汉防己甲素抑制肺癌A549细胞生长的研究

韦熹苑 裴刚 林艺红 丁扬洲 唐鑫 张军

汉防己(Stephania tetrandra S.Moore)根所含汉防己甲素有抗炎、镇痛作用［1］，临床主要用于心律失常、肺纤维化等疾病［2］。肺癌在我国大中城市的发病率及死亡率均居癌症首位。有报道汉防己甲素可逆转GLC-82/ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药作用［3］。本实验研究汉防己甲素对肺癌A549细胞生长抑制作用，探讨其治疗肺癌的可能性。

1 材料

1.1 仪器 CO2培养箱;倒置相差显微镜;酶联免疫检测仪。

1.2 试药与细胞 MTT(鹏程生物公司生产);小牛血清(杭州四季清公司生产);细胞株购于中南大学。

2 方法

2.1 汉防己甲素溶液的配制 按文献制备汉防己甲素后［4］，精密称取适量，DMS0溶解，无血清培养液稀释，得1.25～80 ug/ml的样品溶液，4℃冰箱中保存备用。

2.2 细胞增殖抑制实验 在37℃，5%CO2的环境下，以10%小牛血清的高糖培养液和0.25%的胰酶消化传代，选用生长对数期的细胞做实验用。将细胞的浓度稀释至5×104个/ml加入96孔计数板，置入培养箱培养4 h后，吸出孔内培养液后，每孔加入200 μl不同浓度的汉防己甲素液，再培养箱中培养48 h后，吸出汉防己甲素液，加入80 μl高糖液和20 μl MTT液，再培养箱内孵育，4 h后，将MTT液弃去，PBS清洗一次，每孔加入150 μl DMSO，振摇10 min，酶标仪于492 nm处测定吸光值。实验重复3次;计算细胞抑制率，以抑制率 ＞50%为有效［5］。SPSS软件进行处理。并采用Bliss法，求算IC50值。

3 结果

在1.25～20 μg/ml浓度范围内，汉防己甲素对A549细胞的抑制率分别 11.6%、30.54%、54.94%、76.15%、98.27%，浓度大于20 μg/ml后，抑制率趋于平稳。其IC50的值为 7.66 μg/ml。

4 讨论

A549细胞系肺癌细胞是从肺癌患者癌组织中分离出来的非常小细胞肺癌细胞系，与患者体内的癌细胞具有基本相似的生物学特性。据文献报道，汉防己甲素对肝癌、白血病以及卵巢癌等均有抑制作用，但对于肺癌方面的报道较少［6］。本次结果表明汉防己甲素具有抗肺癌A549细胞生长抑制作用，这位其治疗肺癌提供了一定参考，但其作用机制还需进一步研究。

［1］Kwan CY，Achike FL．Tetrandrine and related bisbenzylisoquino-line a1kaloids from medicinal herbs:cardiovascular effects and mechanisms of action．Acta Pharmacol Sin，2002，23(12):1057．

［2］Chen L，Li Q Y，Yang Y，et al．Inhibitory effects of tetrandrine on the Na(+)channel of human atrial fibrillation myocardium．Acta Pharmacol Sin，2009，30(2):166-174．

［3］徐萌，周蓓．汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药和凋亡抗性的实验研究．新中医，2006，38(6):90-91．

［4］冀春茹，王浴铭，刘延泽，等．中药化学实验技术与实验．河南科技出版社，1986，237．

［5］吴舟锋．肿瘤化疗药物敏感性试验．国外医学:外科学分册，1988，25(3):153-155．

［6］Ng LT，Chiang LC，Lin YT．Antiproliterative and apoptotic effects ofetrandrine 0n different human hepatoma cell lines．Am J Chinese Med，2006，34(1):125．