中药复方提取物及其配合抗生素对猪繁殖与呼吸综合征的疗效观察

顾文松 沈明华

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）为近几年新流行的重要传染病，且呈不断的蔓延趋势。病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），其在呼吸道疾病发生过程中所起的作用日益增强[1-2]，主要损伤巨噬细胞、降低机体免疫力、引起继发感染。幼龄仔猪发病后主要表现耳廓发绀（故俗称蓝耳病）、呼吸道症状、厌食、发热，怀孕母猪引起流产、死胎和木乃伊。临床治疗猪繁殖与呼吸综合征主要是干扰素，但使用效果不是很理想。我们根据民间经临床验证对治疗猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒病等有效的复方草药制成中药复方提取物，并观察其对猪繁殖与呼吸综合征的疗效。

1 材料与方法

1.1 试验药物

中药复方提取物：将虎杖、女贞子、杠板归、山药、黄芪、景天三七、半枝莲、诃子和蒲公英等中药（均购于安徽亳州药材有限公司）按照一定比例混合，冷水浸泡30 min，水煎3次，合并滤液，将滤液与一定量95%乙醇溶液混合，常温浸提3 h，抽滤（重复3次），合并滤液减压蒸馏，挥去乙醇，并在真空旋转蒸发仪上浓缩（水浴恒温60℃，水真空），制成1 ml含生物药1 g 的溶液[3]。

干扰素，10 ml（800万单位），由中国科学院微生物研究所研制；头孢噻肟钠，1 g/支，广东金地药业有限公司生产，批号08021071。

1.2 试验动物

1.2.1 病例来源与临床检查

2009年7月，江苏泰州、镇江等地多个猪场的保育猪，整群发生不同程度的呼吸困难（腹式呼吸）、精神沉郁、嗜睡、食欲不振等情况，严重者咳嗽、气喘，呼吸频率高达80次/min以上，耳部、腹部和腿部发绀等症状。剖检病猪可见肺充血、出现水肿，局灶性肺炎；有的有胸腔积液、肺门淋巴结肿大等症状。临床上曾用过多种药物治疗如磺胺嘧啶，青、链霉素等均未见效果，猪群进行过猪瘟、猪蓝耳病和链球菌病免疫。

1.2.2 实验室检查

随机无菌采血10份，分离血清，参照汤景元等[4]报道的方法进行PRRSV的RT-PCR检测。

1.2.2.1 病料总RNA的提取

取血清0.25 ml加入1 ml Trizol试剂，室温孵育5 min，加入0.2 ml氯仿，充分晃动离心管15 s，室温孵育 2～3 min，4 ℃、12000 r/min离心 15 min，转移上清液于另一新的1.5 ml离心管，加入0.5 ml异丙醇，充分晃动，放置10 min，4℃、12000 r/min离心10 min沉淀核酸，弃上清液，加入75%乙醇1 ml，震摇，洗涤核酸，4℃、8000 r/min离心5 min，弃上清液，室温干燥沉淀5 min，加入40 μl DEPC水溶解沉淀物。

1.2.2.2 反转录

取下游引物 GP5.20.5 μl，10 mmol/l dNTPs0.25 μl，5×反转录 buffer 2.0 μl和总 RNA 7.0 μl，65 ℃水浴10 min，然后加入 M-MLV 反转录酶 0.25 μl，用无菌双蒸水补至总体积10.0 μl，37℃水浴1 h。

1.2.2.3 PCR

反应总体积 25 μl。上游引物 GP5.10.5 μl，下游引物 GP5.20.5 μl，2.5 mmol/l dNTPs 2.0 μl，10×Mg2+freebuffer 2.5 μl，25 mmol/l Mg2+1.5 μl，rTaq 酶 2.5 U，cDNA 1 μl，用灭菌双蒸水补至总体积 25 μl。反应循环参数：94℃预变性 5 min；94℃变性45 s，59℃退火 45 s，72℃延伸60 s，共进行35循环；然后72℃延伸10 min。取PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳。

1.2.2.4 RT-PCR检测结果

10份血清样品结果全为阳性（如图1）。根据临床症状、剖检变化和血清学检测结果，诊断为主要病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒。

