高效液相色谱法测定妇乐颗粒中大黄素和大黄酚含量

2010-06-01 12:22汪培钧张文婷
中国药业 2010年8期
关键词:三氯甲烷黄素供试

盛 燕 ,汪培钧 ,张文婷 ,陈 勇

(1.浙江省食品药品检验所,浙江 杭州 310004; 2.杭州天目山药业股份有限公司,浙江 临安 311300)

妇乐颗粒处方由忍冬藤、大血藤、大黄(制)等10味中药组成,具有清热凉血、活血化瘀、消肿止痛的功效,用于急性盆腔炎、急性附件炎、急性子宫内膜炎等妇科炎症引起的带下、腹痛。目前,国内有6家企业生产该品种,临床应用广泛。方中制大黄有泻火解毒、逐瘀通经等作用,大黄素、大黄酚为主要活性成分[1]。为更好地控制产品质量,保障用药安全与有效,笔者参考有关文献[2-3],建立了同时测定妇乐颗粒中大黄素、大黄酚含量的高效液相色谱(HPLC)法,报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100系列液相色谱仪(自动进样分析)。大黄素、大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为110756-200110,110796-200513,供含量测定用);甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯;妇乐颗粒(杭州天目山药业股份有限公司,批号为 20061113,20061114,20061115)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Zorbax Extend C18柱 (250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇 -0.1%磷酸溶液(80 ∶20);流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃ ;检测波长:265 nm。在此条件下各组分分离良好,阴性对照品溶液对测定无干扰(图1),理论塔板数以大黄素峰计算应不低于8 000。

2.2 溶液制备

取大黄素、大黄酚对照品各适量,精密称定,分别加甲醇制成每1 mL含 6 μg和10 μg的溶液,即得对照品溶液。取装量差异项下的样品,研细,取约0.3 g,精密称定,置烧瓶中,加8%盐酸溶液10 mL,再加三氯甲烷25 mL,加热回流1 h,放冷,混合液移至分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,洗液并入同一分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液用三氯甲烷振摇提取3次,每次10 mL,合并三氯甲烷液,减压回收三氯甲烷至干,残渣加甲醇适量,微热使溶解,放冷,转移至5 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。取不含大黄的阴性样品,同法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取大黄素对照品(10.54 μg/mL)、大黄酚对照品(11.12 μg/mL)混合溶液 1,2,4,8,16,20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。以进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,回归方程大黄素为 Y=4 606.6 X-4.613 7,r=0.999 9(n=6),结果显示进样量在0.010 54~0.210 80 μg范围内与峰面积有良好线性关系;回归方程大黄酚为 Y=6 083.4 X-6.716 8,r=1.000 0(n=6),结果显示进样量在 0.011 12 ~0.222 40 μg范围内与峰面积有良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一供试品溶液,连续进样。结果大黄素、大黄酚峰面积的 RSD分别为0.77%和0.50%(n=6)。

重现性试验:精密称取同一样品6份,按供试品溶液制备方法制备并测定。结果大黄素的平均含量为106.67 μg/g,RSD=2.05%(n=6),大黄酚的平均含量为 161.72 μg/g,RSD=1.45%(n=6),总含量的平均含量为 268.39 μg/g,RSD=1.49%(n=6)。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液,于 0,4,9,13,21 h 时分别进样10 μL。结果大黄素、大黄酚峰面积的 RSD分别为0.53%和0.52%(n=5),表明供试品溶液在21 h内基本稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量样品6份,精密加入大黄素、大黄酚对照品适量,按供试品溶液制备方法制备,测定峰面积并计算回收率。结果见表1。

表1 大黄素和大黄酚加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品3批,依法制备供试品溶液并测定。结果3批样品每袋含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总和计分别为1.56,1.58,1.59 mg(n=2)。

3 讨论

方法学考察结果表明,该方法结果准确,重现性好,可有效地控制该制剂的质量。

制备供试品溶液时,进行了提取方法的比较,结果采用水解中直接提取大黄素、大黄酚的方法,较药典大黄含量测定项供试品前处理简单,且效率相当。试验中还考察了色谱柱、柱温、流动相酸度的变动对分离度等结果的影响,发现在测定条件下,系统的轻微变动对试验结果影响不大,系统耐用性良好。

药品是特殊商品,必须符合安全、有效、可控、稳定的要求。质量标准完善与否直接关系到上市药品质量控制水平的高低,关系到药品的安全有效。本试验在妇乐颗粒原质量标准的基础上,增加了大黄素、大黄酚含量指标的控制,对于进一步完善质量标准、加强质量控制具有积极意义。

[1]丁 艳,黄志华.大黄素药理作用研究进展[J].中药药理与临床,2007,23(5):236-238.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:384,17.

[3]张文婷,王嘉仡,陈纪良.含大黄蒽醌制剂中大黄酚的测定[J].中成药,2003,25(1):72.

猜你喜欢
三氯甲烷黄素供试
顶空气相色谱法测定水中三氯甲烷含量的稳定性研究
指甲油致癌?符合标准的产品可放心用
不同处方配比及提取工艺对银柴退热汤解热镇痛抗菌抗炎作用的影响
穿越时光的黄素石楼
当药黄素抗抑郁作用研究
2015年版《中国药典》脑安胶囊项下阿魏酸供试品溶液制备方法的改进
当药黄素对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用
漆黄素固体分散体的制备
Flexible ureteroscopy:Technological advancements,current indications and outcomes in the treatment of urolithiasis
挥发酚测定中三氯甲烷的回收利用探讨