高效液相色谱法测定羟苯乙酯中水杨酸含量

张 琰，陈文秋，余敏灵

（1.四川省眉山市人民医院，四川 眉山 620010； 2.四川省乐山食品药品检验所，四川 乐山 614000）

羟苯乙酯为药用防腐剂，药典中采用水杨酸与稀硫酸铁铵溶液显色进行限量检测[1]。笔者采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对该制剂中的水杨酸进行定量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

美国Waters 515 HPLC pump高效液相色谱仪；Waters 2487型紫外检测器；Empower Pro数据处理工作站。水杨酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100106-200303）；羟苯乙酯（台山市新宁制药有限公司）；乙腈（色谱纯）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；柱温：40℃；流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钠缓冲液（pH=3.4）-乙腈（50 ∶50）；流速：1.00 mL/min；检测波长：297 nm；进样量：5 μL。

2.2 溶液制备

称取水杨酸对照品25.50 mg，置250 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得水杨酸贮备液。称取羟苯乙酯（批号为20070101）5.625 0 g，置1 000 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得羟苯乙酯贮备液。精密量取水杨酸贮备液1 mL，羟苯乙酯贮备液5 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；另分别精密量取水杨酸贮备液1 mL，羟苯乙酯贮备液5 mL，分别置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为水杨酸对照品溶液和羟苯乙酯对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2项下各溶液分别进样。结果见图1。供试品溶液与水杨酸对照品溶液色谱图中，在相同保留时间位置上有相应的色谱峰，且水杨酸色谱峰与羟苯乙酯色谱峰有较好的分离度，分离度为20.0，理论塔板数按水杨酸色谱峰计算为8 324。

线性关系考察：精密量取水杨酸贮备液 0.5，3，5.5，8，10.5，13 mL，分别置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液分别进样，以峰面积（A）与质量浓度（C）作线性回归，得回归方程 A=1.909 2 ×104C-2.316 7 ×104，r=0.999 9（n=6）。结果表明，水杨酸质量浓度线性范围是0.51～13.26 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

重现性试验：精密量取同一批样品，依法制备供试品溶液并测定。结果峰面积的 RSD为0.8%（n=5）。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：精密量取同一对照品溶液，依法测定。结果水杨酸峰面积变化不大，RSD为0.9%（n=5）。

加样回收试验：精密称取已知含量的羟苯乙酯适量（约0.2 g），分别置6个100 mL量瓶中，分别加入水杨酸贮备液，依法制备溶液并测定。结果见表1。

表1 水杨酸加样回收试验结果（n=6）

稳定性试验：将供试品溶液，于室温放置0，2，4，8，16 h时分别测定。结果峰面积变化不大，RSD为0.8%（n=5）。

2.4 样品含量测定

称取4批样品约0.5 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样。结果批号分别为20070101，20060805，20060302，20060107 的产品中水杨酸含量分别为0.030%，0.031%，0.023%，0.041%。

3 讨论

该试验方法结果准确，方便，快速，测定溶液稳定，适用于羟苯乙酯中游离水杨酸的定量分析。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：910.