柴胡三参胶囊对实验性心律失常保护作用的研究1)

刘建和,胡熙苒,何少平,李 群,程 坤

柴胡三参胶囊是自制的治疗心律失常方剂。本研究从实验性致心律失常观察柴胡三参胶囊(CHSS)对大鼠室性心律失常的保护作用,以进一步探讨柴胡三参胶囊抗心律失常的作用机制。

1 材料与方法

1.1 药物 柴胡三参胶囊主要原料粉由湖南中医药大学第一附属医院制剂室提供,批号:681210;普萘洛尔由大同市卫华药业有限责任公司生产,国药准字:H14021703;普罗帕酮由山东仁和制药有限公司生产,国药准字号:H37020793;维拉帕米由石家庄科迪药业有限公司生产,国药准字:H13020858。

1.2 试剂 10%水合氯醛、氯仿、3.5%氯化钙溶液、0.005%乌头碱溶液。

1.3 动物 健康Wistar大鼠100只,清洁级,雌雄各半,体重200 g～320 g;昆明小鼠100只,雌雄各半,体重25 g～35 g。许可证号:SCXK(沪)2008-0016,由上海西普兰必凯实验动物公司提供。

1.4 仪器 生物信号采集系统(成都仪器厂RM-6280)、洁净工作台、电子天平、齿镊、棉签、注射器。

1.5 方法

1.5.1 氯仿致小鼠心律失常 选取健康KM小鼠100只,雌雄各半,体重28 g～30 g,按体重编号后,以随机数字表法完全随机分为5组,每组20只。分别为:模型对照组;柴胡三参胶囊小剂量组;柴胡三参胶囊中剂量组;柴胡三参胶囊大剂量组;普萘洛尔组。柴胡三参胶囊按成人推荐剂量4.8 g/d计算,折算成2次/日,每次2.4 g的1/2倍(小剂量)、等效剂量(中剂量)、2倍(大剂量)给药,普萘洛尔折算后给予7 mg/kg。模型对照组给予等量生理盐水灌胃,灌胃给药 2次/日,连续7 d。末次给药30 min,将小鼠置于倒扣的600 mL烧杯中,取氯仿2 mL滴于棉球上,让小鼠吸入氯仿直至呼吸停止(每测试1只小鼠,加1 mL氯仿)。立即取出小鼠,打开胸腔,肉眼观察小鼠心脏活动节律,记录各组小鼠产生室颤(VF)的动物数,对其结果进行统计分析检验。

1.5.2 氯化钙致大鼠心律失常 选取健康Wistar大鼠50只,雌雄各半,体重 200 g～320 g,按体重编号后,以随机数字表法完全随机分为5组,每组10只。分别为模型对照组;维拉帕米组;柴胡三参胶囊小剂量组;柴胡三参胶囊中剂量组;柴胡三参胶囊大剂量组。末次给药后30 min,用10%水合氯醛0.3 mL/kg腹腔麻醉,仰位固定。舌下静脉注入3.5%氯化钙溶液105mg/kg(10 s内推完),并记录心电图Ⅱ导联,以观察其心律失常情况。记录室早(VP)、室速(V T)、VF、死亡率及死亡(CA)时间并分析。

1.5.3 乌头碱致大鼠心律失常 选取健康Wistar大鼠50只,雌雄各半,体重250 g～320 g,按体重编号后,以随机数字表法完全随机分为5组,每组10只。分别为模型对照组;普罗帕酮组;柴胡三参胶囊小剂量组;柴胡三参胶囊中剂量组;柴胡三参胶囊大剂量组。末次给药后30min,用10%水合氯醛0.3 mL/kg腹腔麻醉,仰位固定。舌下静脉注入0.005%乌头碱溶液0.05 mg/kg(10 s内推完),并记录心电图Ⅱ导联,以观察其心律失常情况。记录 VP、V T、VF及 CA时间并分析。

1.6 统计学处理 采用SPSS 17.0软件分析。所有数据以均数±标准差(±s)表示,各组实验结果的差异性检验若符合正态性分布采用方差分析,组间比较用LSD法检验;若方差不齐采用Tamhane's T 2检验。

2 结 果

2.1 柴胡三参胶囊抗氯仿致小鼠室颤的作用 在氯仿致小鼠室颤的模型中,与模型对照组相比,柴胡三参胶囊小剂量组对小鼠室颤发生率有减少趋势,柴胡三参胶囊的中剂量与模型组相比有统计学意义(P＜0.05);而高剂量组减小VF发生时间率更低(P＜0.01);普萘洛尔组与模型对照组相比,有统计学意义(P＜0.01)。详见表 1。

