致康胶囊对体内血栓形成的影响

李越，刘梦洁，刘静，解恩义，曹永孝（西安交通大学医学院药理学系，西安市 710061）

致康胶囊对体内血栓形成的影响

李越＊，刘梦洁，刘静，解恩义，曹永孝#（西安交通大学医学院药理学系，西安市 710061）

目的：研究致康胶囊对体内血栓形成的影响。方法：用角叉菜胶生理盐水溶液复制小鼠尾静脉血栓形成模型，用胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠脑血栓形成模型。结果：实验分为生理盐水、凝血酶和致康胶囊高、低剂量组。与生理盐水组比较，致康胶囊高、低剂量组的血栓发生率无显著差异；与生理盐水组比较，致康胶囊高、低剂量组小鼠死亡率无显著差异。结论：致康胶囊不增加体内血栓形成。

致康胶囊；血栓形成；小鼠

＊硕士研究生。研究方向：药理学。电话：029-82655140。E-mail：liyue.0105@spu.xjtu.edu.cn

#通讯作者：教授，博士。研究方向：新药药理评价。电话：029-82655140。E-mail：yxy@xjtu.edu.cn

致康胶囊由大黄、黄连、三七、白芷、阿胶、龙骨、白及、没药、海螵蛸、茜草、龙血竭、甘草、珍珠、冰片、淀粉组成，具有清热凉血、化瘀止血的功能，主要用于崩漏、呕血及便血等的治疗[1，2]。虽然临床上并未见其增加血栓形成的不良反应，但缺乏相关的实验资料。本实验用小鼠尾静脉血栓形成模型和小鼠脑血栓形成模型研究致康胶囊对体内血栓形成的影响，以为其提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

TGL-20B-C型高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；ALT04型分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

1.2 试药

致康胶囊（西安千禾有限责任公司，批号：20090615）；凝血酶冻干粉（长春国奥药业有限公司，批号：20071203）；Ⅰ型胶原蛋白（瑞典Wolsen公司，批号：G9879）；盐酸肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司，批号：090903）；角叉菜胶（美国Sigma公司）。

1.3 动物

ICR小鼠，♀♂兼用，体质量20～24 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供（实验动物使用许可证号：SYXK（陕）2007-003）。

2 方法与结果

2.1 致康胶囊对角叉菜胶引起小鼠尾静脉血栓形成的影响

♂小鼠48只，随机分为4组，即生理盐水、凝血酶（150 IU·kg-1）和致康胶囊高、低剂量（1.5、0.5 g·kg-1）组。生理盐水和致康胶囊高、低剂量组ig给药，每天1次，连续7 d；凝血酶组第5天尾iv给药。第6天，给各组小鼠腰背部sc 1%的角叉菜胶生理盐水溶液20 mL·kg-1[3]。观察注射角叉菜胶复制模型后72 h内各组小鼠血栓的情况，计算血栓发生率（发生血栓的鼠数/组内动物数×100%）。测量发生血栓鼠鼠尾形成血栓的长度，计算血栓长度占整个鼠尾的百分比。结果表明，生理盐水组的血栓发生率为50%，凝血酶组的血栓发生率高于生理盐水组（P＜0.05），而致康胶囊高、低剂量组的血栓发生率与生理盐水组比较无显著差异（P＞0.05）。凝血酶组形成的血栓长度及其与鼠尾长度的比值与生理盐水组比较有增高趋势，但无显著差异（P＞0.05），而致康胶囊高、低剂量组的血栓长度及其与鼠尾长度的比值与生理盐水组相当。致康胶囊对角叉菜胶血栓模型小鼠鼠尾血栓发生率的影响见表1；对小鼠血栓长度的影响见表2；对小鼠尾血栓长度与鼠尾长度比的影响见表3。

表1 致康胶囊对角叉菜胶血栓模型小鼠鼠尾血栓发生率的影响Tab 1 Effect of Zhikang capsule on the formation rate of caudal venous thrombosis model induced by carrageenan in mice

