黄皮不同部位生理活性物质的提取与抗菌作用

徐绍成，周汉林，廖艳云，杨瑞，杨劲松，*

（1.海南大学食品学院，海南海口570228；2.中国热带农业科学院热带作物品种与资源研究所，海南儋州571737）

黄皮不同部位生理活性物质的提取与抗菌作用

徐绍成1，周汉林2，廖艳云1，杨瑞1，杨劲松1，*

（1.海南大学食品学院，海南海口570228；2.中国热带农业科学院热带作物品种与资源研究所，海南儋州571737）

用不同的方法提取黄皮树叶、树皮以及黄皮果核和果皮的活性物质，并研究其活性成分的抑菌效果。结果表明：黄皮各部位的浸提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、白色念珠菌，均具有明显的抑菌效果；且用95%乙醇提取的活性物质抑菌效果最好，其中以黄皮果皮的浸提物抑菌效果为最佳。

黄皮；活性物质；抗菌作用

Abstract:Use different way to extract the substances in the leaves,bark,nut and peel of clausena lansium,and determine the bacteriostatic effect.The research results in this paper showed that all parts of clausena lansium extracts have significant inhibitory effects on the E.coli,Staphylococcus aureus,Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans;and the best way is that use 95%alcohols to extract the substances,among them,the extracts that extract from the skin of clausena lansium fruit have the best inhibitory effect.

Key words：clausena lansium；active substances；inhibitory effect

黄皮（Clausena lansium）属芸香科黄皮属，原产于我国华南地区，已有1500多年的栽培历史[1]。黄皮约有23个种，主要分布在东半球热带与亚热带地区，在我国约有11个种，主要分布于广东、广西、福建、海南、四川、云南和台湾等地区[2]。现代科学研究表明，黄皮中含有多种化学活性物质。据有关试验证明，黄皮活性物质均具有杀虫、抑菌作用。徐汉虹等[3]研究了该植物的精油对贮粮害虫的活性，表明黄皮茎、果核内存在有杀虫活性物质；刘序铭等[4]研究了黄皮不同部位(E)-N-(2-苯乙基)肉桂酰胺的含量及杀菌活性。这些都是应用于植物性杀虫方面，在医药界的研究较少。

本课题主要研究黄皮活性物质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、白色念珠菌的生长抑制作用，为其在食品防腐和医药生产方面的研究提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 黄皮样品

采自海南大学儋州校区周边地区的黄皮树皮、树叶、果皮和黄皮果核。

1.1.2 指示菌株

大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）， 酿 酒 酵 母（Saccharomyces cerevisiae），白色念珠菌（Candida albicans）。均来自海南大学食品学院菌种保藏中心。

1.1.3 培养基和试剂

牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基、95%乙醇、氢氧化钠等。

1.1.4 主要仪器

分析天平：梅特勒-托利多仪器上海有限公司；高压蒸汽灭菌锅、HSR025-生化培养箱：南京实验仪器厂；DHG-9203A电热鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司；微波炉：佛山格兰仕微波炉电器有限公司；电炉：广州粤城电器厂；铝锅：上海精艺不锈钢器皿厂。

1.2 方法

1.2.1 不同酒精量对黄皮活性物质的提取[5]

准确称取新鲜的黄皮叶、黄皮树皮、黄皮果核、黄皮果皮各2 g，捣碎后放入50 mL的小烧杯中，试验共分3组，每组分别加入10、20、30 mL 95%的酒精浸泡24 h后，滤去烧杯中的杂质，收集浸泡液。

1.2.2 黄皮活性物质的沸水浸提[6]

准确称取新鲜黄皮树叶、黄皮树皮、黄皮果核、黄皮果皮各2 g,分别置于小铝锅内，加入200 mL水，回流煎煮3次，每次1 h，其间不断补充蒸发的水分，过滤，收集浓缩的滤液20 mL备用。

1.2.3 黄皮活性物质的微波提取

准确称取新鲜黄皮树叶、黄皮树皮、黄皮果核、黄皮果皮各2 g,分别加入20 mL 95%乙醇，在微波中提取15 s后取出进行过滤，滤渣再加入10 mL 95%酒精在同样条件下进行提取，合并滤液并浓缩到20 mL。

1.2.4 滤纸片法测定黄皮浸提物的抑菌作用[7-9]

在超净工作台上，分别取0.1 mL的各菌悬液加入盛有相应培养基的培养皿中，用三角刮铲涂布均匀，然后将灭菌的滤纸片贴在涂布好的平板上，将平板分成4份，中间用相应的空白对照试剂作对照，用移液枪分别移取黄皮的提取液和空白对照试剂10 μL至相应的滤纸片上，然后将平板置于恒温培养箱中培养。细菌在35℃~37℃恒温培养箱内培养18 h~24 h，白色念珠菌在28℃下培养48 h，酵母菌在28℃下培养24 h。观察结果，测抑菌圈直径。

