红腺忍冬的质量研究*

彭 维，黄 琳，关倩怡，林 青，梁 峰，苏薇薇

(1.中山大学生命科学学院，广东 广州 510275；2.广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东 广州 510515)

红腺忍冬为忍冬科植物LonicerahypoglaucaMiq.的干燥花蕾或带初开的花，收载于《中华人民共和国药典》2005年版一部[1]，具有清热解毒、凉散风热的作用，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等症[1]。笔者对红腺忍冬的质量进行了深入研究，采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法同时测定绿原酸、咖啡酸的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Dionex P680型高效液相色谱仪(美国戴安公司，四元梯度泵、自动进样器、PDA-100检测器及Chromeleon工作站)；BP211D电子分析天平(瑞士沙多利斯公司)；T660/H超声波清洗器(美国埃玛公司)。

10批红腺忍冬均产于湖南隆回，由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，经中国科学院华南植物园华南植物鉴定中心叶华谷研究员鉴定为忍冬科植物红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.的干燥花蕾或带初开的花。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110753-200413)；咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110885-200102)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，甲醇、甲酸均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

取红腺忍冬药材粉末0.2 g，加甲醇5 mL，放置12 h，滤过，滤液作为供试品溶液。取绿原酸、咖啡酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作为混合对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(体积比为7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。结果表明：10批红腺忍冬供试品色谱中，在与绿原酸、咖啡酸对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点(图1)。

图1 红腺忍冬薄层色谱

2.2 HPLC法同时测定红腺忍冬中绿原酸和咖啡酸的含量

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma PLATISIL ODS C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相：乙腈-0.4%(w)磷酸溶液(pH≈2.5)(体积比12∶88)，流速1.0 mL/min，检测波长为327 nm，柱温：30 ℃。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒质量的绿原酸和咖啡酸对照品适量，置棕色瓶中，加入φ=50%甲醇溶液制成每1 mL含绿原酸42.4 μg、咖啡酸9.28 μg的溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取红腺忍冬药材粉末(过四号筛)0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入φ=50%甲醇50 mL，称定质量，超声处理(功率250 W，频率35 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用φ=50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加φ=50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 线性及线性范围 取上述对照品溶液，按2.2.1色谱条件，分别进样0.5、5、10、15、20 μL ，以峰面积积分值 A对对照品的进样量C(μg)进行回归分析，得咖啡酸线性回归方程：A=0.025 98C+0.001 76，相关系数r=0.999 9；绿原酸线性回归方程：A=0.018 45C+0.000 843，相关系数r=0.999 9。结果表明绿原酸量在0.021 2～0.848 0 μg范围内与峰面积线性关系良好；咖啡酸量在0.004 64～0.185 60 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 精密吸取咖啡酸、绿原酸对照品混合溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积，测得咖啡酸、绿原酸峰面积的RSD分别为0.86%、0.51%，表明该法精密度好。

2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液于室温下分别放置0、3、6、12、24、48 h后，分别进样10 μL，测定峰面积，计算绿原酸、咖啡酸峰面积的RSD分别为1.33%、0.53%，表明稳定性好。

2.2.7 重现性试验 精密称取同一批号(0707005)的样品粉末6份，分别按供试品溶液制备方法平行操作，精密吸取供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量。绿原酸、咖啡酸平均含量分别为3.10%、0.18%，RSD分别为1.65%、2.31%(n=6)，表明方法重现性好。

2.2.8 加样回收试验 精密称取已测知绿原酸、咖啡酸含量的样品适量，分别精密加入一定量的对照品，按供试品溶液的制备及色谱条件操作，计算加样回收率，结果咖啡酸、绿原酸的平均回收率分别为99.6%及101.1%(n=6)，RSD分别为2.16%及3.26%(n=6)。

2.2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以外标一点法计算绿原酸及咖啡酸的含量。结果见图2、表1。

3 讨 论

有关红腺忍冬的成分分析，文献报道如下：邓玲姣等[2]采用紫外分光光度法测定红腺忍冬花蕾、茎及叶中绿原酸含量，分别为3.36%、1.99%及6.55%；辛宁等[3]采用高效液相色谱法测定广西红腺忍冬中绿原酸含量，分别为2.54%～5.37%。本文采用HPLC法同时测定红腺忍冬中绿原酸和咖啡酸的含量，这在国内未见文献报道。

图2 混合对照品(A)及红腺忍冬(B)高效液相色谱

表1 红腺忍冬中绿原酸及咖啡酸的含量

Table 1 Contents of chlorogenic acid and caffeic acid inLonicerahypoglaucaMiq.

样品批号w(绿原酸)/%w(咖啡酸)/%07060012.410.1607070023.140.1107070033.300.2107070043.020.2207070053.100.1807070063.470.2007070073.480.1307070083.860.1007070093.170.1407070103.250.16

本研究采用薄层色谱法对红腺忍冬进行定性鉴别，采用高效液相色谱法同时测定10批红腺忍冬中绿原酸和咖啡酸的含量，能更加客观地评价红腺忍冬药材的质量。

参考文献：

[1] 中华人民共和国国家药典委员会编.中国药典：一部[S]. 北京:化学工业出版社，2005:21.

[2] 邓玲姣，周晓舟，黄素梅,等，忻城县金银花及其茎、叶中绿原酸含量测定[J].广西农学报，2007，22(5):34-36.

[3] 辛宁，王柳萍，张守平,等.HPLC法测定广西红腺忍冬中绿原酸含量[J].药物分析杂志，2009，29 (5)：849-851.