兔髂动脉球囊损伤内膜增生模型复制成功,为进一步实验奠定了基础。

中医认为,球囊损伤模型是气虚血瘀模型,但缺乏相应的证候动物模型的评价体系[2](该体系包括动物的宏观表现、临床疾病诊断标准、证候诊断标准和证候临床生物学标志4个部分)。为此,本课题对大耳白兔进行了宏观表征的直接观察(包括动物一般状态、运动、饮食、呼吸、体重 、舌象等内容);但由于动物在望、闻、问、切四诊信息的采集上存在一定困难,且大多数体征模型组和用药组均无差异,故而单纯依赖观察手段进行辨证是不够的,借助其他实验手段或采用更新的实验仪器是动物模型辨证的必然选择。

本课题对动物宏观表征进行了直接观察,由于采用的是局部球囊损伤模型,而且饲喂的时间较短,再加上动物本身皮毛厚又不能问诊,所以动物四诊信息采集丢失的信息较多,单纯靠动物宏观表征难以鉴定其病症,要密切结合动物的生物学信息。

[1]何学令,尹海林,等.动脉粥样硬化动物模型研究的现状及存在的问题.实验动物科学与管理,2006,23(4):41-43.

[2]沈自尹.中医虚证辨证参考标准.中西医结合杂志,1986,6(10):598.