表1 柴胡三参胶囊抗氯仿诱发室颤作用(±s)例(%)

表1 柴胡三参胶囊抗氯仿诱发室颤作用(±s)例(%)

组别 n 室颤模型对照组 20 18(90)CHSS小量组 20 14(70)CHSS中量组 20 12(60)1)CHSS大量组 20 10(50)2)普萘洛尔组 20 8(40)2)与模型对照组比较,1)P＜0.05,2)P＜0.01

2.2 柴胡三参胶囊对氯化钙致大鼠心律失常的作用 在氯化钙模型中,与模型组照组相比,柴胡三参胶囊小剂量组对缩短心律失常的时间有一定作用,但无统计学意义;柴胡三参胶囊中剂量有缩短心律失常的发生时间的趋势,对于各心律失常持续时间的缩短及死亡时间的延长均有较好作用,与模型组相比有统计学意义(P＜0.05);柴胡三参胶囊大剂量组对 VP、VT、VF及CA时间的延长均有明显作用,与模型对照组相比有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组相比,维拉帕米组对 VP、VT、VF的作用及CA时间的延长有统计学意义(P＜0.01);各组大鼠死亡率有降低趋势。详见表2。

表2 柴胡三参胶囊抗氯化钙诱发心律失常的作用(±s)

表2 柴胡三参胶囊抗氯化钙诱发心律失常的作用(±s)

组别 VP时间(s)VT时间(s)VF时间(s)CA(%)CA时间(s)模型对照组 39.68±11.47 44.79±8.32 53.36±12.80 90 172.60±17.54 CHSS小量组 32.99±9.83 40.92±7.30 46.98±9.54 80 194.20±15.26 CHSS中量组 28.96±7.881) 34.97±8.351) 40.10±10.761) 70 207.04±14.451)CHSS大量组 27.36±9.221) 33.74±9.001) 33.45±11.751) 60 241.68±41.241)维拉帕米组 27.86±9.671) 33.22±11.571) 36.07±10.691) 70 229.81±42.461)与模型对照组比较,1)P＜0.05

2.3 柴胡三参胶囊对乌头碱致大鼠心律失常的作用 在乌头碱模型中,与模型对照组相比,柴胡三参胶囊小剂量组对缩短心律失常的时间有一定作用,但无统计学意义;柴胡三参胶囊中剂量有缩短心律失常发生时间的趋势,对于VF持续时间的缩短较为明显,与模型对照组相比有统计学意义(P＜0.05);柴胡三参胶囊大剂量组对VP有较好作用,与模型对照组相比有统计学意义(P＜0.05),其对VT、VF、CA时间的延长有明显作用,与模型对照组相比有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组相比,普罗帕酮组对VP、VT、VF的作用及死亡时间的延长均有统计学意义(P＜0.05)。详见表3。

表3 柴胡三参胶囊抗乌头碱诱发心律失常的作用(±s)min

表3 柴胡三参胶囊抗乌头碱诱发心律失常的作用(±s)min

组别 VP时间 VT时间 VF时间 CA时间模型对照组 5.19±1.89 6.92±1.75 9.82±3.27 23.96±6.20 CHSS小量组 4.88±1.69 6.73±1.34 9.37±1.76 26.50±4.45 CHSS中量组 3.99±1.50 5.61±1.61 7.34±1.971) 33.38±11.19 CHSS大量组 3.15±1.881) 4.49±1.841) 6.19±2.531) 41.98±20.381)普罗帕酮组 3.11±1.471) 4.49±2.241) 5.82±2.131) 42.20±19.451)与模型对照组比较,1)P＜0.05

3 讨 论

心律失常属“心悸”“怔忡”的范畴。古代中医对心律失常的认识,虽各家均有不同,但大多认为病因不外乎虚实两者,气血阴阳亏虚及血瘀饮停之变。病机多为虚实夹杂,本虚标实。现在多数医家主张其基本病机离不开虚、瘀、痰、热,本虚是本病的发病基础,标实是病理产物。心悸是由多种原因导致,使正气受损,痰瘀郁热内生,阻滞气机,郁久化热,痰瘀热互结;机体正气已虚,无力抗邪外出,邪正相争,若正胜邪退则脉律暂时稳定;若邪胜正退则内扰心神而发为心动悸,因而心悸常呈阵发性。这其中痰为宿根,若有情志诱因即可发作,故益气活血、解郁化痰即可防邪胜而发病,以达防治心悸之目的。

