中药复方对气分证家兔体温及血清抗氧化指标的影响

王自力,赵诗洁,陈忠琼,涂建国,吴利娟,魏学良,李树明,田茂春

(西南大学动物科技学院,重庆 北碚 400715)

“卫气营血辨证”由清代温病医家叶天士创立,认为气分证是温热病的防治关键。白虎汤是防治气分证的经典方之一,具有祛除邪气,恢复正气功效。通过制作家兔气分证模型,利用白虎汤构建中药复方进行防治,观测家兔体温、临床症状和血清抗氧化指标的变化,为研制防治动物气分证的中兽药提供理论和试验依据。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 健康新西兰家兔21只,体重1.1～1.8 kg,雌雄不拘,购自重庆市金秋兔业有限公司。随机分为对照组、模型组、中药组,每组 7只。

1.2 药品及仪器

1.2.1 中药复方注射剂制作 生石膏50 g、知母24 g、大黄 20 g、金银花 20 g 、生甘草 5 g,购自重庆市北碚区全兴大药房。按文献[1]制作中药注射剂,即经浸泡、水煎、醇提后,再经 126℃、0.14 MPa高压灭菌30 min后4℃保存备用。

1.2.2 试剂及药品 大肠杆菌内毒素(L-2880),购自Sigma公司;超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(批号20090323)、丙二醛(MDA)测试盒(批号20090323)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(批号20081127)测试盒,均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2.3 仪器设备 离心机(TGL-16G型、上海安亭科学仪器厂)、可见紫外分光光度计(22pco4160型、上海棱光技术有限公司)、酸度计(PHS-3C型、成都世纪方舟科技有限公司)。

1.3 处理方法 家兔正常饲养3 d后,测量肛温3次,取平均值为基础体温。用无菌生理盐水将内毒素配制成浓度为15μg/mL溶液,-20℃保存备用。注射前37℃水浴20 min后,按0.5mL/kg体重经耳缘静脉注射。对照组注入0.5/kg体重无菌生理盐水作为对照。攻毒前2 h和攻毒后,中药组家兔按照1.5mL/kg体重经腹腔注射中药注射液,对照组和模型组分别给予相同剂量无菌生理盐水。

1.4 测定指标 于注射内毒素后0.5、1、1.5、2 h和2.5 h时测量肛温,2.5 h后心脏采血,3000 r/min离心10 min分离血清,-20℃保存备测;血清SOD、MDA、GSH-Px含量测定参照说明书。

1.5 数据统计方法 采用SPSS11.5软件进行单因素方差分析。

2 结果

2.1 气分证家兔症状变化 对照组:体温正常,精神状态良好,呼吸和心跳均保持正常,被毛顺滑,结膜无充血,剖检观察心、肝、脾、肺、肾、肠道组织等脏器均正常,未见充血和出血斑点,皮下、腰大肌未见出血。

模型组:注射内毒素0.5 h后体温开始上升,出现被毛杂乱,倦怠蜷缩,至2 h左右,结膜充血;呼吸急促,心率加快,饮水增加;口色鲜红;耳廓血管充血扩张,2.5 h后剖检观察见心、肝、脾、肺、肾等脏器充血,但未见出血斑点,皮下、腰大肌未见明显出血。

中药组:注射内毒素0.5 h后体温升高,注射中药注射剂后蜷缩耸毛;呼吸心率加快;体温升高;饮水增多,结膜充血等症状减轻,至2.5 h时恢复到正常水平。剖检观察心、肝、脾、肺、肾等脏器无充血或有少数充血,均未见出血斑点,皮下、腰大肌无出血。

2.2 气分证家兔体温的变化 见表1。

表1 家兔体温变化 (n=7) (℃)

由表1可知,各组基础体温无差异。0.5 h和1 h时,中药组和模型组家兔体温均显著或极显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),且两组间无显著差异;1.5 h时,模型组和中药组体温开始下降,且与对照组无显著差异(P＞0.05);2 h时,中药组家兔体温极显著低于对照组(P＜0.01),且与模型组无差异;2.5 h时,模型组家兔体温显著高于对照组(P＜0.05),且中药组家兔体温均极显著高于对照组和模型组(P＜0.01)。

2.3 血清抗氧化指标含量的变化 见表2。

表2 家兔血清抗氧化指标含量变化(n=7)

