慢性肺源性心脏病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表达与临床研究

高 鹏,李 立,张丽娜

(长春市中心医院干部一疗区,吉林长春 130051;2.吉林大学第三医院呼吸内科;3.长春市中心医院消化内科)

慢性肺源性心脏病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表达与临床研究

高 鹏1,李 立2*,张丽娜3

(长春市中心医院干部一疗区,吉林长春 130051;2.吉林大学第三医院呼吸内科;3.长春市中心医院消化内科)

*通讯作者

有资料显示,在肺心病死亡患者的尸检中约有89.8%的病例存在着肺细小动脉原位血栓形成[1]。表明肺心病患者存在出血、凝血和纤溶功能变化,易致血栓形成。进一步研究发现肺心病患者血小板表面CD61、CD62p表达增强,体内存在血小板活化,这可能是导致血栓形成的一个主要原因,故测定血小板表面CD61、CD62p表达对判断肺心病病人的病情和预后有一定的意义。

本研究收集长春市中心医院呼吸内科2006年10月至2007年2月间住院的肺心病急性发作患者30例作为研究组,同时收集10例同期健康人作为对照组,采用流式细胞仪测定CD61、CD62p阳性血小板百分率,旨在探讨肺心病病人是否存在血小板活化及血小板活化在肺心病发生发展中的作用,为临床治疗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 病例资料

2006年10月至2007年2月间于长春市中心医院呼吸科住院的肺心病急性发作病人30例,男性16例,女性14例,年龄范围 55至71岁,平均年龄62.25岁。临床诊断符合1977年全国第二次肺心病专业会议制定的诊断标准。正常对照组10例健康人,男性7例,女性3例,年龄范围 56至 72岁,平均年龄62.63岁。所有观察者均无慢性肝肾疾病,糖尿病,心脑血管及血液系统疾病,未使用阿斯匹林、潘生丁、肝素等影响血小板功能的药物。

1.2 试剂与仪器

Beckman-Coulter公司生产的EPICS ELITE型流式细胞仪;北京离心机厂生产LDZ-5-2型自动平衡离心机;日本三洋MPR-510型试剂冷藏柜。

异硫氢酸荧光素(FITC)标记的抗CD61单克隆抗体及藻红蛋白(PE)标记的抗CD62p单克隆抗体(Beckman-Coulter公司);PBS缓冲液(本室自配)。

1.3 统计学方法

采用均数±标准差,组间比较采用t检验。

2 结果

见表1。

表1 两组CD61、CD62p阳性血小板百分率

3 讨论

血小板活化释放出多种分子标志物,CD61、CD62p是最具特异的血小板活化分子标志物。CD61是相对分子质量为14.5万、介导细胞与细胞、细胞与基质相互作用的表面糖蛋白,静息及活化血小板表面均有大量GPⅡb/Ⅲa分子表达,当强烈的激活剂刺激血小板活化时,以隐蔽状态分布的GPⅡb/Ⅲa也表达在血小板表面[2]。CD62p是血管粘附分子家族中的一员,主要储存在血小板α颗粒及中等以上大血管内皮细胞的Weiber-Palade小体内,当血小板和血管内皮细胞受到凝血酶、组胺、TNF-α、缺氧、氧自由基等刺激后,α颗粒和Weiber-Palade小体质膜迅速与细胞膜融合,几秒至几分钟内CD62p在细胞表面表达达到高峰[3,4,5]。CD62p是血小板活化最特异的分子标志,其表达强度在活化和非活化血小板之间差别最明显[6],因此是目前最常用的血小板活化标志物。本实验结果显示30例肺心病患者CD61、CD62p阳性血小板分别为87.34±4.62,44.23±7.28,对照组为83.25±3.20,32.17±6.97,实验组较对照组升高,与国外多个学者研究结果一致,证实肺心病患者外周血小板CD61、CD62p表达水平高于正常人,体内存在血小板活化。

目前研究发现,肺心病病人血小板活化通过以下机制参与肺动脉高压的形成:(1)血小板活化,CD62p表达增加,而CD62p介导血小板、白细胞与内皮细胞的粘附,使肺小血管血液粘滞度增加,血液呈现为高凝状态,促进肺动脉高压及肺细小动脉原位血栓形成;(2)血小板活化后可释放 PAF、TXA2、5-HT等生物活性物质,造成肺血管痉挛(TXA2为目前发现的最强烈的缩血管物质之一),肺循环阻力增加。血小板活化同时释放ADP等活化血小板物质,进一步放大ADP及其它血小板激动剂的活化作用[7];(3)血小板活化后,其膜上CD61表达增强,通过纤维蛋白原的“桥链”连接作用形成血小板与血小板的聚集,最终形成血栓[8],造成肺循环阻力增加;(4)细菌毒素释放入血,损伤血管内皮细胞,由于炎症因子促使EC和血小板CD62p表达增强,并介导血小板与内皮细胞间的粘附。

总之,肺心病病人血小板表面CD61、CD62p表达增强,血小板存在活化,且血小板活化参与肺心病的形成,这与临床上使用抗血小板药物有效抑制活化血小板、缓解肺动脉高压、减少并发症、改善预后的治疗提供了理论依据。

[1]王 辰,杜敏捷.慢性肺源性心脏病急性发作期肺细小动脉血栓形成的研究[J].中华医学杂志,1997,77:123.

[2]Pierschke EIB,Grant RA.Correlats betweet fibrinogen bingding to human platelets and platelets aggregability[J].Blood,1981,55:841.

[3]周 同,董德长.细胞粘附分子研究进展[J].上海免疫学杂志,1995,15(1):58.

[4]Wagner DD.P-selectin chases a butterfly[J].J Clin Invest,1995,95(5):1955.

[5]Barkalow FJ,Barkalow KL,Mayadas TN,et al.Dimerization of P-selectin in platelets and endothelial cells[J].Blood,2000,96(9):3070.

[6]MetzelaarMJ,Heijnen HF,Six ma JJ,et al.Identification of a 33-Kd protein associated with the alpha-granule membrane(GMP-33)that is expressed on the surface of activated platelets[J].Blood,1992,79(2):372.

[7]Moritz MW,Reimers RC,Baker RK,et al.Role of cytoplas mic and releasable ADP in platelet aggregation induced by laminar shear stress[J].J Lab Clin Med,1983,101:537.

[8]Peerschke EIB.Recognition of platelet associated fibrinogen by polyclonal antibodies:correlation with platelet aggregation[J].Blood,1992,79:2082.

1007-4287(2010)06-0905-02

2009-04-26)