白东义,韩 慧,佟春玲,巴音吉日嘎拉
(内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古 呼和浩特 010018)
葛根素为葛根中提取的一种异黄酮类化合物,具有扩张冠脉和脑血管、降低心肌耗氧量、改善心肌收缩功能、促进血液循环等作用。在临床上现已广泛使用,近几年有许多葛根素具有雌激素样作用的报道,但还没有得到充分的依据。因此,为了证实葛根素是否有雌激素样作用,设计了本试验,为以后在临床上应用提供科学依据。
1.1 实验动物 50只清洁级纯系昆明种21日龄雌性小鼠,体重9~12 g,由内蒙古大学实验动物研究中心提供(许可证号:SCXK(蒙2002-0001))。
1.2 试验药物 葛根素粉剂由陕西省安康市禾烨生物工程有限公司提供,批号为 050703、纯度为99.70%;己烯雌酚片剂由上海信谊康捷药业有限公司提供,批号为050301;黄体酮注射液由浙江仙琚制药股份有限公司提供,批号为050203;血清孕酮放免试剂盒(P(HY-021)RIA KIT);人血清雌二醇放免试剂盒(E2-17β(HY-022)RIA KIT);人胎盘催乳素放免试剂盒(HPL(HY-024)RIA KIT);人血清生长激素放免试剂盒(HGH(HY-026)RIA KIT);药盒厂家:北京华英生物技术研究所。
1.3 仪器 金诺 TD5002电子天平(产品编号:53474,余姚市金诺天平仪器有限公司),日本OLYMPUS电子读数分析天平,普通手术器械,各种型号注射器等。
1.4 双侧卵巢摘除小鼠模型的建立 取小鼠40只,施摘除卵巢术,切除卵巢,然后逐层缝合、消毒,做术后护理[1]。
1.5 实验动物分组情况 将双侧卵巢摘除小鼠正常饲养1周后,按体重随机分为4组。即阴性对照组、试验组(葛根素组)、阳性对照组Ⅰ(己烯雌酚组)和阳性对照组Ⅱ(DSP+P混合组),另设正常对照组,每组10只,共50只小鼠。
1.6 给药方法 正常对照组和阴性对照组蒸馏水灌胃;试验组葛根素水溶液(10 mg/mL)灌胃;阳性对照组I己烯雌酚悬浮液(20μg/mL)灌胃;阳性对照组Ⅱ己烯雌酚悬浮液(20μg/mL)和黄体酮注射液(20 mg/mL)混合灌胃。隔日给药1次,各组每次每只0.1mL,连续给药3周。
1.7 检测方法及指标 给药结束后将各组小鼠眼球静脉丛采血致死,分离血清,在-4℃冰箱内保存片刻后冷冻,然后采用放射免疫分析法测定小鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、生长激素(GH)、催乳素(PRL)的含量。
2.1 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中E2含量的影响由表1可见,阴性对照组与正常组比较,摘除卵巢后小鼠血清雌二醇含量显著降低,差异显著(P<0.05);阴性对照组与两个阳性对照组比较,血清雌二醇含量差异不显著(P>0.05);葛根素组与阴性对照组、阳性对照组之间亦均无显著差异(P>0.05)。
表1 葛根素对卵巢摘除小鼠血清中雌二醇(E2)含量的影响 (单位:p g/mL)
2.2 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中孕酮(P)含量的影响 由表2可见,正常对照组与摘除卵巢的阴性对照组比较,摘除卵巢后血清孕酮含量降低,有显著差异(P<0.05)。葛根素组、己烯雌酚组、DSP+P混合组,均能提高血清孕酮含量,与阴性对照组比较差异显著(P<0.05),与正常组比较差异不显著(P>0.05),提示葛根素、己烯雌酚及DSP+P均能提高血清孕酮含量,并使其恢复到正常水平。
表2 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中孕酮(P)含量的比较 (单位:n g/mL)
