P16蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

杨晓飞，罗光恒

（贵州省人民医院，贵州贵阳 550002）

胃癌是我国常见的消化道肿瘤之一。研究表明，胃癌的发生、发展与癌基因和抑癌基因结构、功能和表达调控异常等因素密切相关。p16是近年来发现的重要的抑癌基因，1994年，Kamb和Nobori等[1-2]几乎同时报道了有关p16基因的研究。p16基因位于9号染色体短臂2区1带，完整序列包括2个内含子和3个外显子，其中，外显子1含126 b，外显子2含307 b，外显子3含11 b。p16基因突变和缺失广泛存在于各种肿瘤，当p16基因失活或被改变时，P16蛋白表达缺失，则引起细胞增殖失控而导致肿瘤发生。本研究采用免疫组织化学链霉菌素-生物素法（streptaridin peroxidase，SP）对我院2007年5月～2009年12月收集的68例胃癌患者的新鲜胃癌组织及25例正常胃黏膜的P16蛋白表达进行检测，旨在探讨P16蛋白异常表达与胃癌不良生物学行为的关系，以及P16蛋白的表达情况对胃癌预后的判断。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入的68例胃癌患者和同期25例正常对照病例术前均未接受过放疗和化疗，且所有标本均经病理学检查证实。68例胃癌患者年龄41～76岁，平均57岁；其中，男51例，女17例。胃癌组织病理学分型：高分化腺癌6例，中分化腺癌11例，低分化腺癌47例，印戒细胞癌4例。癌组织浸润深度：侵犯达浅层者23例，侵犯达全层者45例。淋巴结转移阳性42例，无淋巴结转移26例。

1.2 试剂与方法

1.2.1 组织学处理 全部标本按标准取材后，均在手术切除后0.5 h内以10%中性福尔马林溶液固定24 h。经乙醇梯度脱水，二甲苯透明2次，浸蜡包埋，制成4μm厚的切片，准备免疫组织化学染色。

1.2.2 免疫组织化学染色 P16蛋白染色采用SP法，SP免疫组织化学试剂购自武汉博士德生物工程有限公司。脱蜡、水化、染色步骤严格按照免疫组织化学试剂使用说明书进行。

1.3 判定标准

P16蛋白阳性染色表达为胞核型，呈清晰棕黄色。阳性细胞百分率：（-）为无阳性细胞；（+）为阳性细胞数＜25%；（++）为阳性细胞数25%～50%；（+++）为阳性细胞＞50%。每张切片以每10个高倍视野阳性细胞百分率综合分析。计数阳性细胞数后取均值。（+）～（+++）均定性为阳性表达。

1.4 统计学处理

数据以均数±标准差（x±s）表示，经 SPSS 10.0分析，采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

25例正常胃组织标本中，P16蛋白表达25例（100%）；在68例胃癌组织标本中，男51例（75.0%），女 17例（25.0%），P16阳性率为41.11%，可见P16蛋白在胃癌组织中的阳性表达率明显低于其在正常胃黏膜组织中的阳性表达率，正常胃黏膜组织与胃癌组织中P16蛋白阳性表达情况差异有统计学意义（P＜0.05）；P16蛋白表达与胃癌患者的性别、浸润深度差异无统计学意义（P＞0.05），但与淋巴结转移和胃癌分化程度差异有统计学意义（P＜0.05）；与高、中分化胃癌组织P16蛋白阳性表达率比较，低分化、未分化胃癌组织中的阳性表达率显著降低（P＜0.05）；发生淋巴结转移的胃癌患者组织学检查显示，P16蛋白阳性表达率为28.57%（12/42），而无淋巴结转移组P16蛋白阳性表达率为61.53%，两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 1。

表1 P16蛋白表达与主要病理因素的关系

3 讨论

致癌因子作用于不同的基因并引起相关基因的突变和表达水平的变化，导致胃癌的发生。因此，研究胃癌组织中基因表达的变化不但对胃癌发生机制的研究有帮助，而且可为胃癌的早期发现等提供理论依据。p16是近年来发现的重要抑癌基因，其编码产物为CDK4的抑制物，在细胞周期中起负调节作用。P16蛋白通过抑制细胞周期cyclin Denzymes/cyclin dependent kinase 4（cyclin D／CDK4）的活性参与并调节细胞从G0期进入G1期[3]。若没有P16蛋白的抑制作用，细胞会异常增生，导致肿瘤的发生及发展。有学者用腺病毒载体将外源野生性p16基因感染有p16基因缺失的肿瘤细胞，使p16基因恢复表达来治疗肿瘤[4-6]。1995年，Lukas等[7]在胃癌细胞系中首次发现p16基因纯合性缺失与胃癌的关系，本研究用SP法研究胃癌组织P16表达与胃癌的关系，证实P16蛋白在胃癌组织中的阳性表达率明显低于其在正常胃黏膜组织中的表达率，说明在胃癌组织中存在p16基因的失表达，且分期越晚，p16的表达越低，反映胃癌病程和淋巴转移情况。

本研究表明，P16蛋白表达与胃癌患者的性别、浸润深度差异无关，但与有无淋巴结转移和胃癌分化程度差异有关。研究显示，在低分化、未分化胃癌组织中的阳性表达率明显低于高分化、中分化胃癌组织，p16基因表达减低有可能使癌细胞获得某种生长优势，这与各种肿瘤细胞系中存在p16基因表达减低而具有生长优势的结果一致[7]，也与近年研究一致[8-9]。p16基因变异在胃癌发生及发展中起重要作用，p16基因mRNA的表达显著改变，一方面说明重度异型增生、结肠型肠化等疾病是重要的癌前病变，同时也提示p16基因的变异是胃癌发生的早期事件；在胃黏膜形态癌变之前，p16基因mRNA的表达已显著下降，p16基因的检测可以在一定程度上预测异型增生、肠上皮化生等疾病的癌变趋向，有助于胃癌的早期诊断和治疗，也对胃癌预后的判断有一定的帮助。

[1]Kamb A,Gruis N,Jane WF,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types[J].Science,1994,264(5157):436-440.

[2]Nobori T,Miura K,Wu DJ,et al.Deletions of the cyclin dependent kinase 4-inhibitor gene in multiple human carcinomas[J].Nature,1994,368(6473):753-756.

[3]Serrano M,Hannon GJ,Beach D.A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4 [J].Nature,1993,367(3667):704-707.

[4]Allay JA,Steiner MS,Zhang Y,et al.Adenovirus p16 gene therapy for prostate cancer[J].World JUrol,2000,18(2):111-120.

[5]Steiner MS,Zhang Y,Farooq F,et al.Adenoviral vector containing wild-type p16 suppresses prostate carcinoma growth and prolongs survival by inducingcell senescence[J].Carcinoma Gene Ther,2000,7(3):360-372.

[6]宋岩,舒振波.P16和VEGF在胃癌组织中的表达及临床意义[J].中国实验诊断学,2008,12(12):1545.

[7]Lukas J,Parry D,Aagaard I,et al.Retinoblastoma protein dependent cellcycle inhibition by the tumor suppressor P16[J].Nature,1995,369(6531):503-506.

[8]张双元,郭新建.P16在胃癌组织中的阳性表达及临床意义[J].青岛医学院学报,2006,27(4):248-250.

[9]申兴武,王瑞婷.P16在胃癌组织中的表达及临床意义[J].承德医学院学报,2004,21(3):187-188.