1.3 分组治疗

取病猪130头分成5组，分别放入5个打扫干净并消毒的隔离猪舍内。中药复方提取物配合抗生素组（30只），用中药复方提取物原液10 ml灌服给药，同时每头猪肌肉注射头孢噻肟钠1支；中药复方提取物组（30只），用中药复方提取物原液灌服给药10 ml；干扰素组（30只），注射干扰素5 ml；抗生素对照组（30只），每头肌肉注射头孢噻肟钠1支；以上各组均每天用药2次，连用5 d。空白对照组（10只），不给药。

1.4 疗效判定

观察猪只的精神、采食、体温、呼吸、皮肤和耳朵颜色及死亡等情况，按如下标准判断疗效。

治愈：用药后呼吸平稳，精神、饮食、体温、皮肤和耳朵颜色恢复正常。

好转：用药后症状明显减轻，呼吸、精神、体温、饮食好转。

无效：用药后症状不减轻，甚至加重或死亡。总有效率=治愈率+好转率。

1.5 数据处理

用t检验方法统计比较各组治愈率和总有效率的差异。

2 治疗结果（见表1）

中药复方提取物配合抗生素组治愈率和总有效率均显著高于中药复方提取物组、干扰素组、不治疗的空白对照组（P＜0.05），中药复方提取物组的治愈率和总有效率高于抗生素对照组和空白对照组（P＜0.05），但和干扰素组相比差异不显著（P＞0.05）。表明中药复方提取物及其配合抗生素对猪繁殖与呼吸综合征都有疗效，但中药复方提取物配合抗生素效果更好。

表1 各组的治疗效果（%）

3 讨论

试验结果表明，该中药复方提取物单独使用对猪繁殖与呼吸综合征有很不错的疗效，和干扰素相似，高于抗生素对照和空白对照，但低于中药复方提取物配合抗生素组。

该中药复方提取物是我们根据民间一个经验方（临床中使用对猪病毒病有很好疗效的草药组方）提取而成的一个复方提取物。我们已经通过试验，发现该组方的中药复方提取物能够明显提高细胞抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染[3]。

该中药复方提取物由虎杖、女贞子、杠板归、山药、黄芪、景天三七、地耳草、半枝莲、诃子和蒲公英等十味中药组成。现代药理研究表明，方中虎杖、女贞子、黄芪、地耳草、半枝莲和蒲公英都有抗病毒作用，对多种病毒有较强的抑制和杀灭作用，可能是该中药复方提取物发挥抗病毒作用的主要组分药。此外，方中山药、黄芪、景天三七和蒲公英具有增强免疫、抗应激、诱导干扰素的分泌的功能。

猪繁殖与呼吸综合征是免疫抑制病，猪感染此病后很容易继发感染细菌[5-6]。中药复方提取物配合抗生素组效果比单用中药复方提取物效果好，可能是抗生素（头孢噻肟钠）具有消炎作用、能够有效杀灭继发感染的细菌从而促进中药复方提取物的有效发挥。

4 结论

中药复方提取物及其配合抗生素对猪繁殖与呼吸综合征有很好的疗效，且中药复方提取物配合抗生素效果优与单独使用中药复方提取物。希望我国的兽医权威人士关心一下民间一些草药经验方，有可能在民间我们会找到一些对畜禽病毒病有很好效果的草药组方。

[1]Dee S A.The porcine respiratory disease complex:Are subpopulations important[J].Swine Health and Production，1996，4:147-149.

[2]DesRosiers R.Diagnosis and control of swine respiratory diseases[J].Proce Am.Assoc Swine Pract，1997，333-344.

[3]顾文松，沈明华，刘伟，等.中药复方提取物对细胞抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染能力的影响[J].养猪，2009(4)：73-74.

[4]汤景元，姜平，邓雨修，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒和致病性沙门氏菌的混合感染[J].中国兽医学报，2005(7):337-338.

[5]Ellis J，Krakowka S，Allan G M，et al.The clinical scope of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection has expanded since 1987;an alternative perspective[J].Vet Pathol，1999，36:262-265.

[6]Allan G M，Ellis J A.Porcine circovirus:a review [J].J.Vet.Diagn.Invest，2000（12）:3-14.