2.3 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中生长激素(GH)含量的影响 由下表可见,正常对照组与阴性对照组血清生长激素含量比较,摘除卵巢后小鼠血清生长激素含量升高,差异显著(P<0.05)。葛根素组、己烯雌酚组、DSP+P组,均能显著的降低血清生长激素含量,与阴性对照组比较差异显著(P<0.05),与正常组比较差异不显著,即葛根素、己烯雌酚、DSP+P均能显著抑制卵巢摘除所引起的血清生长激素含量过高,并使其恢复到正常水平。
表3 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中生长激素(GH)含量的影响 (单位:n g/mL)
2.4 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中催乳素(PRL)含量的影响 由表4可见,正常对照组与阴性对照组比较,摘除卵巢后小鼠血清催乳素含量无显著变化,差异不显著(P>0.05)。葛根素、己烯雌酚、DSP+P对血清催乳素含量均无明显影响。
表4 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中催乳素(PRL)含量的影响 (单位:μg/mL)
雌激素主要由卵巢合成和分泌。本试验中,摘除卵巢后阴性对照组小鼠血清雌二醇含量比正常对照组降低,差异显著(P<0.05),这表明建立的动物模型成立。事实证明,在动物体内类固醇激素在靶细胞上的作用部位主要是细胞质和细胞核,只有对某种激素敏感的细胞才具有积聚这种激素的能力[2]。DES是非类固醇合成雌激素,但是具有和类固醇雌激素同样的生物学效能的化学合成药品,所以它对靶器官的作用非常明显。本试验中,摘除卵巢后小鼠血清中雌二醇含量显著降低,说明血清中雌二醇含量水平与卵巢的功能密切相关。葛根素对摘除卵巢小鼠血清雌二醇含量无明显影响,说明葛根素虽然有雌激素样作用,但不能取代卵巢的功能而保证机体内雌二醇的正常水平。
体内的孕激素对动物正常性机能的维持具有决定性作用,外源性孕激素则可以调节正常的和紊乱的性机能。本试验结果显示,摘除卵巢后,血清P含量明显下降,与正常组相比差异显著(P<0.05)。摘除卵巢后,使用DES和DES+P的两个阳性对照组小鼠的血清P含量均提高到正常对照组的水平。其中DES+P组小鼠血清P含量最高。表明使用的外源性P对血清 P水平的提高有一定的作用。研究证实[3],外源性孕酮在母马外周血桨中消失极快。因此,内源性血清P含量可能是由外源性激素刺激所致。由此认为,葛根素有效地升高了卵巢摘除鼠血清中孕酮的含量,其作用机理可能是通过刺激肾上腺皮质代偿性分泌孕酮。
生长激素(GH)是一种由垂体前叶分泌,调节脊椎动物生长发育的重要多肽类激素。试验证明,如若长期服用雌激素,血清GH基础水平升高而生长激素介质(SM)降低。若一次大剂量投药,3 h内,SM降低50%,同时GH升高[4]。雌激素所致上述两种变化的关系尚不清楚。但本次试验结果和以上的试验结果不同,摘除卵巢后小鼠血清雌二醇水平明显降低,而生长激素水平显著升高(P<0.05)。这是因为卵巢有调节多种激素之间复杂关系的重要作用,摘除卵巢后可能雌激素和生长激素的正相关关系被破坏所致。DES和DES+P两个阳性对照组小鼠血清GH含量均降低到正常对照组的水平,无差异(P>0.05)。葛根素组小鼠的血清GH含量与正常对照组和两个阳性对照组的差异不显著(P>0.05)。葛根素对GH的分泌调节的作用存在两种可能性:(1)雌激素和孕激素有协同情况下,葛根素能提高GH分泌。(2)机体失去雌激素和孕激素的协同情况下,葛根素能抑制GH分泌。
催乳素(PRL)是垂体前叶分泌的一种重要的单纯蛋白质生殖激素,而且与机体其他系统的功能也具有密切关系。本研究结果显示,对照组与使用DES、DES+P和葛根素的3组之间血清PRL含量差异不显著(P>0.05),其中DES+P组的血清PRL含量稍低。总之,葛根素、DES和DES+P对摘除卵巢小鼠的血清PRL含量无显著影响,证明卵巢摘除和外源性激素对其含量无显著影响。
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