HSP70在自然流产患者绒毛组织中的表达及其意义

李 亮

（辽宁省兴城市妇女儿童医院，辽宁兴城 125100）

在对子宫内膜容受性的研究中发现，免疫功能异常会导致自然流产。作为在正常子宫内膜的生长和功能维持中起重要作用的热休克蛋白（heat shock protein，HSP）家族，无论何种原因引起其表达异常，都将影响子宫内膜，从而可能导致妊娠失败。本研究通过免疫组化SP法检测早期自然流产患者绒毛组织中HSP70表达，并与人工流产术取出的正常绒毛进行比较，来探讨HSP70在早期自然流产中的作用，从而为本病发生机制提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2008年1月～2009年1月辽宁省兴城市妇女儿童医院妇科门诊就诊的孕12周以内难免流产患者51例作为实验组，选取同期孕12周以内无先兆流产而要求终止妊娠者30例作为对照组，排除带节育器妊娠，无肝肾疾病，近期无感染性病变、未行保胎及雌孕激素替代治疗。

1.2 主要试剂

兔抗人HSP70多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂为进口分装，均购于Maxim公司。

1.3 方法

将以负压吸引取出的绒毛清水冲洗干净后立即用10%甲醛液固定24 h以上，常规石蜡包埋，4 pm连续切片、编号保存。免疫组化SP染色法，DAB显色，按ABC免疫组化染色步骤为。①切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗5 min×2；②10 ml/L H2O2封闭内源性过氧化物酶30 min，蒸馏水洗5 min×2；③微波修复抗原（pH 6.0柠檬酸缓冲液）10 min，蒸馏水洗5 min×2；④3 mol尿素消化 30 min， PBS(10 mmol/L，pH 7.4)振洗 5 min×2；⑤100 ml/L牛血清白蛋白（BSA）封闭15 min，室温吸干；⑥滴加一抗 Bad，Bag1（稀释度为 1∶50，1∶100，1∶200，1∶300，1∶400 和1∶500），4℃过夜，37℃复温 30 min，PBS 振洗 5 min×2；⑦滴加生物素化桥抗 （1∶100），37℃，40 min，PBS 振洗 5 min×2，En-Vision法滴加 EnVision液 37℃ 40 min，PBS振洗 5 min×2；⑧滴加 ABC 复合物（1∶100），37℃，40 min，PBS 振洗 5 min×2；⑨DAB显色，衬染，脱水透明，封固，观察。所示见图1。

1.4 结果判定标准

采取半定量评分方法进行细胞染色计分，计数100个细胞，根据阳性细胞数目所占百分比计分，阳性细胞数＜24%，记0分；阳性细胞数占25%～75%，记1分；阳性细胞数占76%以上，记2分。按染色深浅计分：浅黄色染色强度为弱，记0分；棕黄色为中等强度染色，记1分；棕褐色为强染色，记2分。以上两分值相加。每标本取3张切片，每切片取5个视野，计算平均值记为该标本得分：＜2分记为阴性，≥2分记为阳性。

1.5 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，采用χ2检验进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

自然流产患者绒毛中HSP70表达显著增高，阳性率达70.6%，与对照组比较， 差异有统计学意义（χ2=23.63，P＜0.01），见表1。

表1 HSP70在各组绒毛中的表达情况（例）

3 讨论

HSP是一组在进化上高度保守的蛋白质，其中又以HSP70分布最广泛，是重要“分子伴侣”，具有协同免疫、抗凋亡、保护机体免受炎症因子损害，在应激过程中起重要作用。作为一种应激蛋白，HSP在生理、病理和环境因素改变等情况下均可被诱导产生。研究发现，HSP70在子宫内膜、输卵管及蜕膜组织中均有表达，且随月经周期改变而波动，对维持子宫内膜正常生理作用有着重要意义，而在子宫内膜炎、子宫内膜息肉及内膜异位症等病理情况下呈高表达。最近在应激学的研究中发现，雌孕激素能够对应激反应产生抑制，妊娠期孕激素水平升高，使得子宫内膜产生容受，妊娠得以维持，这可以解释部分早期流产是由于孕酮缺乏所致。

本研究发现，早期自然流产患者绒毛组织中HSP70普遍升高，其分子学机制可能为HSP70的异常表达影响了激素和受体的结合，从而导致体内甾体激素信号传递中断，最终导致蜕膜不利于胚胎生长发育。此外，一些学者认为HSP70广泛存在于所有生物中，人与细菌有部分同源性，人体免疫系统长期暴露于微生物等环境中，反复感染后可能导致自身抗体的产生。子宫作为腹膜外器官，由于性交等因素长期暴露于机会感染的环境中，更增加了接触过敏原的机会，使得孕前就有可能产生了针对HSP70的自身抗体，导致自然流产。综上所述，笔者推测HSP可能通过以下几种机制对生殖功能产生负面影响：HSP在蜕膜组织异常表达引起体内激素紊乱、子宫敏感性增强；HSP蛋白分子具有抗原性，诱导免疫反应而成为免疫系统的攻击目标；HSP在人与微生物间有相同的抗原序列，结果导致自身免疫等原因而引发流产。

[1]陆金春.热休克蛋白与女性生殖的研究进展[J].国外医学:计划生育分册,2001,20(1):37.

[2]乐杰.妇产科学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2008:83.

[3]徐冰.热休克蛋白在健康和疾病时的作用[J].国外医学:预防、诊断、治疗用生物制品分册,1996,19(5):194.

[4]Tabibzadeh S,Broome J.Heat shock proteins in human endometrium throught the menstrual cycle[J].Infection Dis Obstet Gynecol,1997,1(1):5.