减肥保健食品中非法添加盐酸西布曲明的检测

吴卫涛，李 亮

(河南省安阳市食品药品检验所，河南 安阳 455000)

近年来，保健食品中非法添加西药成分的现象十分严重，严重损害了消费者的身心健康和经济利益，甚至危及生命[1－2]。在减肥类保健食品中，非法添加盐酸西布曲明的现象十分普遍。盐酸西布曲明是一种中枢神经抑制剂，具有兴奋、抑食等作用，有可能引起血压升高、心率加快、厌食、失眠、肝功能异常等。西布曲明价格低廉，且确有一定的抑食减肥功效，因此屡被一些不法商家加入减肥保健食品中以牟取暴利。笔者采用液质联用技术，建立了盐酸西布曲明的筛选鉴定方法，为更好地打击不法行为提供了可靠的技术支撑。

1 仪器与试药

Agilent 6410 QQQ LC/MS型液质联用仪，配有电喷雾接口(ESI)，三重四级杆质量分析器，Mass Hanter Work station Date Acquisition工作站;Agilent 1200型高效液相色谱系统，包括四元输液泵，自动进样器，柱温箱;Mettler AE－240型电子天平。盐酸西布曲明对照品(批号为100624－200401，中国药品生物制品检定所);样品(均为市场抽检品);乙腈(色谱纯)，水(超纯水)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Zorbax Eclipse Plus C18柱(100 mm × 2.1 mm，3.5μm);流动相:0.02 mol/L醋酸铵－0.1%醋酸水溶液/乙腈(20∶80);流速:0.2 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。

2.2 质谱条件

电喷雾离子源(ESI);正离子模式;多重反应监测(MRM)扫描方式;喷雾针电压:4 kV;雾化器压力:30 psi;干燥气温度:350℃;干燥气压力:30 psi;碰撞气压力:2 mtorr;检测器电压:1.5 kV;扫描间隔时间:0.1 s。

2.3 溶液配制

取盐酸西布曲明对照品约25 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相适量，超声处理15 min使之溶解，放冷至室温，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。再精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取样品适量(约相当于一次服用量)研细，置50 mL量瓶中，加流动相适量，超声处理15 min使之溶解，放冷至室温，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液按上述对照品溶液的稀释方法稀释，即得样品溶液。

2.4 测定方法

取对照品溶液与样品溶液，用0.2μm微孔滤膜滤过，分别取10 μL注入液质联用仪，按LC－MS/MS测定条件分析。

2.5 质谱条件优化

取上述对照品溶液，选ESI正离子化模式，直接进样，优化质谱条件。首先，采用一级质谱的扫描方式可得到准分子离子峰[M+H]+为280.0，在确定准分子离子的基础上，优化碰撞诱导解离电压，得到最佳的碰撞诱导解离电压(fragmenator)，再用子离子扫描(product Ion)的方式，手动选择子离子及其最佳碰撞能量(collision energy，CE)，以最高丰度的子离子作为检测离子，使之具有较高的专属性和灵敏度。在样品测定中为防止干扰，可增加多个离子对进行筛选。结果见表1。

表1 盐酸西布曲明的质谱条件优化结果

2.6 检测限确定

取对照品溶液适量，用流动相逐步稀释，按上述液质联用条件测定。以 S/N=3计算出检测限(LOD)为0.03 ng。

2.7 样品测定结果

分析样品时，若样品色谱图中检出与盐酸西布曲明对照品保留时间一致的成分，则进行二级质谱全扫描验证，若样品的保留时间和特征离子及其产生的碎片离子均与对照品相同，则判断该样品中含有盐酸西布曲明。在抽取的110余批样品中，共有49批符合上述判断条件，可判定添加了盐酸西布曲明，检出率高达42.6%。色谱图见图1，质谱图见图2及图3。

图1 高效液相色谱图

图2 盐酸西布曲明对照品的MS/MS图

图3 样品中盐酸西布曲明成分的验证MS/MS图

3 讨论

本试验比较了下列流动相:甲醇－水－甲酸(70∶30∶0.2)[3]，不同比例的0.1%甲酸和甲醇[4]，不同比例的0.02 mol/L醋酸铵－0.1%醋酸水溶液 /乙腈。结果表明，采用0.02 mol/L醋酸铵－0.1%醋酸水溶液/乙腈(20∶80)时，盐酸西布曲明与样品中其他成分分离较好，出峰时间较短，故0.02 mol/L醋酸铵－0.1%醋酸水溶液/乙腈(20∶80)被选为流动相。

应该注意的问题是，对照品与样品质量浓度不要太高，否则残留严重，需要较长时间的冲洗;对所用样品、玻璃仪器与试剂等要防止交叉污染，以免造成假阳性结果。

[1]裴振峨，蔡皓东.西布曲明的不良反应及其防治 [J].药物不良反应杂志，2006，8(4):276 －279.

[2]曾 涛.常用减肥药物的不良反应[J].中国药师，2007，10(6):599－601.

[3]权伍英，栾 燕，张 欣.LC－MS/MS检测减肥保健品中的盐酸芬氟拉明和盐酸西布曲明[J].中国卫生检验杂志，2007，17(1):9－12.

[4]李 丹，文红梅，崔福春，等.LC－MS/MS法快速筛选保健食品中非法添加的11种减肥化学成分[J].中国药事，2009，23(4):335－338.