2 结果

2.1 黄皮树叶中活性物质的抑菌效果

黄皮树叶浸提液的抑菌活性比较见表1和图1。

表1 黄皮树叶浸提液的抑菌活性比较Table 1 Antimicrobial effects of Clausena lansium leaves

由表1和图1中黄皮树叶浸提液的抑菌活性比较可知，黄皮叶中活性物质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、白色念珠菌均有抑菌效果，不同的提取方式对活性物质的抑菌效果有一定的影响。其中10 mL 95%乙醇提取的活性物质抑菌效果最强，沸水提取效果最差。

2.2 黄皮树皮中活性物质的抑菌效果

黄皮树皮浸提液的抑菌活性比较见表2和图2。

由表2和图2中的黄皮树皮浸提液的抑菌活性比较可知，黄皮树皮的活性物质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、白色念球菌也有抑菌效果，其中10 mL 95%乙醇提取的活性物质抑菌效果最强，而微波提取则比沸水法提取好。

表2 黄皮树皮浸提液的抑菌活性比较Table 2 Antimicrobial effects of clausena lansium bark

2.3 黄皮果核中活性物质的抑菌效果

黄皮果核中活性物质的抑菌效果见表3、图3。

由表3和图3可知，黄皮果核活性物质的抑菌效果总体上不如黄皮树叶和树皮，用水煮法提取的活性物质没有抑菌作用，以10 mL 95%乙醇提取的活性物质抑菌效果最佳。

表3 黄皮果核浸提液的抑菌活性比较Table 3 Antimicrobial effects of clausena lansium nut

表4 黄皮果皮浸提液的抑菌活性比较Table 4 Antimicrobial effects of clausena lansium peel

2.4 黄皮果皮中活性物质的抑菌效果

黄皮果皮中活性物质的抑菌效果见表4和图4。

由表4和图4中黄皮果皮浸提液的抑菌活性比较结果可知，黄皮果皮含有大量的活性物质，对试验菌的生长有很强的抑制作用，总体抑菌效果好于其他黄皮部位。其中以10 mL 95%乙醇提取的黄皮果皮浸提液抑菌效果最佳，微波提取效果次之，而用沸水提取的活性物质对试验菌没有抑制效果，由此表明，不同的提取方法对其活性物质的种类有一定的影响，从而影响抑制效果。

3 讨论

试验结果表明：黄皮各部位的浸提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、白色念珠菌，均具有明显的抑菌效果；用95%乙醇提取的活性物质抑菌效果较好，其中以黄皮果皮的浸提物抑菌效果为最佳。不同的提取方法提取黄皮活性物质的量不一样，黄皮不同部位活性物质的种类也不同，可见，这些对试验菌的抑菌效果都有一定的影响。沸水浸提的活性物质对试验菌的抑菌效果不是很好，说明温度可影响活性物质的活性，影响其活性作用。用酒精浸提时，酒精的用量不同其抑菌效果也不同，可知，浓度对试验菌的抑菌效果也有很大的影响。

[1]翁树章.华南特种果树栽培技术 [M].广州：广东科技出版社，1997：514

[2]潘建平，袁沛元，曾杨，等.华南地区黄皮良种、生产现状与发展对策[J].广东农业科学，2007(1)：103-105

[3]徐汉虹，赵善欢，朱亮锋，等.齿叶黄皮精油的杀虫作用与有效成分研究[J].植物学报,1987，29(4)：416-421

[4]刘序铭，万树青.黄皮不同部位(E)-N-(2-苯乙基)肉桂酰胺的含量及杀菌活性[J].农药，2008，47(1)：15-16

[5]黄欣碧，龙盛京.水黄皮化学成分及抗氧化活性研究[D].广西医科大学，2005：17-19

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Extract Active Substances in Different Organ of Clausena lansium and the Activity to Colletotrchum musae

XU Shao-cheng1，ZHOU Han-lin1，LIAO Yan-yun1，YANG Rui1，YANG Jin-song1，*
（1.Food College，Hainan University，Haikou 570228，Hainan,China；2.Tropical Crops Genetic Resources Institute of Chinese Academy of Tropic Agriculture Sciences，Danzhou 571737，Hainan,China）

2010-05-12

海南省教育厅高校科研项目（Hj200769）；海南大学研究生创新基金项目（2008）

徐绍成（1982—），男（侗），硕士研究生，研究方向：应用微生物。

*通信作者：杨劲松,副教授，研究方向：应用微生物、农产品加工及贮藏、食品生物技术。