2.2 致康胶囊对胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠脑血栓形成的影响

表2 致康胶囊对角叉菜胶血栓模型小鼠血栓长度的影响（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Zhikang capsule on the length of thrombosis in thrombosis model mice induced by carrageenan（±s，n＝12）

表2 致康胶囊对角叉菜胶血栓模型小鼠血栓长度的影响（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Zhikang capsule on the length of thrombosis in thrombosis model mice induced by carrageenan（±s，n＝12）

组别生理盐水组凝血酶组致康胶囊高剂量组致康胶囊低剂量组尾长/cm 8.6±0.4 8.6±0.4 8.3±0.5 8.6±0.5复制模型后不同时间体内血栓长度/cm 20 h 0.9±0.6 1.2±0.8 0.8±0.3 0.9±0.3 24 h 1.3±0.8 1.5±0.7 0.9±0.2 1.4±0.7 40 h 1.4±0.6 1.7±0.6 1.3±0.5 1.5±0.6 48 h 1.5±0.7 1.8±0.6 1.6±0.7 1.6±0.4 72 h 1.5±0.6 1.7±0.5 1.3±0.6 1.2±0.4

表3 致康胶囊对角叉菜胶小鼠血栓模型小鼠尾血栓长度与鼠尾长度比的影响（±s，n＝12）Tab 3 Effect of Zhikang capsule on the length ratio of thrombosis to tail in thrombosis model mice induced by carrageena（±s，n＝12）

表3 致康胶囊对角叉菜胶小鼠血栓模型小鼠尾血栓长度与鼠尾长度比的影响（±s，n＝12）Tab 3 Effect of Zhikang capsule on the length ratio of thrombosis to tail in thrombosis model mice induced by carrageena（±s，n＝12）

组别生理盐水组凝血酶组致康胶囊高剂量组致康胶囊低剂量组尾长/cm 8.6±0.4 8.6±0.4 8.3±0.5 8.6±0.5造模后不同时间鼠尾血栓长度与鼠尾长比值/%20 h 10.7±6.5 13.8±8.6 9.6±3.0 10.2±3.2 24 h 14.7±8.4 17.8±8.2 10.8±2.6 16.4±8.6 40 h 16.4±7.7 19.8±7.8 15.9±5.9 16.9±7.7 48 h 17.1±9.0 21.0±7.2 18.6±8.0 18.8±5.0 72 h 17.9±6.6 19.4±6.1 15.6±6.5 14.9±5.7

2.2.1 脑血栓形成诱导剂制备：称取胶原蛋白60 mg，浸泡于10 mL生理盐水中过夜，8 000 r·min-1匀浆2 min后加生理盐水至40 mL，3 000 r·min-1离心10 min，取上清液。另取浓度为1 mg·mL-1的盐酸肾上腺素2支加入上述上清液中，加生理盐水至50 mL，备用。

2.2.2 分组、给药、指标测定：分组及给药同“2.1”项下方法操作。生理盐水和致康胶囊高、低剂量组ig给药，每天1次，连续7 d；凝血酶组第6天尾iv给药，150 IU·kg-1。末次给药30 min后每只大鼠尾iv血栓形成诱导剂（胶原蛋白480 μg、肾上腺素16 μg）[4]，20 s注射完，观察小鼠反应。1～15 min后可见小鼠四肢麻痹、瘫痪或死亡。15 min内四肢麻痹未恢复者为麻痹阳性。观察注入诱导剂后动物的麻痹、瘫痪或死亡数，以瘫痪或死亡率的百分率表示，计算药物对小鼠血栓形成的作用。各组麻痹、瘫痪的小鼠数及百分率之间无显著性差异。凝血酶组的死亡率显著高于生理盐水组（P＜0.05），而致康胶囊高、低剂量组的死亡率与生理盐水组比较无显著差异（P＞0.05）。致康胶囊对胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠脑血栓形成的影响见表4。

表4 致康胶囊对胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠脑血栓形成的影响Tab 4 Effect of Zhikang capsule on the formation of cerebral thrombosis in mice induced by collagen-adrenaline

