TPX2蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

张惠球 沈浩贤 刘奕生

广东省广州市广州医学院形态学实验中心（510182）

TPX2蛋白是脊椎动物一个新的纺锤体成分家族，作为纺锤体成分的一种微管相关蛋白，弥散分布在S期和G2期细胞的核心，在细胞有丝分裂纺锤体形成过程中发挥重要作用。TPX2在多种恶性肿瘤中存在过表达，导致细胞中心体异常扩增、异倍体形成以及细胞恶性转化。并与肿瘤的生物学行为有关。研究表明，TPX2表达受细胞周期的严格调控，阻断其表达可抑制肿瘤细胞的生长，有望成为肿瘤治疗的候选靶点，TPX2与乳腺癌临床病理特征间的关系国内报道较少，本研究旨在检测TPX2在乳腺癌中的表达情况，探讨其与乳腺癌发生、发展之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

组织标本为广州医学院形态学实验中心2006至2007年收集存档蜡块，共80例，均为女性；另选20 例正常乳腺组织作为对照组。

1.2 方法

采用免疫组织化学 SP法，抗体TPX2为基因公司产品，所用SP试剂盒，DAB显色剂均为福州迈新生物公司产品。组织经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋；4μm厚连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，柠檬酸盐高温、高压修复抗原；实验步骤严格按照试剂盒说明书进行，TPX2抗体稀释液的浓度为1∶500，用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照；DAB 显色，苏木素复染，显微镜下观察。

1.3 结果判断

以癌细胞核呈现棕黄色颗粒为TPX2蛋白表达阳性。判断标准为随机计数10个高倍视野，观察100个细胞中阳性细胞所占百分比，按阳性肿瘤细胞数占总细胞数的百分比分成两组；染色细胞比例＜10%为阴性；≥10%为阳性。

1.4 结果统计

本研究两样本率的比较经统计学χ2检验处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TPX2蛋白在正常乳腺导管上皮和浸润性乳腺癌中的表达

TPX2蛋白阳性表达主要定位于肿瘤细胞的细胞核，少部分表达于细胞质。在80 例乳腺癌组织中，TPX2阳性表达62 例，阳性表达率为77.5%；在20例正常乳腺组织中全部阴性表达，阳性表达率为0.0%，TPX2蛋白在两者之间的表达存在显著差异（P＜0.01），说明TPX2蛋白的表达与乳腺癌的发生有联系。本实验在部分正常乳腺组织偶见少数基底上皮细胞和中等量的亚基底细胞显示阳性反应，因表达的细胞数较少，达不到判定标准，故作为阴性结果处理。另本实验因未对乳腺癌组织进行分类，故TPX2蛋白表达是否与乳腺癌组织类型以及乳腺癌患者的淋巴结转移、预后等因素相关还有待进一步的实验研究（表1）。

表1 TPX2在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达

3 讨 论

乳腺癌是常见的恶性肿瘤，在我国其发病率也呈上升趋势，特别是经济发达地区已成为威胁妇女生命和健康的大敌[1]。早期发现、早期诊断和早期治疗是改善乳腺癌预后的重要因素。目前除雌、孕激素受体、表皮生长因子受体外，尚无对乳腺癌治疗及预后有明确指导价值的分子标记。化疗是目前肿瘤治疗的主要手段，但其毒性的非特异性和耐药性的存在依然是困扰临床医生的主要问题[2]。因此，寻找乳腺癌早期诊断和治疗的新的标记分子具有非常重要的意义[3]。

TPX2是一种受细胞周期严格调控的核增殖相关蛋白，参与细胞有丝分裂的纺锤体微管功能[4]，围绕TPX2与细胞周期、纺锤体微管及肿瘤增殖等方面的研究开展，这个新的增殖标志物可能成为肿瘤细胞增殖的确切的评估指标。随着 TPX2单克隆抗体的成功制备，逐渐出现对肿瘤石蜡组织切片免疫组织化学方面的研究，其中包括在淋巴结阴性的乳腺癌、子宫内膜癌、神经母细胞瘤和黑色素细胞病等方面的研究，结果均提示病变组织中的TPX2表达水平对疾病生物学行为有预测价值，并可作为形态学改变和独立的预后评价指标；而且，端粒酶活性与TPX2高表达的相关性提示了TPX2对于细胞永生化的贡献。

目前国际上的相关研究多集中于对该蛋白基础生理功能方面的探讨，国内有关TPX2蛋白的研究多集中与呼吸系统肿瘤的研究，而有关TPX2蛋白与乳腺癌的关系的研究国内报道较少。本实验采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中的TPX2表达情况，结果表明TPX2蛋白于乳腺癌的发生存在相关性。TPX2在人体组织，特别是肿瘤中的表达提示其可作为肿瘤形态学改变和独立的预后评价指标，生化分析和体内、外实验均表明TPX2过表达导致细胞中心体扩增，出现明显DNA异倍体及多倍体的形成，提示过量的TPX2可能抑制正常核分裂的完成及干扰TPX2激活的生理途径，并且TPX2异常表达可能在癌变和恶性肿瘤进展中发挥作用。有学者采用免疫组织化学技术对乳腺癌、子宫内膜癌、神经母细胞瘤和黑色素细胞瘤的石蜡包埋组织切片的研究结果提示，病变组织中的TPX2标记指数对疾病生物学行为有预测价值，并可作为形态学改变和预后评价指标[4]。

我们采用免疫组织化学的方法，对80例乳腺癌组织样本进行TPX2蛋白检测分析，结果显示，TPX2蛋白表达水平在肿瘤组织中明显高于正常组织（乳腺癌组织阳性表达率为77.5%；乳腺组织阳性表达率为0），提示TPX2的高表达与乳腺癌的发生密切相关。有报道指出，TPX2的表达与肿瘤的分期有关，而且随着肿瘤分期越晚或组织病理学分级越差，TPX2的表达水平越高[4]。研究表明，TPX2与恶性肿瘤异倍体之间有明显的相关性。因此，可以推断TPX2的异常可能与恶性肿瘤的分级、临床分期及预后有某种相关性[5]。本实验因未对乳腺癌组织进行分类，故TPX2蛋白表达与乳腺癌组织类型以及乳腺癌患者的淋巴结转移、预后等因素是否相关还有待进一步的实验研究。

目前，TPX2蛋白已被认为是一种新的癌基因，并越来越引起关注。其研究仍有许多空白。进一步研究TPX2的表达和作用机制，不仅有助于肿瘤的早期诊断和预后判断，而且有可能寻找到特异且实用的针对异常TPX2信号通路的治疗方案，从而延缓多种肿瘤细胞的增生或转移。相信随着研究的深入，TPX2必将被彻底了解，为抗肿瘤治疗提供新的思路[5]。

[1]陆巍,童汉兴,周恒花,等.乳腺癌组织中期因子的表达及其临床意义[J].中国临床医学,2008,15(3):433-434.

[2]林海,侯敢,黄迪南.以TRAIL为靶点的肿瘤治疗研究进展[J].生命科学,2007,19(5):492-495.

[3]张丽军,谭丁桃.乳腺癌蛋白质组研究进展[J].生命科学,2007,19(5):512-516.

[4]林冬梅,马莹,肖汀,等.TPX2在肺鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达和意义[J].中华病理学杂志,2006,35(9):540-544.

[5]张云香, 李湘洲.TPX2在细胞有丝分裂中的作用及与肿瘤发生的关系[J].肿瘤研究与临床,2007,19(12):861-864.