柴胡三参胶囊是治疗冠心病心律失常的有效验方[1]。由柴胡、法夏、党参、丹参、苦参、黄连、炒常山、甘草等组成。本方以和法为立方基础,大凡临床上错综复杂,虚实夹杂的病证均应以“和解”为治疗大法。在该方中,柴胡为君,能和解开郁,调畅气机;臣以法夏,化痰燥湿,消痰下气;丹参,活血通经,凉血消肿,清心除烦;苦参清火燥湿,兼通利小便;黄连,大苦大寒,燥湿清热;常山善开痰结,甘草补脾益气,滋咳润肺,缓急解毒,调和百药共为佐使。柴胡三参胶囊治疗心悸,取其和解开郁,使气机调畅;取其清热、化痰、活血,使邪去而正安;因正气已损,故又应顾护正气,扶正以祛邪,标本兼治以定悸。全方合用,共奏和解定悸、益气活血、清热化痰之功效。

动物实验证实法夏有明显的抗心律失常作用。清半夏水煎液200%浓度26.5 ml/kg预防给药,对氯化钡诱发的大鼠心律失常有明显的拮抗作用[1];党参水煎液和水提醇沉法制得的注射液均能明显延长注射异丙肾上腺素小鼠缺氧存活时间,说明能增强动物心肌耐缺氧能力[2];丹参的主要成分丹参素可能具有钙拮抗剂的作用,抑制血管紧张素Ⅱ所介导引起细胞内钙离子升高,从而抑制心肌细胞肥大和心肌成纤维细胞增殖[3]。苦参能抑制传导和自律性,延长不应期,抑制异位节律点,能明显对抗乌头碱、氯化钡和结扎左冠状动脉前降支诱发的大鼠室性心律失常,也能明显对抗氯乙酰胆碱CCI-Ach混合液诱发的小鼠心房纤颤或扑动[4];黄连素中所含的小檗碱有明显抗心律失常作用,类似于胺碘酮,阻滞钠通道,有轻度的非竞争性阻滞作用,延长房室结及旁道不应期,减慢传导,延长动作电位[5],还有研究表明其抗心律失常的机制,可能是直接或间接抑制了Ca2+的膜内流,延长动作电位平台期和延长3相复极时间,中断折返激动,从而防治心律失常[6]。含有常山的中成药对用垂体后叶素造成大鼠急性心肌缺血模型和冠脉结扎所诱发犬急性心肌缺血所致心律失常有较好的保护作用[7];甘草的有效成分甘草酸可延长乌头碱诱发的心律失常潜伏期,减少室颤率,增加毒毛花苷诱发的室性心律失常的阈值,推测甘草酸可能具有影响心肌细胞离子通道的作用[8]。

本实验表明,柴胡三参胶囊有较好的拮抗氯仿、乌头碱和氯化钡诱发实验性心律失常的作用。氯仿诱发的心律失常与交感神经系统活性增高及心脏β受体激活有关[9]。在氯仿致心律失常的模型中,与模型对照组相比,柴胡三参胶囊的小、中、高剂量组可减小室颤的发生时间率;明显对抗氯仿诱发的心律失常,有较强的调节自主神经功能和膜稳定作用。本实验采用氯化钙诱发心律失常,作用机制较为复杂,主要与钙离子对心脏心肌细胞的直接作用有关,与心肌细胞膜上钙离子的内流有关[10]。在氯化钙模型中,与模型组相比,柴胡三参胶囊的中、大剂量有缩短心律失常的发生时间作用,柴胡三参胶囊可明显抑制氯化钙所致的大鼠双向性室性心律失常,可通过抑制钙离子内流或促进钾离子的流出,降低心脏快反应细胞的自律性。乌头碱诱发心律失常的作用机制是复杂的。主要是由于它能激活心肌细胞的快Na+通道,使心肌快Na+通道开放,加速心肌细胞Na+内流,提高快反应细胞的自律性,从而加速起搏点自律,诱发多源性异位节律点,缩短心肌不应期,导致心律失常[11-13]。在乌头碱模型中,与模型组相比,柴胡三参胶囊的各剂量组有缩短心律失常发生时间的趋势,并且呈剂量依赖性显著性缩短心律失常持续时间(P＜0.05)。本实验显示,柴胡三参胶囊可明显抑制乌头碱诱发的大鼠心律失常,能作用于此类离子通道而发挥其抗心律失常作用。柴胡三参胶囊治疗心律失常是一种综合作用过程,其不单是通过抑制心脏单一离子通道而发挥作用的,而是在于整体的调节作用,这可能也是该方起效的原因。

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