3 讨论

致康胶囊具有清热凉血、化瘀止血的功能，主要用于崩漏、呕血及便血等的治疗。致康胶囊治疗Ⅰ、Ⅱ度内痔出血效果满意[5]。其联合蒙脱石散剂治疗42例上消化道出血，能明显缩短呕血停止时间和大便潜血转阴时间[2]。治疗人工流产术后500例，能缩短阴道出血时间、减少出血量、减轻腹痛、防止感染以及促进月经周期恢复[6]；对放置宫内节育器后引起的阴道出血、药物流产后出血和有良好的治疗效果[1，3，7]。致康胶囊治疗宫颈糜烂后阴道出血疗效显著[8]；对肾挫裂伤有迅速止血和明显促进愈合作用[9]；对应激性溃疡出血、急诊创伤出血有明显的止血作用[1，10]。

促进血栓形成是止血药首先应考虑的不良反应，临床上虽然未见致康胶囊促进血栓形成的报道，但仍缺乏实验依据。本实验也在正常小鼠腰背部sc角又菜胶溶液，小鼠尾尖出现暗红色血栓形成区，逐渐向尾根部扩大到一定范围，48～72 h后，经紫色变为黑色，与正常尾部分界明显，可根据尾部皮肤颜色判定血栓出现率和平均长度。随后血栓形成区逐渐萎缩，最终自行脱落。本研究表明，凝血酶能增加角又菜胶致小鼠尾部血栓发生率，而致康胶囊对角又菜胶引起的小鼠尾部血栓形成无明显影响。尾iv血栓形成诱导剂后，脑内形成血栓后引起小鼠瘫痪或死亡。凝血酶能增加血栓诱导剂导致的小鼠脑（心）血栓形成，提高死亡率，而致康胶囊对诱导剂导致的小鼠脑（心）血栓形成及死亡无明显影响。本研究表明，致康胶囊对小鼠尾静脉血栓形成模型和小鼠脑血栓形成模型并未见明显影响。致康胶囊每粒0.3 g，人口服1次2～4 g，1日3次，按60 kg体质量计算，平均日剂量0.045 g·kg-1。本研究所用致康胶囊的剂量0.5～1.5 g·kg-1，是人剂量的11～33倍，因此推测致康胶囊不会促进人体内的血栓形成。

药理学研究表明，致康胶囊的止血功能主要是刺激局部血管收缩，显著减少出血量；缩短血浆复钙时间和凝血酶原时间，延长优球蛋白溶解时间；促进组织修复，升高创面中血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、纤维连接蛋白的含量。能增加血小板的数量，但血小板的数量仍在正常值范围内。致康胶囊有活血化瘀作用。由于在出血情况下，机体正在调动全身的凝血系统，在致康胶囊的促进下，使凝血系统发挥作用，产生止血作用。体内的凝血系统和抗凝系统处在动态平衡中，在出血的情况下，凝血系统的功能倾向于加强，而抗凝系统的功能倾向于减弱，此时致康胶囊容易产生促进凝血止血作用；而当体内的凝血功能增强，倾向于形成血栓时，体内的凝血系统功能必然受到抑制，而致康胶囊的促进凝血作用不易发挥，因而很难形成血栓。

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Effect of Zhikang Capsules on Thrombosis in Vivo

LI Yue，LIU Meng-jie，LIU Jing，XIE En-yi，CAO Yong-xiao（Dept.of Pharmacology，College of Medicine，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061，China）

OBJECTIVE：To study the effect of Zhikang capsules on thrombosis in vivo.METHODS：The mice caudal venous thrombosis model and cerebral thrombosis model were induced by carrageenan normal saline solution and collagen-adrenalin，respectively.RESULTS：Model mice were divided into NS group，thrombin group and Zhikang caupsule high-do-se and low-dose groups.Compared with NS group，the incidence of mice caudal venous thrombosis in Zhikang capsules high-dose and low-dose groups was not significant difference.Compared with NS group，mortality of model mice in Zhikang capsule high-dose and low-dose groups was not significant difference.CONCLUSION：Zhikang capsule doesn’t induce thrombosis in vivo.

Zhikang capsule；Formation of thrombosis；Mice

R285.5；R97

A

1001-0408（2010）39-3675-03

2009-11-17

2010-03-18）