由表2可知,中药组家兔血清SOD水平显著高于对照组(P＜0.05),且极显著高于模型组(P＜0.01);模型组家兔血清MDA水平显著高于对照组(P＜0.05),而中药组极显著低于模型组(P＜0.01)且与对照组无显著差异;中药组家兔血清GSH-Px水平显著低于对照组(P＜0.05),但模型组与对照组、中药组均无统计学差异。

3 分析与讨论

3.1 中药复方对气分证家兔临床症状及体温的影响 温病气分阶段的特点是邪气虽盛而正气亦强,正邪交争激烈。模型组家兔临床症状、剖检结果和体温变化表明,家兔处于气分证而未进入营血分证,说明家兔气分证模型制作成功。研究表明,内毒素可破坏血小板和红细胞,损伤毛细血管壁,导致失水液酸碱平衡紊乱,引起内脏器官不同程度损伤[2],常用于动物气分证模型的制作[3]。

按照“到气清气”[4]的治疗原则,采用辛苦寒凉类中药清解气分证。中药组上述症状较模型组轻,说明在攻毒前注射中药复方对病邪具有一定抵抗作用,且体内正邪斗争激烈使家兔一度产生体温升高、呼吸加快等症状;而经攻毒后注射中药复方,临床症状及体温等均恢复正常,说明中药复方具有解气分热之功效。研究表明,中药复方中的大黄可降低能量代谢减少产热使体温下降[5];石膏可抑制体温调节中枢的亢进而解热,并抑制发汗中枢[6],解热而不发汗,故无伤津之弊。

3.2 中药复方对气分证家兔血清SOD、MDA和GSH-Px水平的影响 气分证是正盛邪实,正邪相争激烈,阳热亢盛的里热证。中兽医学中“正气”既包括机体抗御致病因子(如内毒素等)的能力与物质(如SOD、GSH-Px、免疫学物质等)[7];且机体自由基的产生和清除保持动态平衡,若此平衡被破坏后可引起细胞损伤和疾病发生等连锁反应。

3.2.1 对血清SOD水平的影响 SOD是机体中的一种重金属酶,能清除超氧阴离子自由基,发挥抗炎功效,对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要作用。本研究表明,气分证家兔血清SOD含量保持在正常水平,说明模型组家兔机体内氧自由基的产生和清除处于平衡状态,符合气分证时机体内邪气盛,而正气亦强的特点,进一步说明家兔气分证模型的建立是成功的。中药组家兔治疗后血清SOD水平大幅上升,说明中药复方具有增强机体清除氧自由基能力,即增强机体正气和祛除邪气能力。现有研究表明:中药复方中大黄(主要为蒽醌类衍生物大黄素)具有良好的抗炎、清除氧自由基的抗氧化作用[8]。知母中的知母多糖对红细胞膜自氧化和H2O2所致的红细胞氧化溶血具有显著抑制作用而发挥抗氧化作用[9]。

3.2.2 对血清MDA水平的影响 MDA是脂质过氧化中产生的脂质过氧化产物,可引起黏膜损伤和激活补体系统,使巨噬细胞释放大量炎症介质产生一系列连锁损伤反应[10]。本研究表明,模型组家兔血清中MDA水平出现显著升高,而中药组MDA含量则保持正常水平,相关研究[11]也证实了本研究结果;研究表明气分证家兔体内存在氧自由基代谢紊乱,而经中药复方可维持机体氧自由基的产生和清除能力保持平衡。中药复方中的金银花具有抑菌抗病毒、解热抗炎、抗氧化、免疫调节等作用,可明显减轻肝脏病理损伤[12]。

3.2.3 对血清GSH-Px水平的影响 GSH-Px具有清除体内过氧化氢和许多有害的过氧化产物,阻断脂质过氧化连锁反应,具有保护细胞结构和功能完整的功效。本研究表明,模型组家兔血清GSHPx水平略低于对照组但无显著差异,说明气分证阶段家兔机体清除体内过氧化氢和有害过氧化物能力仍保持正常,体现气分证动物体内正气尚强的特点;而中药组GSH-Px的活性未出现增强作用,提示中药复方可能通过其他途径,如通过增强SOD等抗氧化酶,降低 MDA水平来发挥祛除邪气功效,与SOD协同辅助作用等因素[13]有关。

综上所述,中药复方对气分证家兔具有增强机体正气作用,如促使临床症状恢复正常,提高SOD水平、降低MDA水平达到增强机体抗氧化能力,其作用机制需进一步研究,以阐释气分证实质及中药调控机制。

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