五眼果对小鼠泌尿系统结石的作用研究

杨 柯， 曾春晖， 黎文智， 李志翔

（广西中医学院药学院，广西南宁 530001）

五眼果是漆树科植物南酸枣（Choerospondias axillaris（Roxb.）Burtt et Hill）的干燥果核。据《中华本草》记载:其味甘、酸，性平，具有行气活血、养心安神、消积解毒功效，主治气泄血瘀，胸痛，心悸气短，神经衰弱，失眠，支气管炎，食滞腹满，腹泻，疝气，烫火伤等。民间使用五眼果入药治疗泌尿系统结石具有良好临床效果，但关于其治疗泌尿系统结石的药理作用研究目前尚无报道。本文复制泌尿系统结石动物模型，通过检测小鼠的尿液及肾脏中草酸和钙的含量，初步研究五眼果对泌尿系统结石的作用。

1 实验材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重18～22 g，由广西中医学院实验动物中心提供，动物合格证号桂医动字第11004号。

1.1.2 实验仪器和试剂 722型可见分光光度计（上海医用仪表厂）;QL－901震荡仪（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）;

荡石片（吉林省大峻药业股份有限公司，批号20080102）;阿法骨化醇软胶囊（1α（OH）VitD3，南通华山药业有限公司，批号070528）;其他化学试剂均为分析纯。

1.1.3 药物制备及主要实验试剂的配制:五眼果水提物制备:取500 g药材粗粉，加入5 L蒸馏水，加热提取1 h，过滤，药渣加入4 L蒸馏水，加热提取0.5 h，过滤，合并滤液，浓缩至500 mL，为褐色溶液，4℃冰箱保存备用;五眼果高、中、低剂量:用蒸馏水配成100%、50%、25%的浓度。

溴麝香草酚蓝指示剂:0.1 g麝香溴酚兰溶于20 mL 100%乙醇中徐徐加入蒸馏水80 mL不断振荡直至完全溶解。

1.2 实验方法

1.2.1 药物对泌尿系统结石动物模型的影响

1.2.1.1 实验方法 取78只健康小白鼠，♀♂各半，18～22 g，随机分成6组，每组13只，即空白对照组（蒸馏水），模型对照组（蒸馏水），阳性对照组（荡石片，2 g/kg），五眼果高、中、低剂量组（20 g生药/kg、10 g 生药/kg、5 g 生药/kg），除空白对照组外，其余各组小鼠上、下午分别i.g给予1%乙二醇0.5 mL/只，间隔1 h后，再分别给予饮用水1 mL/只，于每天下午固定时间i.g给予1α（OH）VitD30.5 μg/只1次，每周给予处理6 d。于每天下午固定时间i.g给予相应药物和蒸馏水，给药容量20 mL/kg。连续进行4周，每周第7天给予相应药物或蒸馏水后，收集24 h尿液测定尿草酸和尿钙含量。末次收集24 h尿液后，处死小鼠，取右侧肾脏，匀浆，测定肾草酸、肾钙含量。

1.2.1.2 尿草酸、肾草酸、尿钙、肾钙含量测定方法

尿草酸测定:应用铬酸钾氧化甲基红催化光度法测定尿草酸排泄量［1］:以超纯水作参比，在515 nm处测吸光度。按下列公式计算尿草酸含量［2］:

C（mmol/L）=（空白管－样品管）/（空白管－标准管）×0.01

肾草酸测定:用变色酸比色法测定草酸含量［3］，以空白管作参比，在570 nm处测其余管吸光度［4］，按下列公式计算。

C（mmol/L）=样品管/标准管×0.57。

尿钙、肾钙检测［5］:应用 EDTA络合滴定法测定。

1.3 统计学方法

采用SPSS11.0软件进行处理，实验数据用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05表示差异有显著性。

2 结果

2.1 五眼果水提物对尿草酸的影响

结果表明模型对照组与空白对照组比较，造模期间尿草酸明显升高（P＜0.05）。与模型组比较，高、中、剂量组的尿草酸在实验期间均有明显降低（P＜0.05），低剂量组的尿草酸在给药后第3、4周有明显降低（P＜0.05），结果见表1。

