高效液相色谱法测定红花龙胶囊中蜕皮甾酮的含量

周钢 李维义

红花龙胶囊根据中医理论结合强直性脊柱炎的临床症状由:红花、地龙、牛膝、黄芪、附子、五加皮、巴戟天、甘草、白花蛇、羌活、独活、川芎等十多味中草药经醇提和水煎等方法而组成的复方胶囊制剂。红花龙胶囊具有:益气补肾、活血通络、温经止痛的功效，经临床部分应用，对强直性脊柱炎有确切的临床疗效。为保障制剂质量对红花龙胶囊中牛膝的有效成分蜕皮甾酮用高效液相色谱法测定含量以控制产品质量。

1 仪器与试药

日本Jasco UV-975型高效液相色谱仪，色谱工作站(日本)。中药材采购于GMP生产企业，其中中药饮片牛膝经兰州大学药学院生药教研室鉴定为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata BL的干燥根。甲醇为色谱纯，无水乙醇、正丁醇为分析纯试剂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Bondapak TMC18色谱柱(3.9 mm×300 mm，8 ～10 μm)沃特世公司，流动相:甲醇-水(45:35);流速:0.8 ml/min，柱温为室温，检测波长243 nm，检测灵敏度0.08AUFS，理论塔板数以蜕皮甾酮(C27H44O7)计不低于4800，此条件下，样品中蜕皮甾酮与相邻成分达基线分离，且对阴性对照无干扰。

2.2 对照品溶液的配制取于105℃下干燥至恒重的对照品蜕皮甾酮约5.5 mg，用水饱和的正丁醇定量转溶于5 ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 ml置于10 ml量瓶中，加水饱和的正丁醇稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液(0.11 mg/ml)。

2.3 供试品溶液的配制 精密秤取红花龙胶囊内容物5 g(相当于10粒量)置100 ml索氏提取器中，加无水乙醇60 ml，回流提取16 h，回收乙醇，蒸干，加蒸馏水10 ml微温溶解。滤入分液漏斗中，以10 ml微温蒸馏水分次洗涤仪器和残渣。用水饱和的正丁醇每次10 ml洗涤，共5次提取，合并提取液，回收提取液。定量转入10 ml容量瓶中，以水饱和的正丁醇稀释至刻度作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 分别吸取对照品溶液6，9，12，15和20 μl，注入高效液相色谱仪测定，将所测得的蜕皮甾酮峰面积与进样量(μg)进行回归，得方程У=147696.4X-16935.8，r=0.9997(n=5)，结果表明蜕皮甾酮进样量在0.66～2.2 μg线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密量取蜕皮甾酮对照品溶液(0.11 mg/ml)5 μl，连续进样5次，测得蜕皮甾酮峰面积平均值为2378915，RSD 1.5%，表明进样精密度良好。

2.6 重线性试验 取同一批号样品5份，分别制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定蜕皮甾酮含量，5份平均值为每粒0.92 mg，RSD 2.9%。

2.7 稳定性试验 取同一批号供试品溶液5 μl，分别于0，2，4，8 和 12 h 进样测定，其峰面积均值为 1569645，RSD 1.5%，结果表明供试品溶液中蜕皮甾酮至少在12 h内稳定。2.8 回收率试验 精密秤取已知含量的红花龙胶囊6份，分别精密加入一定的蜕皮甾酮对照品，按样品测定法进行测定。结果见表1。

表1 红花龙胶囊中蜕皮甾酮加样回收率测定(n=6)

2.9 样品测定 取供试品溶液和对照品溶液各5 μl，注入高效液相色谱仪，测定，按外标法计算3批样品结果分别为每粒 0.89 mg，1.02 mg，1.13 mg。

3 讨论

3.1 牛膝在红花龙胶囊组成中所占份额是比较小的量(平均0.92 mg/粒)，以此微量的蜕皮甾酮检测作为产品质量的控制标准更有利于监控红花龙胶囊的质量。

3.2 在制备供试品溶液时由于耗时过长(16 h)，因此，必须控制好水浴温度和索氏提取器的密闭性，以防止意外事故的发生。

3.3 红花龙胶囊(红花、地龙、附子、牛膝、五加皮、黄芪、巴戟天、甘草、白花蛇、羌活、独活、川芎等十多味中草药组成)治疗AS获得了较好的疗效。现代药理研究表明:黄芪、巴戟天、五加皮等增强免疫作用［1］，红花、牛膝、白花蛇等有镇痛作用［2、3、4］。红花龙胶囊具有:益气补肾、活血通络、温经止痛的功效。

［1］乔智胜.巴戟天对小鼠胸腺萎缩的影响.中西医结合杂志，1991，11(7):415.

［2］刘爱静.五加皮提取物对小鼠血清抗体的研究.中成药研究，1985，7(4):41.

［3］黄正良.红花黄色素的镇痛和镇静研究.中草药，1984，15(8):34..

［4］史玉芬.牛膝注射液对巴豆油引起的小鼠耳肿的抑制作用.中国中药杂志，1988，13(7):44.