毛细管GC法测定青蒿琥酯中有机溶剂的残留量

孙红英，赵爱丽，林振广

（山东省医药工业研究所，济南市 250100）

青蒿琥酯（artesunate），化学名为二氢青蒿素-10-a-丁二酸单酯，是青蒿素的衍生物。2006年，青蒿琥酯被世界卫生组织定为疟疾重症抢救的首选药物；1987年，获得中国一类新药1号证书。由于本品极微溶于水，因此在制备工艺中使用甲醇和乙酸乙酯等有机溶剂，但在国家药品标准中，没有对其残留溶剂进行控制[1]。为保证用药安全，笔者以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，建立了毛细管气相色谱（GC）法测定青蒿琥酯中2种有机溶剂的残留量，方法快速、灵敏、简单、准确。

1 仪器与试药

6890型GC仪、7694E型自动顶空进样器（美国Agilent公司）。

青蒿琥酯标准品（山东省医药工业研究所合成室提供，批号：070822、070824、070826）；甲醇、乙酸乙酯为色谱纯，N，N-二甲基甲酰胺为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP-5毛细管柱（以直径为0.25～0.18 mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相)；柱温：40℃，保持5 min，再以30℃·min-1的速度升至160℃；氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；载气：高纯N2；流速：30 mL·min-1；进样口温度：200 ℃；分流比：20∶1。采用顶空进样法测定，顶空进样条件：加热温度100℃，加热时间45 min，进样量2 mL。在此色谱条件下，各溶剂分离良好，空白溶液无干扰。色谱见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白溶液的制备：精密量取N，N-二甲基甲酰胺2 mL，置顶空进样瓶中，作为空白溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备：称取甲醇300 mg、乙酸乙酯500 mg，置有适量N，N-二甲基甲酰胺的100 mL量瓶中，充分振摇溶解，加N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液5 mL，置50 mL量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备：精密称取青蒿琥酯0.2 g，置顶空进样瓶中，分别加N，N-二甲基甲酰胺2 mL，作为供试品溶液。

2.3 标准曲线的制备[2]

分别精密量取对照品贮备液0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.0 mL，置10 mL量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。取上述各溶液2 mL，置顶空进样瓶中，按“2.1”项下色谱条件分别进样。分别以甲醇、乙酸乙酯浓度（C）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，制备标准曲线，得甲醇的回归方程为A＝204.9C－0.1（r＝0.9998），乙酸乙酯的回归方程为A＝699.9C－0.7（r＝0.9997）。结果表明，甲醇、乙醇乙酯进样浓度分别在0.03～0.605、0.05～1.002 mg·mL-1范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。

2.4 精密度试验

取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。结果，甲醇为、乙酸乙酯的RSD分别为1.2%、1.7%，表明仪器精密度符合要求。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液（批号：070822），按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8 h进样，测定峰面积。结果，RSD＝1.15%，表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.6 重复性试验

取供试品（批号070822）6份，按“2.9”项下方法操作，测定供试品中乙酸乙酯的残留量平均为0.04%，均未检出甲醇，RSD＝0.96%，表明本方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

精密称取样品（批号：070822)0.2 g，共10份，其中一份加入2 mL N，N-二甲基甲酰胺，作为空白溶液。分别配制低（80%）、中（100%）、高（120%）3种浓度的对照品溶液，分别取2 mL，加入盛有样品的顶空进样瓶中；以“2.2.2”项下的对照品溶液作为对照，按“2.1”项下色谱条件分别进样。结果，甲醇的平均回收率为98.7%，RSD＝0.73%；乙酸乙酯的平均回收率为99.1%，RSD＝1.2%。两溶剂的平均回收率均在98.0%以上，符合要求[3]。甲醇、乙酸乙酯加样回收率试验结果分别见表1、表2。

2.8 最低检出限测定

将对照品溶液逐级稀释，分别取2 mL，置顶空进样瓶中，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，直至信噪比为3∶1，此时的浓度即为最低检测限。结果，甲醇和乙酸乙酯的最低检出浓度分别为1.02、0.88 µg·mL-1。

表1 甲醇的回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test of methanol（n＝9）

表2 乙酸乙酯的回收率试验结果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test of ethyl acetate（n＝9）

2.9 样品测定

精密量取对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。结果，以外标法计算出3批样品的乙酸乙酯残留量分别为0.14%、0.09%和0.13%，3批样品中均未检出甲醇。

3 讨论

因青蒿琥酯极微溶于水，所以选N，N-二甲基甲酰胺为溶剂。国家药品标准中没有对青蒿琥酯残留溶剂的测定，为了保证用药的安全性，根据2005年版《中国药典》（二部)[4]的要求，将青蒿琥酯中甲醇和乙酸乙酯的限度定为0.3%和0.5%。经过验证，该方法线性、精密度、回收率、最小检测限等系统适用性试验结果均较好，能够准确、迅速地检测出青蒿琥酯中残留的甲醇和乙酸乙酯。

[1]国家药典委员会编.国家药品标准[S].WS-127（X-103）-2005（1）.

[2]李福荣，史卫锋，夏作理.HPLC-MS法测定白花丹参中丹酚酸B的含量[J].中国药房，2007，18（21)：1637.

[3]毛桂福，郭 涛.RP-HPLC法测定降压一号片中3组分的含量[J].中国药房，2007，18（22)：1738.

[4]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：309.