表1 五眼果水提物对尿草酸的影响 （±s，n=13）

表1 五眼果水提物对尿草酸的影响 （±s，n=13）

注:与模型对照组比较，*P＜0.05（下同）。

组别 剂量/（g生药/kg）尿草酸浓度/（μmol/mL）第1周 第2周 第3周 第4周空白组 － 0.084±0.014* 0.096±0.018* 0.100±0.019* 0.103±0.016*模型组 － 0.131±0.019 0.132±0.021 0.131±0.021 0.128±0.024阳性组 2 0.111±0.013* 0.100±0.009* 0.113±0.014* 0.113±0.013*高剂量组 20 0.110±0.011* 0.106±0.013* 0.109±0.010* 0.113±0.010*中剂量组 10 0.107±0.022* 0.110±0.012* 0.115±0.012* 0.113±0.011*低剂量组 5 0.119±0.017 0.119±0.009 0.116±0.016* 0.113±0.012*

2.2 五眼果水提物对尿钙的影响

结果表明模型对照组与空白对照组比较，造模期间尿钙明显升高（P＜0.05）。高、中、低剂量组与模型组比较，在实验期间均明显降低（P＜0.05），低剂量组的尿钙在给药后第3、4周有明显降低（P＜0.05），结果见表2。

表2 五眼果水提物对尿钙的影响（±s，n=13）

表2 五眼果水提物对尿钙的影响（±s，n=13）

组别 剂量/（g生药/kg）尿钙浓度/（μmol/mL）第1周 第2周 第3周 第4周空白组 － 0.616±0.147* 0.618±0.176* 0.650±0.146* 0.615±0.185*模型组 － 1.743±0.188 1.693±0.294 1.560±0.241 1.599±0.263阳性组 2 1.319±0.178* 1.438±0.224* 1.356±0.256* 1.369±0.296*高剂量组 20 1.201±0.259* 1.274±0.300* 1.296±0.173* 1.371±0.286*中剂量组 10 1.516±0.303* 1.406±0.384* 1.306±0.330* 1.347±0.334*低剂量组 5 1.583±0.320 1.532±0.379 1.344±0.285* 1.398±0.228*

2.3 五眼果水提物对肾钙，肾草酸的影响

结果表明模型对照组与空白对照组比较，造模期间肾钙，肾草酸明显升高（P＜0.05）。与模型组比较，高、中、低剂量组的肾钙、肾草酸在实验期间均明显降低（P＜0.05），各剂量对肾钙，肾草酸均有明显降低作用（P＜0.05），结果见表3。

表3 五眼果水提物对肾钙、肾草酸的影响 （±s，n=13）

表3 五眼果水提物对肾钙、肾草酸的影响 （±s，n=13）

组别 剂量/（g生药/kg）肾草酸浓度/（μmol/mL）肾钙浓度/（μmol/mL）空白组 － 0.481±0.110* 0.502±0.151*模型组 － 1.171±0.222 0.776±0.144阳性组 2 0.944±0.219* 0.174±0.003*高剂量组 20 0.954±0.171* 0.144±0.002*中剂量组 10 0.971±0.269* 0.200±0.408*低剂量组 5 0.968±0.273* 0.193±0.035*

3 讨论

诱石剂乙二醇是草酸的前体，进入体内代谢最终转变为草酸，从肾分泌排泄。1α（OH）VitD3可促进小肠黏膜上皮和小管上皮细胞对钙的吸收，促进骨钙的释放。长期用1α（OH）VitD3可使小鼠的尿钙浓度升高，尿钙草酸结合成为草酸钙，在肾组织内形成晶体，晶体渐生长、聚集形成结石。临床上许多结石患者对钙吸收主要是通过对维生素D3依赖机制，故1α（OH）VitD3是草酸钙结石形成的重要危险因素。本实验采用乙二醇和1α（OH）VitD3等作为诱石液进行动物模型的条件研究。与空白组比较，尿草酸明显升高（P＜0.05），而且造模后无小鼠死亡，表明造模成功。

五眼果高、中剂量在实验期间明显降低尿草酸，尿钙水平（P＜0.05），低剂量则在给药后第3、4周有明显降低（P＜0.05），各剂量对肾草酸，肾钙均有明显降低作用（P＜0.05），表明五眼果对小鼠泌尿系统结石具有显著的作用。深入地对其进行研究开发，势必能研发出一个对泌尿系统结石具有良好临床效果的新药。

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