反相高效液相色谱法测定多索茶碱血浓度

林 玳，郑怀宇

(浙江省舟山医院城北院区药剂科，浙江 舟山 316000)

多索茶碱是一种新型的甲基黄嘌呤衍生物，具有平喘、抗炎和镇咳作用，疗效较茶碱强，不良反应较茶碱少。其血药浓度测定多采用高效液相色谱法，但条件各异。笔者参照有关文献[1-4]，并经多次试验，最终确定用反相高效液相色谱法，以苯巴比妥作内标，乙腈-水为流动相，采用梯度洗脱方法对血清中多索茶碱浓度的测定方法进行改进研究，并对用药患者进行多索茶碱血浓度的测定，效果很好，报道如下。

1 仪器与试药

Beckman Coulter高效液相色谱仪，包括125泵、166检测器。乙醚(分析纯，上海化学试剂总厂，批号为070901);乙腈为高效液相色谱淋洗液(国药集团化学试剂有限公司，批号为20090413);多索茶碱(浙江北生药业有限公司，批号为070901，纯度大于99%);苯巴比妥(上海新亚药业有限公司，批号为081003，纯度大于98.5%);水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Ultrasphere C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Ultrasphere C18保护柱(45 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水，0～8 min为17%乙腈，8～9 min为17%乙腈-45%乙腈，9～15 min为 45%乙腈，15～18 min为45%乙腈-17%乙腈;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;检测波长:210 nm;进样量:20 μL。

2.2 血样处理

取血清100 μL置具塞试管中，加内标液 20 μL，混匀，加乙醚 5 mL，旋涡混合2 min，放置 15 min，以 4 000 r/min 转速离心15 min，取乙醚提取液4 mL，置离心管中，氮吹挥干乙醚，用50%乙腈100 μL复溶，进样测定，高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密称取苯巴比妥适量，配成质量浓度为40 mg/L的溶液，作为内标液;精密称取多索茶碱适量，用甲醇配成质量浓度为500 mg/L的溶液，吸取0.15 mL至试管中，用氮气吹干甲醇，加3 mL空白血浆超声复溶，再用空白血浆依次稀释成 25.00，12.50，6.25，3.125，1.56，0.78，0.39 mg/L的多索茶碱标准血样，按血样处理方法处理含多索茶碱的标准血样。结果多索茶碱质量浓度在0.39～25.00 mg/L范围内，与多索茶碱跟内标峰面积比值的线性关系良好，回归方程为 Y=7.509 8 X-0.130 0，r=0.999 8(n=7)。多索茶碱的最低检测浓度为0.2 mg/L(S/N≥3)。

回收率与精密度试验:选用0.78，6.25，25.00 mg/L不同质量浓度的对照品溶液进行回收率与精密度测定(n=5)。结果见表1。

2.4 样品检测

对临床静脉滴注多索茶碱注射液0.2 g+0.9%氯化钠注射液100 mL的6例患者，于滴注完毕后15 min取静脉血进行测定，测得质量浓度分别为 5.54，4.67，4.40，3.40，0.78，0.59 mg/L，平均3.23 mg/L，与有效质量浓度5～20 mg/L有一定的差距，与文献[2，4]报道的基本一致。1例患者静脉滴注多索茶碱注射液0.2 g，20 h后取血测定，测得血药浓度为0.64 mg/L。这些均提示临床用药剂量与方法有待改进。可以确定的是，患者合用的茶碱、二羟丙茶碱、甲强龙、氢化泼尼松、地塞米松、氨溴索、多潘立酮、头孢呋辛、头孢西丁、头孢唑肟、阿奇霉素、卡巴克洛、非洛地平、维生素C、维生素B6对测定均无干扰。

表1 多索茶碱的回收率、日内和日间精密度试验结果(n=5)

3 讨论

反相高效液相色谱法能很好地分离多索茶碱、内标、血浆杂质及茶碱，其线性范围、回归系数、回收率和日内、日间精密度的 RSD均符合生物样本分析方法的要求，可用于多索茶碱血浓度的测定。

文献报道的内标有咖啡因、茶碱、苯巴比妥，有些食物含咖啡因。茶碱为多索茶碱的微量代谢物，作为内标不合适，因此选用与多索茶碱合用几率很小的苯巴比妥作为内标。选用乙腈-水作为流动相，在乙腈-水的体积比为17∶83时多索茶碱与血浆杂质、茶碱分离较好，保留时间适宜，但与巴比妥的保留时间相差大。在多索茶碱出峰后提高流动相中乙腈的比例，可使苯巴比妥出峰时间提前并缩短分析时间。

致谢:衷心感谢舟山医院呼吸内科李略副主任医师对多索茶碱血浓度测定工作的支持！

[1]陈锦珊，杜青云，黄惠丽，等.反相高效液相色谱法测定血清中多索茶碱浓度[J].海峡药学，2003，15(4):28.

[2]王淑群，吴历峰，熊建华，等.HPLC法测定血清中多索茶碱浓度[J].中国临床药学杂志，2003，12(6):347.

[3]付世江，霍宝方，孙吉臻，等.口服多索茶碱片Ⅰ期临床试验研究[J].中国临床药理学杂志，1998，14(4):222.

[4]孔秋芹，杨水新.茶碱类药物的血药浓度监测方法与应用[J].福建医药杂志，2005，27(6):149.